武汉科技大学生命科学与健康学院 作品数:73 被引量:101 H指数:4 相关机构: 天津科技大学生物工程学院 天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物重点实验室 温州医科大学附属东阳医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖北省自然科学基金 湖北省教育厅科学技术研究项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 轻工技术与工程 更多>>
尾静脉注射及皮下接种B-LCL细胞建立EB病毒相关淋巴瘤动物模型的比较研究 2023年 目的:构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和荧光素酶(luciferase,Luc)双标记的EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染的人B淋巴母细胞系(B lymphoblastoid cell lines,B-LCL)应用于肿瘤模型,并比较尾静脉注射和皮下注射人B-LCL细胞建立小鼠模型的优缺点。方法:通过二代慢病毒转染、嘌呤霉素筛选构建GFP/Luc双标的B-LCL细胞系(B lymphoblastoid cell lines double-tagged with GFP and Luc,B-LCL-GL),接种低、中和高3种剂量的细胞至NPG[(NOD)/Prkdcscid/IL-2Rγ^(null)]小鼠皮下或尾静脉内,建立皮下移植瘤模型与血行性转移瘤模型并成像分析。结果:B-LCL-GL细胞中的GFP阳性细胞比例为92.5%,荧光素酶平均发光强度为4.80E+08 Photons/s,远高于B-LCL组。在血行性转移瘤模型中,连续成像结果表明从第7天到第28天随着肿瘤移植时间的延长,肿瘤最先定植在腹腔后又转移到全身。在皮下移植瘤模型中,第7天时3组小鼠均可以检测到肿瘤细胞在小鼠皮下接种处发出了中心强、周围弱的荧光信号,第28天时高剂量组肿瘤转移到全身。相同接种剂量分别通过尾静脉和皮下接种时,肿瘤生物发光均无显著性差异(P>0.05);小鼠存活情况显示低、中、高各剂量尾静脉注射组在第100天时全部死亡,低剂量和中剂量皮下注射组小鼠带瘤生存长达100天且未出现小鼠死亡,可允许更长时间进行实验。结论:成功构建GFP/Luc双标的B-LCL细胞系,尾静脉注射和皮下注射异种移植B-LCL细胞两种方法均可成功建立EBV-LCLs肿瘤模型,并可通过成像示踪定位和精准定量肿瘤大小,为肿瘤特性研究及抗肿瘤药物筛选提供了研究平台。 方兰兰 董廷 周颖 孙语璐 高阳 熊云青 顾潮江关键词:B细胞淋巴瘤 钙离子调控蛋白在肿瘤血管形成及肿瘤发展中的研究进展 被引量:1 2020年 [目的]探讨钙离子调控蛋白在肿瘤血管生成及肿瘤发展中的作用。[内容]Ca^2+作为第二信使参与生命活动中多种途径的调控,钙离子调控蛋白作为Ca^2+的生物信息传递载体在此过程中起着重要作用。肿瘤组织中血管内皮细胞及平滑肌细胞的激活是肿瘤新生的第一步,新生血管的形成能促进实体瘤生长、侵袭和转移。该文综述了参与钙离子浓度调控的钙调控蛋白S100蛋白、膜联蛋白(Annexin)、钙网蛋白(CRT)、钙调蛋白CaM及其他非直接钙离子结合的钙调控蛋白,这些蛋白在肿瘤细胞中的表达水平,及如何通过调控血管内皮细胞及平滑肌细胞的功能进而影响肿瘤血管生成与肿瘤转移,该综述聚焦重点是肺癌的研究,也对其他常见癌症有涉及。[结论]钙离子调控蛋白是一种重要的调节血管形成和肿瘤发展的一类蛋白,是肿瘤发展的标志物及肿瘤治疗的潜在靶点。 李会 王运丹 王君 张慧敏 李佳蓬 王腊 项园 廖兴华 包乐媛关键词:CA2+ 血管生成 肿瘤发展 高剂量单宁酸对小鼠肠道屏障和肠道菌群的影响 被引量:2 2022年 以正常饮食小鼠和高脂饮食诱导肥胖模型小鼠为对象,研究高剂量单宁酸对小鼠肠道屏障及肠道菌群的影响。通过H&E染色、RT-qPCR、16S rRNA测序等方法进行检测分析。研究发现高剂量单宁酸(400 mg/kg BW)灌胃可使小鼠的体重和进食量降低,增加小鼠体内各肠段内容物的含量,其中结肠内容物的含量显著增加。并且高剂量单宁酸干预后可造成肠道功能损伤及肠道屏障破坏,如杯状细胞数量和隐窝长度减少,及肠道紧密连接蛋白(ZO-1,Occludin及Claudin)表达降低。此外,口服高剂量单宁酸会导致小鼠结肠肠道菌群的多样性发生变化,并增加了SCFA产生菌Alistipes,Ruminococcus和Blautia以及肥胖负相关菌群Alistipes和Oscillibacter的含量。结果表明,高剂量单宁酸对肠黏膜屏障的破坏影响了小鼠对食物的消化吸收,这可能是高剂量单宁酸干预后小鼠体重快速下降的主要潜在原因。