东北林业大学生命科学学院发育生物学研究室
- 作品数：38 被引量：80H指数：5
- 相关作者：张丽新冯锐成张丽英鞠晓芳李晗更多>>
- 相关机构：天津医科大学医学检验学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生文化科学更多>>
- 以木糖异构酶基因xylA为选择标记的Gateway系统植物表达载体的构建被引量：4
- 2010年
- 目的:构建以木糖异构酶基因xylA为筛选标记的无抗生素标记Gateway系统植物表达载体。方法:克隆大肠杆菌木糖异构酶基因xylA并用其替换植物表达载体pCAMBIA1301中的hpt基因,利用载体中的多克隆位点将Gateway Binary Vector(pH7WG2D)中酶切位点XbaⅠ和HindⅢ之间包括P35S、T35S、attR1、attR2和CmR-ccdB的片段重组入表达载体pCAMBIA1301中,构建表达载体pCAMBIA1301-xylA-GW,利用含有津田芜菁HY5基因片段的BP反应产物与载体进行LR反应,获得含有目的基因的植物表达载体pCAMBIA1301-xylA-HY5,并导入根癌农杆菌LBA4404中。结果:抗生素筛选及酶切和PCR鉴定表明成功构建了以xylA为筛选标记的无抗生素标记植物表达载体pCAMBIA1301-xylA-HY5。结论:利用木糖异构酶基因xylA结合Gateway克隆技术构建无抗生素标记植物表达载体,可简化、方便植物转基因表达载体构建。
- 阎淑滑周波赵霞李玉花
- 关键词：GATEWAY技术木糖异构酶基因植物表达载体
- 通过整体消化法分离具有集落形成能力的胰腺上皮样细胞
- 2014年
- 目的:胰腺上皮细胞能诱导成表达胰岛素的细胞,成为细胞替代疗法治疗糖尿病的重要来源。胰腺细胞的分离多采用机械剪切后胶原酶消化,本文在以往研究基础上,探索一种能分离得到更纯净的胰腺上皮样细胞的新方法。方法:本研究采用胰腺整体消化的方法,将成体小鼠整个胰腺取下,摘除系膜及大的血管,置于胶原酶中消化20min,用PBS吹打胰腺组织,得到的细胞悬液,离心后去除上清与细胞碎片,用培养基重悬实质细胞,接种于6 cm培养皿中,培养7-10天后得到单细胞集落。结果:整体消化法不剪碎胰腺组织,从而避免多种胰腺细胞的参与,得到较为纯净的胰腺上皮细胞悬液,细胞总体数量小于部分消化法,但是单细胞比率远远高于部分消化法,得到的细胞集落更纯净,不需要去除成纤维细胞,方便筛选及进一步扩大培养。结论:整体消化法能够分离纯化出一群在离体条件下具有强增殖能力、形成大的上皮样集落的细胞。该分离方法方便、快捷,为今后进一步研究成体胰腺干细胞增殖与分化调控机制等问题奠定基础。
- 梁杰孔德麟梁洋李丹冯锐成滕春波
- 关键词：成纤维细胞
- AIF的生物特性与功能被引量：2
- 2012年
- 凋亡诱导因子(AIF)是一种具有氧化还原酶活性的黄素蛋白,在参与线粒体组成和能量代谢方面发挥重要作用。此外,AIF是一种不依赖caspase的凋亡因子,在凋亡刺激影响下,AIF经蛋白酶水解形成57 kD的成熟AIF,释放到胞质中,通过自身的NLS及CypA的辅助作用转位入核,引起染色质凝集和DNA的大片段化,导致细胞凋亡。AIF的这种双功能性是由其结构决定的,特有的插入序列构像的改变可影响其诱导细胞凋亡的活性。本文主要对AIF的结构及其功能作用进行综述。
- 张丽英单寅鑫聂唯天张歌单春华
- 关键词：凋亡诱导因子晶体结构氧化还原酶细胞凋亡钙蛋白酶
- MicroRNA-19b通过靶向抑制转录因子NeuroD1而下调insulin 1的表达
- microRNAs(miRNAs)是一种高度保守的非编码小RNA,它们通过抑制靶基因mRNA的翻译或将其降解,在转录后水平调控基因的表达。miR-17-92基因簇在人和小鼠的多种组织中广泛表达,在肺上皮祖绌胞增殖、B淋巴...
