内蒙古自治区自然科学基金(200408020909)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 人DR5胞外区域克隆及在大肠埃希菌中表达被引量：1
- 2008年
- 目的克隆人死亡受体5(DR5)cDNA的胞外区域(eDR5),构建原核重组表达载体pGEX-eDR5,使eDR5在大肠埃希菌中表达。方法采用RT-PCR(反转录PCR)方法从人肝癌细胞HepG2中获得eDR5,然后克隆到pMD19-T载体上进行测序,得到正确的基因片段。经双酶切将目的基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1上,测序正确后,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达GST-eDR5融合蛋白,最后用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测目的蛋白的表达量。结果重组克隆载体pMD-eDR5经测序鉴定序列正确。构建的融合表达载体pGEX-eDR5在大肠埃希菌中表达,可溶性目的蛋白占细菌总蛋白约19%。结论成功克隆了人DR5 cDNA的胞外区域,并在大肠埃希菌中表达。为下一步分离纯化人DR5重组蛋白,制作多克隆抗体提供基础依据。
- 邢万金包晓红
- 关键词：死亡受体5基因克隆原核表达