另一方面,高剂量单宁酸所造成的肠道菌群变化也会对小鼠的体重产生影响。 何亚伦 曾丽荣 刘雄 张铃 王琼关键词:单宁酸 肠道屏障 肠道菌群 利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体 被引量:3 2018年 本研究旨在人绒毛膜促性腺激素(hCG)的结合多肽的基础上应用嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体,简化单域抗体制备过程,提高多肽生化稳定性。利用单域抗体通用骨架(cAbBCII10),以hCG结合多肽取代互补决定区CDR1或CDR3,合成cAb BCII10嫁接抗体全基因序列并与sfGFP基因序列融合后,插入到带有His标签的原核表达载体pET30a(+)中,成功构建了pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR1/hCGBP1-sfGFP与pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR3/hCGBP3-sfGFP融合蛋白表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达融合蛋白,得到高表达量的可溶性融合蛋白。利用Ni-NTA亲和柱纯化得到纯蛋白,应用SDS-PAGE鉴定纯化的蛋白为正确表达的目标蛋白。通过抗原抗体结合实验,发现hCG结合多肽嫁接到单域抗体通用骨架的互补决定区CDR1或CDR3后都有抗原结合活性,具有相似的抗体滴度,且嫁接到CDR3后的抗原结合活性比CDR1要高(2–3倍)。嫁接抗体基本保留了所用单域抗体框架较为稳定的生化特性,具有一定的热稳定性和较好的碱耐受性,同时,所接入的hCG结合片段对hCG具有较特异的结合活性。 彭静 王琼 程小玲 刘梦雯 王美 辛化伟关键词:单域抗体 CDR3 全自动磁微粒化学发光法快速筛查呋喃类药物残留 被引量:3 2019年 文章通过开发硝基呋喃类药物磁微粒化学发光试剂盒,建立了以磁微粒作为固相载体、化学发光作为检测信号的硝基呋喃类药物残留快速检测方法。结合全自动化学发光仪,用磁微粒化学发光酶联免疫法(MCLIA)同时对4种硝基呋喃类药物(呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)和呋喃妥因代谢物(AHD))在不同来源的鸡肉样、鱼样中的残留量进行定量检测,并与基于超高效液相色谱—三重四极杆串联质谱联用仪的国家标准方法的检测结果进行了对比。共检测鱼肉、猪肉、鸡肉和贝类样品等共计78个样本,与国家标准方法检测结果的符合率在98%以上。结果表明全自动微粒化学发光酶联免疫法具备有自动化程度高,多项目同时检测,检测效率高,检测结果准确可靠等优势,可用于硝基呋喃类药物残留的快速筛查。 梁高道 毛翔 黄常刚 赵沙沙 金伟 张德军 计梦琴关键词:硝基呋喃类药物 科教融合理念下“细胞生物学”双语教学改革与实践 2023年 随着教育国际化的发展,双语教学成为提高学生外语能力和终身学习能力、获取信息和知识的能力,以及培养有战略眼光的生物技术精英人才的有效途径。结合“细胞生物学”双语教学实践,从双语教材的选择、教师科研成果和研究热点转化应用于课堂、双语微课程的建设、本科生进实验室等多个方面,探讨了在科教融合理念下进行“细胞生物学”双语教学改革的举措和成效,旨在为科教融合视域下生物学相关双语课程建设提供有效借鉴。 赵沙沙关键词:细胞生物学 科教融合 双语教学 褪黑激素抑制心室肌细胞晚钠电流增大所诱发的心律失常 2024年 褪黑激素(melatonin,Mel)已有研究表明其具有心脏保护作用,但对离子通道作用尚不清楚。本实验探究了Mel对小鼠心室肌细胞晚钠电流(late-sodium current,I_(Na.L))的抑制作用、在器官水平上的抗心律失常作用及其机制。采用膜片钳技术全细胞模式记录离子电流和动作电位(action potential,AP),利用多通道采集分析系统同步记录小鼠心电图(electrocardiogram,ECG)和单相动作电位(monophasic action potential,MAP)。结果显示,Mel抑制瞬时钠电流(transient-sodium current,I_(Na.T))和特异性I_(Na.L)开放剂2 nmol·L^(-1)海葵毒素II(anemone toxins II,ATX II)诱导增大的I_(Na.L),其IC_(50)值分别为686.615和7.37μmol·L^(-1),且Mel不影响L型钙电流(L-type calcium current,I_(Ca.L))、瞬时外向钾电流(transient outward current,I_(to))和AP。