国家自然科学基金(30171089) 作品数:8 被引量:34 H指数:3 相关作者: 黄常志 赵玫 袁兴华 王晓霞 余权 更多>> 相关机构: 中国医学科学院肿瘤医院 中国医学科学院北京协和医学院 北京大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
热休克蛋白gp96表达对B16F10细胞生长的影响 2004年 目的 探讨热休克蛋白gp96表达对B16F10细胞株生物学行为的影响。 方法 构建gp96正义和反义真核重组表达质粒 pcDNA hgp96和 pcDNA anti96P ,并转染B16F10细胞 ,G 418筛选稳定转染的阳性细胞克隆 ,然后Western印迹分析细胞gp96的表达情况 ,绘制细胞生长曲线 ,观察 gp96表达对细胞生长特性的影响。 结果 转染了 gp96正义表达质粒的B16F10细胞gp96表达水平升高 ,细胞生长缓慢 ,倍增时间延迟 ;反义gp96表达质粒明显抑制了B16F10细胞 gp96表达 ,使细胞倍增时间提前。结论 热休克蛋白 gp96表达水平升高可抑制肿瘤细胞的生长 ,而 gp96表达水平下降则肿瘤细胞生长速度加快 。 岳培彬 赵玫 林梁 余权 王晓霞 黄常志关键词:热休克蛋白 细胞生长 生物学行为 骨唾液酸蛋白与肿瘤 被引量:1 2004年 骨唾液酸蛋白 (BSP)是存在于细胞外基质中的一种高度磷酸化和糖基化的分泌性非胶原蛋白 ,主要分布在矿化组织中 ,参与骨骼的矿化、转换、分化以及骨吸收等生理病理过程。近年来 ,BSP在骨转移瘤中的高表达提示它在肿瘤的生长、浸润和转移中发挥重要作用。现主要综述BSP的结构功能、调节机制及其与肿瘤的关系。 王晓霞 黄常志关键词:骨唾液酸蛋白 肿瘤 糖基化 磷酸化 ILK、Hsp90相互作用及在胃癌中表达的研究 被引量:4 2005年 目的:探讨ILK与H sp90在胃癌组织中的相互作用,了解它们及相关因子E-cadherin与胃癌临床病理的关系,以及胃癌患者血清中手术前后ILK与H sp90含量的变化。方法:用免疫共沉淀,蛋白杂交的方法研究ILK与H sp90的直接相互作用,用免疫组织化学方法测定ILK,H sp90,E-cadherin和M M P2在胃癌及癌旁组织表达,比较它们与胃癌临床病理的关系,使用Elisa方法,测定ILK与H sp90在胃癌患者血清中手术前后含量的变化。结果:用ILK抗体免疫沉淀下来的蛋白中检测有H sp90蛋白存在。ILK在40例胃癌组织中有28例表达阳性,阳性率为70%,而H sp90则在37例有高表达,阳性率为92.5%。其中28例ILK阳性者中有27位H sp90表达阳性。高分化胃癌分别有50%和75%表达,而低分化者为75%和100%。E-cadherin在正常胃粘膜上皮细胞均为阳性表达,而只有40%的胃癌组织呈阳性。其中高分化者有75%阳性表达,而低分化者仅为32.1%,没有转移的为90%,有转移的仅是23.3%。M M P2在癌组织中的表达阳性率为75%,高于癌旁正常组织,高分化者有50%阳性表达,而低分化者为78.6%,没有转移的为50%,有转移的是83.3%。用Elisa方法测定血清中ILK,H sp90抗体的含量。结果表明,手术前ILK、H sp90的含量分别为171.0ng/m l和199.0ng/m l,而手术后分别下降为142.6ng/m l和161. 刘骞 赵玫 赵平 王晓霞 袁兴华 余权 黄常志关键词:胃癌 HSP90 ILK PI3K p55γ调节亚单位N末端24个氨基酸抑制胃癌细胞增殖 被引量:4 2005年 目的 p55γ是磷脂酰肌醇3 激酶(PI3K)的调节亚单位之一,在调节PI3K活性上具有重要的作用,本研究旨在观察p55γN末端24个氨基酸对胃癌细胞增殖的影响。方法 用脂质体介导将表达质粒pEGFPC1和pEGFPC24转染MGC 803细胞,通过荧光显微镜鉴定转染基因的蛋白表达;MTT法观察转染细胞的生长情况;软琼脂集落形成实验确定单个细胞的增殖力;最后用流式细胞仪分析细胞周期时相的变化。结果 (1)建立了稳定表达GFP和GFP N24的MGC 803细胞系,分别命名为C1/803和C24/803。(2)与对照组C1/803相比,C24/803细胞生长速度减慢,其在软琼脂中集落形成率下降了86.8%。(3)C1/803和C24/803细胞周期G0 /G1期百分率分别为52.5%和59.5%,两者相比差异有显著性(P<0.05)。结论 p55γN末端24个氨基酸能够抑制胃癌细胞的生长和增殖,引起细胞周期G1 /S期延长,提示N24p55γ可能成为治疗胃癌的潜在的分子药物。 孙晓杰 赵玫 袁兴华 王晓霞 马萍 孙跃民 黄常志关键词:PI3K MGC-803细胞 细胞增殖 HEAT SHOCK PROTEIN gp96 AND CANCER IMMUNOTHERAPY 被引量:2 2002年 Heat shock protein gp96 is a highly conserved and monomorphic glycoprotein in the endoplasmic reticulum.It functions as molecular chaperone and can associate with a variety of antigenic peptides noncovalently in vivo and in vitro. Recent studies have indicated that gp96 molecules participate in major histocompatibility complex
