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重组大肠埃希菌外膜蛋白C的表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：2: 2015年; 采用分子克隆方法获得大肠埃希菌外膜蛋白Omp C表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得Omp C蛋白,免疫小鼠制备Omp C蛋白多克隆抗体。ELISA法证实Omp C抗血清滴度达1∶6 400倍,Western blotting发现Omp C抗血清具有很好的特异性。通过DNAMAN软件对Omp C序列同源性分析显示不同细菌间存在较高同源性,采用MEGA软件对Omp C的系统进化分析发现肠道致病菌亲缘关系更近。为Omp C蛋白免疫学功能研究奠定基础。; 俱雄陈春琳刘祥王成祥王令吴三桥张涛; 关键词：多克隆抗体 WESTERN BLOTTING

小鼠骨桥蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：5: 2015年; 为探索骨桥蛋白(OPN)调控骨代谢及与肿瘤的关系,本试验利用DNAMAN与Mega 5.02软件分析OPN蛋白系统进化关系;采用RT-PCR与分子克隆方法制备OPN蛋白表达载体;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素浓度梯度复性获得OPN蛋白,免疫小鼠制备OPN蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Western blotting检测抗血清特异性。OPN序列的同源性比对分析发现,在不同进化层次动物中均存在Arg-Gly-Asp(RGD)短肽重复序列;OPN序列系统进化分析显示,OPN在动物间具有明显的进化趋势;提取小鼠肝脏RNA,OPN重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果及蛋白表达、纯化条带大小均与预测一致;ELISA法确认OPN抗血清滴度达1∶1 600;Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。结果表明本试验对OPN序列进行了遗传进化分析,成功克隆、表达、纯化及复性OPN蛋白,并制备、鉴定了小鼠多克隆抗体。; 刘祥陈春琳王杨科俱雄吴三桥张涛; 关键词：多克隆抗体 ELISA WESTERN BLOTTING

重组大肠埃希菌外膜蛋白OmpT的载体构建和表达条件优化及多克隆抗体制备被引量：6: 2015年; 通过分子克隆,获得了Omp T蛋白的表达菌株;利用切胶纯化,获得了Omp T蛋白。用Omp T蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度为1∶1 600,用Western Blotting法检测抗血清特异性较好。采用正交试验,获得Omp T菌株的适宜表达条件为诱导菌液OD600 nm为1.0,IPTG添加终浓度为0.3 mmol/L,诱导时间为8 h,诱导温度32℃;适宜培养条件为葡萄糖质量分数0%,转速230 r/min,装液量50 m L。; 刘祥俱雄陈春琳; 关键词：大肠埃希菌多克隆抗体

溶藻弧菌外膜蛋白OmpU的克隆、表达条件优化及多克隆抗体制备被引量：3: 2016年; Omp U蛋白为溶藻弧菌主要外膜蛋白,具有很好的免疫原性,在疫苗上有很好的应用前景。本试验通过分子克隆获得Omp U蛋白的表达菌株,利用切胶纯化获得Omp U蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度为1∶3200倍,WesternBlotting法检测抗血清特异性较好。通过正交试验,获得Omp U菌株的最佳表达条件为:诱导时菌液OD600值1,加IPTG终浓度0.1mmol/L,诱导时间8 h,温度32℃;最佳培养条件为:葡萄糖浓度0.4%,转速230 r/min,装液量50 m L。为Omp U工业发酵、蛋白功能与疫苗开发研究奠定基础。; 刘祥; 关键词：溶藻弧菌多克隆抗体正交试验

福氏志贺菌2型外膜蛋白A的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：6: 2015年; 福氏志贺菌外膜蛋白A是细菌入侵宿主细胞的作用蛋白,同时激活机体的免疫机制对抗细菌的感染,在动物疫苗上有很好的应用前景。采用分子克隆方法获得福氏志贺菌OmpA蛋白表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得OmpA蛋白,免疫小鼠制备OmpA蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Western blot检测抗血清特异性;DNAMan与MEGA软件分析OmpA蛋白系统进化关系。结果显示,OmpA重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果,以及蛋白表达、纯化条带大小与预测一致;ELISA法确认OmpA抗血清滴度达1∶1 600,Western blot证实抗血清具有很好的特异性。OmpA序列系统发生分析发现不同种的致病菌存在同源性,尤其C-端同源性较高,并且不同种志贺菌具有更高的同源性。表明成功制备OmpA蛋白和小鼠多克隆抗体,为OmpA蛋白功能与疫苗开发研究奠定了基础。; 刘祥; 关键词：福氏志贺菌多克隆抗体酶联免疫吸附试验 WESTERN BLOT

重组绿脓杆菌外膜蛋白OprF的表达、纯化及多克隆抗体制备与鉴定: 2015年; 绿脓杆菌外膜蛋白Opr F可有效激活机体的免疫机制对抗细菌的感染,在疫苗上有很好的应用前景。采用分子克隆方法获得绿脓杆菌外膜蛋白Opr F表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得Opr F蛋白,免疫小鼠制备Opr F蛋白多克隆抗体。ELISA法表明,Opr F抗血清滴度达1∶12 800倍,Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。通过DNAMAN软件对Opr F序列同源性分析发现其C端在不同细菌间存在较高同源性;采用MEGA软件对Opr F的系统发生分析发现假单胞菌属细菌的亲缘关系高于其它属细菌。; 陈春琳刘祥俱雄; 关键词：多克隆抗体 BLOTTING 系统发生分析

