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深圳市微生物基因工程重点实验室: 作品数：19 被引量：171H指数：7; 相关作者：兰英罗时文付仁龙叶湘锋苏东明更多>>; 相关机构：深圳大学广州医学院第二附属医院南京医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生文化科学环境科学与工程更多>>

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铜离子与SALI3-2蛋白的相互作用被引量：2: 2013年; 用1/2 MS固体培养基培养拟南芥幼苗,研究了CuCl2对转Sali3-2基因植株生长的影响,发现转基因植株Sali3-2的表达可提高其耐受Cu2+胁迫的能力.进一步克隆Sali3-2基因,表达并纯化了缺失信号肽的SALI3-2蛋白.利用固定金属离子亲和色谱(IMAC)分析发现,Cu2+能够与SALI3-2蛋白结合.通过荧光光谱及圆二色光谱(CD)进一步研究了Cu2+与SALI3-2蛋白间的键合机理.结果表明,Cu2+可引起SALI3-2蛋白内源性荧光猝灭,其猝灭机制为静态猝灭;Cu2+与SALI3-2蛋白的结合常数为8.89×106,结合位点数为1.6.CD分析显示,Cu2+与SALI3-2蛋白的结合未使SALI3-2蛋白二级结构发生明显改变.由此推测,在高浓度铜离子胁迫下,SALI3-2蛋白通过结合一定数量的Cu2+使蛋白的构象发生改变,这可能是SALI3-2蛋白的表达使植物耐受Cu2+胁迫能力提高的分子机制之一.; 唐玉林高占徐宏贺建芝董一含郑易之; 关键词：铜离子荧光光谱圆二色光谱

美洲大蠊变应原CrPI的表达、纯化与免疫学特性鉴定被引量：13: 2005年; 以阳性噬菌体克隆为模板 ,通过PCR扩增出目的基因片段并克隆入T载体 ,经测序证实为美洲大蠊Periplanetaamericana变应原CrPI后 ,将该基因亚克隆入表达载体pGEX 5X 1。美洲大蠊变应原CrPI在大肠杆菌中得到高效表达 ,但主要以包涵体形式存在于沉淀中。目的蛋白溶于 6mol L盐酸胍并经稀释复性后 ,经GlutathioneSepharoseTM 4B亲和层析 ,纯度达 90 %以上。以蟑螂过敏病人血清进行免疫印迹检测 ,结果显示重组变应原具有良好的IgE结合活性。; 高波刘志刚邢苗徐宏罗时文赖仞; 关键词：美洲大蠊 PI 蛋白表达免疫印迹

粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)的克隆表达、纯化及免疫学特性被引量：22: 2006年; 粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)是粉尘螨Dermatophagoidesfarinae主要变应原,可引发Ⅰ型变态反应。挑取纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段,产物连接入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET24a表达载体上,得到重组质粒pET24a-DerfⅠ,工程菌经IPTG诱导培养,高效表达出DerfⅠ蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。表达产物经亲和层析纯化,用Westernblot及ELISA方法检测免疫学活性,结果表明目的蛋白具有良好的免疫原性。; 朱健琦刘志刚高波吉坤美邢苗; 关键词：粉尘螨变应原纯化

BURP蛋白家族与植物对非生物胁迫的响应被引量：4: 2015年; BURP蛋白家族是由一组在C-端含保守的BURP结构域的蛋白质组成,为植物界所特有。这类蛋白质在植物中普遍存在,参与植物的多种生物学过程,并在植物对胁迫的响应过程中起重要作用。该文在简要介绍了BURP蛋白结构特点及分类的基础上,对非生物胁迫下BURP蛋白基因的表达模式、BURP蛋白的细胞定位、功能及与植物耐受非生物胁迫的关系进行了综述。; 米子岚钟活权江年琼唐玉林; 关键词：胁迫响应细胞定位

纳米氧化铜对生物体的毒害作用及机理被引量：3: 2015年; 随着纳米技术的飞速发展,人工纳米材料被广泛应用到能源、医药、军事、环保等各个领域。人工纳米氧化铜(Cu O NPs)由于其独特的物化性质和广泛的用途备受人们关注,其在生产及使用过程中形成的颗粒物有意无意地会进入土壤和水体中,进而对生物体造成潜在危害。现就近几年来Cu O NPs对不同生物体,包括动物、植物、细菌等以及细胞和基因方面的纳米效应及致毒机制进行了分析和综述。对Cu O NPs毒性的全面认识将为减轻人工纳米颗粒物的环境毒性研究提供参考,并提出了今后相关研究的重要方向。; 聂光丽何蓉唐玉林; 关键词：纳米氧化铜毒害致毒机理生物体

