国家自然科学基金(31172331)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
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- 环介导等温扩增技术的引物设计与筛选研究被引量：1
- 2014年
- [目的]研究引物设计与非特异扩增之间的关系.[方法]以单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）的特异性基因hlyA与沙门氏菌（Salmonella）的特异基因invA为例设计引物,进行环介导等温扩增.[结果]就环介导等温扩增的任何2条引物而言,如果2条引物3’端的3～4碱基在同一条引物上都有2个互补序列,在常用的LAMP反应体系与反应条件下,必然有非特异性扩增,LAMP引物设计与筛选应避免这种情况出现.[结论]按照该试验的原则设计引物,可降低非特异性扩增.
- 王德国王永真王爱萍
- 关键词：引物设计
- 增加环介导等温扩增灵敏度与特异性的两种实用方法被引量：3
- 2014年
- 拟以单核细胞增生李斯特菌的特异基因prfA为研究对象,采用二甲基亚砜(DMSO)以及Touchdown-LAMP增加环介导等温扩增的灵敏度与特异性.结果表明,在环介导等温扩增反应体系中添加7.5%的DMSO并采用Touchdown-LAMP方法,克服了假阳性扩增,灵敏度增加了100倍,在灵敏度与特异性方面优于现有的商业化试剂盒.
- 王德国
- 关键词：环介导等温扩增
- 环介导等温扩增技术的假阳性扩增研究被引量：4
- 2015年
- 将环介导等温扩增技术最初报道中的M13噬菌体引物排列成四种组合FIP+BIP+F3+B3、FIP+BIP+F3、FIP+BIP+B3、FIP+BIP,分别在不加M13噬菌体模板的情况下以相同的反应体系及反应条件进行等温扩增,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物,分析环介导等温扩增中产生假阳性的原因.结果表明,关于环介导等温扩增技术最初报道的试验具有非特异性扩增现象,环介导等温扩增的假阳性主要是引物二聚体引起的而并非是气溶胶污染导致的.
- 王德国王永真王爱萍
- 关键词：脱氧核糖核酸环介导等温扩增假阳性
- 猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及其可溶性分析被引量：7
- 2015年
- 旨在表达出囊膜糖蛋白E2,为猪瘟病毒的亚单位标记疫苗研制、血清学诊断等提供依据。以pMD-18T-E2为模板,扩增猪瘟病毒E2基因,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-E2,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达。结果显示,通过SDS-PAGE凝胶电泳可检测到46ku的蛋白条带,与预期结果一致;目的蛋白主要以包涵体形式存在。将E2蛋白变性纯化后,分别采用透析复性和稀释复性2种方法进行复性,成功得到可溶性E2蛋白。
- 周景明李鹏飞张改平祁艳华裴艳艳扣莉云蒋敏王爱萍
- 关键词：原核表达包涵体蛋白复性
- 猪瘟病毒E0蛋白在PK-15中的表达与鉴定
- 2016年
- [目的]研究猪瘟病毒(CSFV)E0基因在PK-15细胞中的表达特性。[方法]通过PCR方法克隆了E0基因全长681 bp的片段,连接到真核表达载体p EGFP-C1上,构建出重组质粒并进行双酶切鉴定。[结果]成功构建出重组质粒p EGFP-E0。通过双酶切鉴定,PCR鉴定和测序确定了目的基因大小一致,插入位置完全正确后,利用Lipofecta mine 2000转染试剂盒将重组质粒转染到猪肾细胞PK-15中,转染48 h后在荧光显微镜下观察,可以看到大多数细胞呈现出绿色荧光,说明转染成功。通过G418筛选后,在荧光显微镜下仍能观察到部分细胞能够呈现出绿色荧光,这表明重组融合蛋白p EGFP-E0在PK-15细胞中得到了表达。[结论]获得的能够表达重组融合蛋白的细胞克隆,为进一步大量表达与纯化E0糖蛋白、制备其单抗以及研究猪瘟病毒E0糖蛋白的生物学功能奠定了基础。
- 周景明刘芳冰祁艳华张改平栗宁王爱萍
- 关键词：猪瘟病毒增强型绿色荧光蛋白PK-15细胞