铜绿假单胞菌外膜蛋白H原核表达、多克隆抗体制备及免疫保护作用被引量：7: 2015年; 目的为铜绿假单胞菌外膜蛋白H(OprH)工业发酵与疫苗开发研究奠定基础。方法采用分子克隆技术构建OprH蛋白的表达菌株,通过正交试验设计筛选OprH菌株的最佳培养条件与表达条件。利用切胶纯化获得OprH蛋白并免疫小鼠,制备OprH蛋白多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度,蛋白质印迹法检测抗血清特异性;对小鼠免疫OprH蛋白,攻毒铜绿假单胞菌,检测蛋白的免疫保护作用。结果 OprH重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果,以及蛋白表达、纯化条带大小与预测一致。OprH菌株最佳培养条件为转速230r/min,葡萄糖浓度0%,装液量50mL;最佳诱导表达条件为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷终浓度0.3mmol/L,诱导时菌液D600值0.8,温度32℃,诱导时间3h。ELISA法获得OprH抗血清滴度达1∶1 600,蛋白质印迹法证实抗血清具有很好的特异性。OprH免疫小鼠激活的特异性免疫对小鼠铜绿假单胞菌感染的保护率达到46.15%,与对照相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建OprH表达载体,纯化获得OprH蛋白,制备OprH蛋白多克隆抗体,实验结果表明OprH蛋白对小鼠铜绿假单胞菌感染具有免疫保护作用,并获得OprH蛋白菌株的最佳培养条件与表达条件。; 刘祥; 关键词：铜绿假单胞菌多克隆抗体

大肠埃希菌外膜蛋白OmpC的原核表达与免疫保护作用研究被引量：11: 2015年; Omp C蛋白为大肠埃希菌主要外膜蛋白,具有提高宿主免疫能力的作用,在疫苗上有很好的应用前景。通过分子克隆获得Omp C蛋白的表达菌株;Western-blotting法证实Omp C抗体可与表达的重组蛋白很好的结合。利用切胶纯化获得Omp C蛋白,免疫小鼠产生抗体,然后攻毒大肠埃希菌肠道致病菌,结果显示保护率达到63.64%,与对照相比较具有显著差异。利用正交试验,获得Omp C菌株的最佳表达条件为:诱导时菌液OD600值0.5,IPTG终浓度0.3 mmol/L,诱导时间8 h,温度32℃;最佳培养条件为:葡萄糖浓度0%,转速230 r/min,装液量50 m L。为Omp C工业发酵、蛋白功能与疫苗开发研究奠定了基础。; 俱雄陈春琳刘祥张涛吴三桥张晓娟; 关键词：免疫保护

溶藻弧菌附着定植因子ACFA原核载体构建、表达条件优化及多克隆抗体制备被引量：18: 2015年; 为构建水产致病菌溶藻弧菌附着定植因子ACFA原核表达载体,优化ACFA蛋白的诱导表达条件,制备ACFA蛋白小鼠多克隆抗体。通过分子克隆获得ACFA蛋白的表达菌株,利用切胶纯化获得ACFA蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度为1∶3 200倍,Western-Blotting法检测抗血清特异性较好。通过正交试验,获得ACFA菌株的最佳表达条件为:诱导时菌液OD600值0.5,加IPTG终浓度0.3 mmol/L,诱导时间8 h,诱导温度32℃;最佳培养条件为:葡萄糖浓度0,转速230 r/min,装液量50 m L。; 刘祥; 关键词：溶藻弧菌多克隆抗体

溶藻弧菌外膜蛋白OmpU的原核表达、抗原性鉴定与生物信息学分析被引量：5: 2015年; 对溶藻弧菌外膜蛋白OmpU进行分子克隆构建,抗原性生物信息学分析,为疫苗的开发奠定了基础。通过分子克隆获得OmpU蛋白的原核表达菌株,重组表达后利用切胶纯化获得OmpU蛋白,免疫小鼠制备抗血清,Western Blotting检测发现OmpU蛋白具有很好的抗原性。采用在线软件预测OmpU为亲水的分泌型蛋白;存在多个酶切位点。采用TMHMM Server v.2.0程序预测OmpU无跨膜结构并定位于细胞膜外。通过Signal P 4.1软件分析发现OmpU的1~21位氨基酸为信号肽序列。SOPMA服务器预测OmpU的二级结构含无规则卷曲27.94%,α-螺旋为33.24%,β-转角为10.29%,β-片层为28.53%。采用Swiss Model程序预测三维结构显示OmpU具有3个孔道结构。综合利用ABCpred和Bepi Pred方案,预测OmpU存在8个B细胞表位。运用神经网络法预测OmpU具有3个CTL表位。使用MHC-Ⅱ类分子结合肽在线程序预测OmpU存在1个Th表位。; 刘祥; 关键词：溶藻弧菌蛋白结构

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陕西省教育厅科研计划项目(2013JK0723)

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机构

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