清华大学医学院生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：中国科学院西北高原生物研究所更多>>
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- 高原鼠兔低氧诱导因子-1α蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2009年
- 高原鼠兔生活在青藏高原海拔3000～5000m的区域,具有极强的低温、低氧耐受能力。低氧诱导因子-1(HIF-1)是一种由HIF-1α和HIF-1β组成的异源二聚体转录因子,在生物体的低氧适应性调节中起着关键作用。低氧主要通过调节HIF-1α蛋白水平来影响HIF-1α的转录活性。本研究用DNA重组技术将高原鼠兔HIF-1α(pHIF-1α)(538/822)编码基因序列亚克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,并在大肠杆菌BL21菌株中进行高效诱导表达,获得可溶性表达产物。将纯化后的GST-pHIF-1α(538/822)融合蛋白作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体。免疫印迹结果表明,制备的抗体能够识别高原鼠兔HIF-1α蛋白。进一步利用亲和纯化的方法对此多克隆抗体进行了纯化。免疫印迹和免疫染色的结果表明,纯化的抗体可以用于检测外源以及内源的高原鼠兔HIF-1α蛋白的表达和定位,为后续的研究提供了重要的实验材料。
- 李红阁赵新全常智杰任芳丽
- 关键词：高原鼠兔低氧诱导因子-1Α原核表达多克隆抗体免疫印迹免疫染色
- 高原鼠兔HIF-1α基因真核表达载体的构建及细胞表达和定位被引量：2
- 2009年
- 利用PCR从克隆质粒PMD18-T-pHIF-1α中扩增鼠兔HIF-1α;构建重组质粒pcDNA3.0/6Xmyc-p HIF-1α,用重组质粒转染HEK-293T,HeLa和COS-7细胞,通过免疫印迹分析,检测HIF-1α表达蛋白在细胞中的分布。EcoRI和XhoⅠ酶切鉴定和序列分析表明,构建的pcDNA3.0/6Xmyc-pHIF-1α真核表达载体序列正确;HIF-1α在真核细胞中能够正确表达,且其表达产物主要存在于细胞核中。
- 李红阁赵新全常智杰任永明王德鹏
- 关键词：高原鼠兔HIF-1Α基因真核表达载体