class I - restricted antigen presentation pathway. Immunization of mice with gp96 preparations isolated from cancer cells can elicit a cancer - specific protective T cell immune response that is recallable, which is a prerequisite for gp96 as a therapeutic vaccine against cancers. The immunogenicity of gp96 molecules has been attributed to the antigenic peptides associated with them. These phenomena provide a new pathway for cancer immunotherapy. The mechanism that the gp96 -peptide complex induces specific immune response and the explorations for gp96 - peptide complex as a therapeutic cancer vaccine are reviewed. 岳培彬 杨树德 黄常志关键词:热休克蛋白 GP96 免疫疗法 HSPS 疫苗 PI3K p55PIK调节亚单位N末端抑制胃癌细胞株MGC803生长及其机制 被引量:2 2006年 背景与目的:p55PIK是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的调节亚单位之一。p55PIK依赖于其N末端独特的24个氨基酸结合Rb,这24个氨基酸的表达能抑制细胞周期的进程。本研究目的在于观察p55PIKN末端24个氨基酸的表达对胃癌细胞增殖和生长的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:通过Lipofectamine介导,用pEGFP-N24表达质粒转染MGC803细胞,用Westernblot鉴定融合蛋白GFP-N24在MGC803细胞中的瞬时表达;MTT法检测转染细胞的生长情况;克隆形成实验观察N24p55PIK过表达对细胞克隆形成能力的影响;动物实验观察表达N24p55PIK的细胞在裸鼠体内的成瘤能力;Westernblot法分析N24p55PIK表达对细胞周期蛋白CyclinD1表达的影响。结果:N24p55PIK在MGC803细胞中能够有效表达,但其表达量明显低于对照组。与对照组细胞相比,N24p55PIK的表达使细胞生长速度减慢,细胞倍增时间明显延长;表达N24p55PIK的细胞在克隆形成的数量上与对照组相比差异无显著性,但在克隆体积上明显小于对照组。表达N24p55PIK的MGC803细胞在裸鼠中的成瘤能力有所下降,其所形成肿瘤的重量和体积分别为(0.398±0.244)g和(408±268)mm3,而空载体对照组分别为(0.763±0.193)g和(829±271)mm3,两组相比差异有显著性(P<0.05)。N24p55PIK在MGC803细胞中的表达抑制CyclinD1的表达。结论:p55PIK调节亚单位N末端24个氨基酸的表达在体外和体内均能抑制肿瘤细胞的生长;减少CyclinD1的表达可能是其发挥作用的主要机制;来源于PI3K调节亚单位p55PIK的N24肽在肿瘤的治疗上可能具有潜在的应用前景。 孙晓杰 赵玫 袁兴华 余权 郑利民 方明镜 黄常志关键词:P13K P55 胃癌细胞 SGK研究进展 被引量:21 2002年 血清和糖皮质激素调节蛋白激酶 (SGK)是一个与 PKB/AKT等第二信使蛋白具有极高的同源性的Ser/Thr蛋白激酶。与目前已发现的绝大多数蛋白激酶只受磷酸化 /去磷酸化调节机制显著不同的是 ,SGK还存在快速转录水平上的调节机制。它可能作为多种细胞信号传导通路和细胞磷酸化级联反应的一个功能性交汇点 ,参与离子通道调节、细胞增殖、存活的信号传导。本文就 SGK的结构、活性调节。 周启兵 黄常志关键词:SGK PKB/AKT 信号传导 骨唾液酸蛋白与乳腺癌细胞黏附性的相关性 2010年 [目的]探讨骨唾液酸蛋白(BSP)与人乳腺癌细胞黏附性的相关性。[方法]构建pCDNA3.1-myc-hisA(+)-BSP真核表达载体,在COS7细胞中表达并纯化BSP全长蛋白。以纤黏连蛋白、胶原和重组BSP蛋白包被96酶标板,细胞黏附实验检测MCF-7和MDA-MB-231在上述基质的黏附性。构建BSP正义和反义表达载体,及同pCDNA3.1(-)空载体稳定转染人乳腺癌细胞MCF-7获得稳定细胞株。细胞黏附实验检测不同BSP表达水平的各组MCF-7稳定细胞株在纤黏连蛋白(FN)和胶原(collagen)上的黏附性。免疫细胞化学检测各组MCF-7稳定细胞株中E-cadherin的表达。[结果]成功表达人骨唾液酸蛋白并证实其具有黏附性。分析不同BSP表达水平的乳腺癌细胞在不同基质上黏附性,结果显示转染正义BSP的MCF-7细胞在不同基质上的OD595值(FN:1.93±0.06;collagen:1.82±0.15)显著高于反义组(FN:0.83±0.19;collagen:0.89±0.08)、空载体转染组(FN:1.49±0.18;collagen:1.44±0.09)和亲本细胞组(FN:1.52±0.27;collagen:1.42±0.12),有统计学差异(P<0.05)。转染正义BSP的MCF-7细胞中E-cadherin的表达与其它组别相比明显降低。[结论]BSP以RGD序列介导细胞黏附,其表达水平与乳腺癌细胞黏附性相关。 王晓霞 赵玫 赵新华 蔡恬静 袁兴华 余权 黄常志关键词:骨唾液酸蛋白 乳腺癌 细胞黏附