- 张振武张立强丁雷王法孙彦军安洋赵冶李玉花滕春波
- 关键词：胰腺祖细胞
- 文献传递
- 津田芜菁MYB77蛋白的原核表达及纯化
- 2010年
- 目的:建立津田芜菁转录因子MYB77的原核表达系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法:RT-PCR获得MYB77的编码序列,将其克隆至pGEM-T载体中,在上下游引物中分别引入HindⅢ和EcoRⅠ酶切位点,PCR获得带酶切位点的目的片段并将其连接到重组表达载体pGEX-KG中,转化大肠杆菌DE3工程菌株,IPTG诱导重组质粒pGEX-KG-MYB77在大肠杆菌DE3中表达带有GST标签的融合蛋白,超声裂解大肠杆菌,用MagneGST ProteinPurification System纯化目的蛋白,通过SDS-PAGE和Western印迹验证GST-MYB77融合蛋白的表达。结果:重组菌株可以表达GST-MYB77融合蛋白,用Western印迹鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量为55.56×103处检测到目的条带。结论:利用大肠杆菌表达系统获得了较高纯度的GST-MYB77融合蛋白,为进一步研究津田芜菁MYB77蛋白的功能奠定了基础。
- 阎淑滑周波李玉花
- 关键词：津田芜菁融合蛋白原核表达纯化
- 调节小鼠胰腺发育中Ptf1a基因表达的microRNAs的鉴定研究被引量：5
- 2009年
- Ptf1a,又名p48,是Ptf1转录因子的一个亚基,为胰腺命运决定与细胞分化必需的转录因子.最近研究发现,Ptf1a表达的丰度变化与发育中胰腺细胞生长、分化和胰岛β细胞数量密切相关.然而,胰腺细胞中Ptf1a的表达调节机制还不清楚.MicroRNAs(miRNAs)是一类约22nt的非编码小RNA,它们通过切割靶mRNA或抑制靶mRNA的翻译调节基因的表达.一些研究提示,miRNAs参与调控胰腺发育的多个过程.因而推测,miRNAs可能在胰腺发育中参与调控Ptf1a的表达变化.为了验证这一假设,结合两个靶基因预测算法的结果,获得4个可能调控Ptf1a表达的miRNAs.随后,利用双荧光素酶报告系统研究发现,预测得到miRNAs中的miR-18a,miR-145和miR-495能通过结合到小鼠Ptf1a mRNA的3′UTR而有效抑制其表达.还利用qRT-PCR和免疫荧光染色实验研究了miR-18a、miR-145和miR-495与Ptf1a在小鼠胰腺发育过程中的表达模式.结果表明,miR-18a,miR-145和miR-495与Ptf1a mRNA及蛋白质的表达成负相关,进一步说明miR-18a,miR-145和miR-495可能在小鼠胰腺发育中调节Ptf1a的表达.
- 安洋杨艳坤高飞朱宽钰慕谭伟滕春波
- 关键词：MIRNAS胰腺发育小鼠
- 干细胞巢研究进展被引量：4
- 2007年
- 干细胞巢即干细胞周围的微环境构成,一般包括干细胞的相邻细胞、粘附分子及基质等,但不同的干细胞有不同的巢结构。干细胞巢通过不同信号途径调控着干细胞的行为,使干细胞的自我更新和分化处于平衡状态。根据近年来有关干细胞巢的研究,本文从果蝇生殖系干细胞巢、哺乳动物造血干细胞巢、肠干细胞巢、毛囊表皮干细胞巢和神经干细胞巢等五个系统分别综述了干细胞巢的构成及其对干细胞的调节作用,探讨了干细胞巢作用于干细胞的内在机制。
- 鞠晓芳安铁洙滕春波
- 关键词：造血干细胞神经干细胞
- 羽衣甘蓝SRK13-b的克隆及激酶结构域的原核表达
- 提取羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA，利用RT-PCR的方法分离S13-b位点受体激酶基因(SRK16-b)。获得的羽衣甘蓝SRK1...
- 王艳红蓝兴国李玉花
- 关键词：羽衣甘蓝自交不亲和原核表达激酶基因
- 文献传递
- 一群多能成体小鼠胰腺干细胞的分离、鉴定和分化研究
- 本研究通过部分消化结合连续转孔方法从成体小鼠胰腺中分离筛选出了具有强增殖能力、能连续形成单细胞集落的上皮细胞:RT-PCR分析结果表明,这群细胞表达胰腺干/祖细胞相关分子CAⅡ,Cpα-1,Nestin,C-met,CD...
- 王法张立新冯锐成张振武赵冶梁洋张彦龙安铁洙滕春波
- 关键词：胰腺干细胞诱导分化胰岛素分泌糖尿病
- 文献传递
- 一群多能成体小鼠胰腺干细胞的分离、鉴定和分化研究
- 王法张立新冯锐成张振武赵冶梁洋张彦龙安铁洙滕春波
- 关键词：胰腺干细胞诱导分化胰岛素分泌糖尿病