此外,16μmol·L^(-1)Mel可缩短ATX II延长的动作电位时程(action potential duration,APD),并消除了由ATX II诱导的早发后除极(early afterdepolarizations,EADs)。在Langendorff灌流的小鼠心脏上,16μmol·L^(-1)Mel显著降低了室速(ventricular tachycardia,VT)和室颤(ventricular fibrillation,VF)的发生率。综上所述,Mel主要通过阻断I_(Na.L)发挥抗心律失常作用,为Mel的临床新应用提供了重要的理论基础。本研究动物福利和实验过程均遵循武汉科技大学实验动物伦理委员会的规定(批准号:2023130)。 文杰 刘汗峰 杨岩岩 张泽夫 罗岸涛 曹珍珍 马季骅关键词:褪黑激素 动作电位 心律失常 膜片钳 利用在线数据库分析乳腺癌中程序性死亡蛋白-1相关信号通路基因的临床意义 2021年 针对程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)的免疫疗法在乳腺癌中获得了显著成功。但是,并非所有患者都能从抗体治疗中受益。为了鉴定PD-1信号通路相关基因的表达及在乳腺癌中作为预后标志物的潜力,本文通过Oncomine、GTEx数据库和癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库挖掘了PD-1信号通路相关基因的表达特征及预后作用,并且使用STRING数据库对其蛋白质-蛋白质相互作用网络进行了预测。结果显示,PD-1信号通路相关基因的表达在不同的癌症中表现出显著差异。在乳腺癌中,PD-1信号通路相关基因的表达水平显著高于正常组织,并且其表达情况与乳腺癌患者的分期及年龄无关。将乳腺癌患者按照PD-1和程序性死亡蛋白配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)表达的中位值分为高表达组与低表达组,高表达组显示出更好的总体生存率。此外,蛋白质-蛋白质相互作用网络预测结果显示,PD-1与非受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase non-receptor,PTPN)家族的表达高度相关。综上所述,本研究为开展新的基于PD-1的免疫疗法提供了理论支持。 陈路 李习平 胡爽 戴周彤 何晓宏 王志文关键词:乳腺癌 m6A RNA甲基化在肿瘤发生发展中的作用 被引量:8 2019年 m6A 甲基化是于1974 年首次被发现的一种RNA 分子上的甲基化修饰,近年来已成为生命科学领域的研究热点。m6A 修饰在哺乳动物细胞中是动态可逆的,是类似于DNA 和组蛋白修饰的另一种表观遗传调控。这种RNA 化学标记是由m6A“Writers”的蛋白质产生,可以被m6A“Erasers”(即去甲基酶)逆转。此外,“Readers”可以识别含m6A 的mRNA,并相应地调节下游基因的表达。m6A RNA 甲基化参与了RNA 生命周期的各个阶段,从RNA 加工、核输出、翻译调控到RNA 降解,表明m6A 具有影响RNA 代谢相关多方面的功能。最近的研究表明,在不同的组织、细胞系和时空模型中,m6A 的修饰是一个复杂的调控网络,m6A 甲基化与肿瘤的发生和发展密切相关。主要围绕m6A 的分子调控机制、生理意义及其在几种人类肿瘤中的研究进展进行综述,旨在为癌症的早期临床诊断和靶向治疗提供新的思路。 龙文林 郭辉 盛杰 宋如晦 徐瑶关键词:RNA 甲基化 甲基化 肿瘤 HIV-1流行株囊膜假病毒系统的构建及广谱中和抗体中和效价的测定 2023年 人类免疫缺陷病毒主要感染人CD4+T细胞与单核-巨噬细胞,造成高致命性的免疫系统衰竭。近年来,抗HIV-1的广谱中和抗体被用于HIV-1感染的阻断和临床免疫治疗效果显著。然而,针对HIV-1抗体中和活性评价假病毒谱系仍有待补充,本研究旨在构建一种易于量化,生物安全性高的HIV-1流行毒株假病毒谱系,用于定量HIV-1中和抗体抗病毒活力。研究从10种亚型中选取了24株代表性HIV-1国内外流行毒株,构建囊膜表达质粒并与囊膜缺失骨架质粒pNL4-3-copGFP-ΔENV共转染制备慢病毒。通过定量p24抗原和测定TCID50分别获得病毒物理和活性滴度。以本实验室表达、纯化的HIV广谱中和抗体VRC01、3BNC117和N6经多梯度稀释后,分别与200 TCID50的假病毒孵育后,感染敏感指示细胞TZM-bl。随后通过测定荧光素酶活性定量假病毒的感染水平并计算出抗体的中和活性。结果表明:三种广谱中和抗体均能中和24种假病毒并计算获得了IC50。本研究成功建立了24种假病毒,可为HIV的抗体筛选功能验证和疫苗免疫效果提供中和活性评价平台。 高阳 江昊 王茂林 王永腾 王涛 田昊 马妍 吕启航 谢婷雨 孙瑜 张晓龙 孙健红 顾潮江关键词:TCID50