屋尘螨Ⅰ类变应原Der p1的体内定位被引量：11: 2005年; 对过敏性疾病主要过敏原屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinusⅠ类变应原(Der p1)进行了抗原定位研究。选用经表达和纯化的Der p1抗原蛋白,按常规方法免疫小鼠,分离血清获抗重组Der p1的抗体(Ⅰ抗),用抗鼠IgG荧光抗体为Ⅱ抗,屋尘螨经石蜡切片,在荧光显微镜下对其特异性变应原的定位进行观察。HE染色显示屋尘螨消化系统占据大部分体腔。组织免疫荧光发现屋尘螨Ⅰ类变应原主要定位于螨的中肠组织及肠内容物,而螨的生殖系统、排泄系统等脏器以及几丁质甲壳均呈阴性反应。据此认为屋尘螨Ⅰ类变应原存在于螨的肠内容物和中肠组织中。; 刘志刚李盟包莹付仁龙苏东明; 关键词：屋尘螨 P1 抗原定位 HE染色免疫染色

粉尘螨cDNA文库的构建被引量：4: 2004年; 目的构建粉尘螨cDNA表达文库。方法提取粉尘螨总RNA和mRNA,以NotIdT18作为引物反转录合成第一链,置换法合成第二链。加EcoRI接头,经NotI酶切后,应用定向克隆技术将相应dscDNA片段插入λExCell/NotI/EcoRI/CIP载体的NotI和EcoRI双酶切位点间,经包装、转染宿主菌,构建成cDNA文库。检测文库库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果已成功构建一个含4.8×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平均约1.2kb。结论所建文库容量及插入片段大小适合对粉尘螨特异性重组变应原的进一步研究。; 刘志刚周珍文高波罗时文陈淑贞张兆松; 关键词：粉尘螨 CDNA文库

家蚕蚕蛹变应原的鉴定、分离与纯化被引量：19: 2006年; 目的鉴定、分离和纯化大造(Dazao)品系家蚕(Bombyxmori)的蚕蛹粗提液中的变应原蛋白质组分,为家蚕变应原的蛋白质组学和功能基因组学深入研究奠定基础。方法采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blotting,鉴定了家蚕蚕蛹粗浸液中变应原蛋白质分子,并通过阴离子交换和凝胶过滤层析分别对家蚕蚕蛹变应原蛋白质进行初步纯化。结果在家蚕蚕蛹粗浸液中含有表观分子量分别为80000及30000的蚕蛹变应原;从家蚕蛹全虫粗提液中初步分离到分子量为30000的蛹变应原蛋白组分。结论分离得到的家蚕蚕蛹变应原蛋白组分可用于系统研究家蚕过敏原蛋白分子的蛋白质组学和功能基因组学。; 张杰刘志刚林格叶湘锋刘瑞涛; 关键词：离子交换层析

蒿属花粉cDNA文库的构建和初步鉴定被引量：14: 2004年; 目的构建蒿属花粉cDNA表达文库。方法应用定向克隆技术将相应dscDNA片段插入λExCell/NotI/EcoRI/CIP载体的NotI和EcoRI双酶切位点间,经包装、转染宿主菌,构建成cDNA文库。检测文库库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果成功构建了一个含有5.6×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平均约1.3kb。结论所建文库容量及插入片段大小适合对蒿属花粉特异性重组变应原的进一步研究。; 刘志刚吉坤美高波何毅华黄妩姣吴晓蔓; 关键词：蒿属花粉重组变应原 CDNA文库

粉尘螨Ⅱ类变应原的克隆表达、纯化及其免疫学特性被引量：6: 2006年; 目的获得大量具有良好的IgE结合活性的Der fⅡ重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Der fⅡ片段,产物连接进入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET-24a表达载体上,得到重组质粒pET-Der f2,工程菌经IPTG诱导培养,明显表达出Der fⅡ蛋白,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,用Western blot检测免疫学活性。结果成功提取粉尘螨的总RNA,扩增出编码129个氨基酸的长度为387个碱基对的核苷酸片段。序列分析结果和Genebank上的基因序列(D10448)同源性98%,其中有6个碱基不同。使用高效表达的原核载体pET,所得产物的5′端含有抗原性极小的6个组氨酸标签。表达质粒在E.coliBL21 star中得到高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,目的蛋白具有良好的变应原性。结论成功构建了粉尘螨Ⅱ类变应原的原核表达载体,并纯化了具有免疫特性的重组蛋白,为进一步开展Der fⅡ蛋白和重组疫苗研究奠定了基础。; 朱健琦刘志刚高波吉坤美邢苗; 关键词：粉尘螨变应原纯化

深圳市微生物基因工程重点实验室

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