江苏省自然科学基金(BK2007170)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：刘景晶曹荣月鲁勇孔婧林明更多>>
- 相关机构：中国药科大学新乡医学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组猪羧肽酶原B在大肠杆菌中的表达与复性研究被引量：2
- 2010年
- 利用大肠杆菌表达系统,表达猪源羧肽酶原B蛋白包涵体,并对包涵体的体外复性条件进行优化。对猪源羧肽酶原B基因进行设计,优化稀有密码子,并将基因片段插入到pET28a载体中,构建表达质粒pET28a-proCPB,并转化入BL21(DE3)中。通过乳糖诱导表达得到包涵体。通过检测酶的比活力来考查复性液的pH、蛋白终浓度、氧化还原对比例、复性时间、复性温度对复性程度的影响。最终确定的体外稀释复性条件为:复性液成份为100mmol/L Gly-NaOH、pH=9.5、GSH与GSSG的比例为1∶0.8(GSH为1mmol/L)、蛋白终浓度为200μg/ml、复性温度为25℃、复性时间24h。通过检测,复性液中酶的比活力为11.7u/mg,经过DEAE纯化后酶的比活力可达到73u/mg。
- 张笑岩张会勇范豪李泰明刘景晶曹荣月
- 关键词：重组羧肽酶B大肠杆菌稀释复性
- 一种新型速效人胰岛素类似物的制备及药效学研究被引量：3
- 2009年
- 制备一种新型速效胰岛素类似物PInsulin(PIns),利用Autoflex ToF/ToF质谱法对其进行鉴定,采取福林-酚试剂法测定其浓度;以人胰岛素、赖脯胰岛素作为对照品肌肉注射测定其对雄性SD大鼠的降血糖作用,并通过分子筛层析法考察其自聚合性质。质谱法测得PIns的Mr为6286.50,浓度为0.227mg/ml;动物实验表明注射PIns后,大鼠血糖降至最低基础血糖浓度百分数和恢复至基础血糖浓度所需时间均显著小于人胰岛素(P<0.01);注射PIns后基础血糖浓度百分数的最低值与人胰岛素相当;分子筛层析法结果显示PIns的滞留时间大于人胰岛素,表明PIns自身聚合能力低于人胰岛素,是一种具有良好发展前景的新型速效胰岛素类似物。
- 尤科军鲁勇林明孔婧曹荣月刘景晶范豪宗莉
- 关键词：胰岛素类似物降血糖
- 重组人胰岛素pET28a-IHI下游工艺研究
- 2010年
- 目的对含有重组人胰岛素原基因的大肠杆菌工程菌pET28a-I HI摇瓶发酵,并探讨采用磺酸化方法对包涵体蛋白纯化复性的工艺。方法工程菌pET28a-I HI经摇瓶发酵、机械破碎得到包涵体,包涵体经过磺酸化、等电点沉淀、DEAE-52柱层析三步纯化后采用15%SDS-PAGE电泳检测,经过复性,酶切,DEAE-52纯化后,冷冻干燥,样品进行HPLC检测以及整体生物学活性实验。结果工程菌表达量约在30%左右,经过三步纯化,包涵体纯度可达98%以上,酶切之后经质谱检测,与人胰岛素标准品相对分子质量一致,而且动物实验降血糖效果明显,1 L发酵液最终可得到人胰岛素140mg。结论该工艺耗时短,效果好,成本较低。
- 杨亚男鲁勇刘景晶曹荣月
- 关键词：基因工程重组人胰岛素纯化
