国家高技术研究发展计划(2003AA241140)
- 作品数：40 被引量：196H指数：9
- 相关作者：杨谦张兴王永宏刘志华宋金柱更多>>
- 相关机构：哈尔滨工业大学西北农林科技大学哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划黑龙江省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 角毛壳菌几丁质酶基因chi58多点突变及在毕赤酵母中的高效表达被引量：3
- 2008年
- 应用重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,gene SOEing),简称SOE-PCR对角毛壳菌(Chaetomium cupreum)的几丁质酶基因chi58进行多点突变。依据毕赤酵母密码子偏爱性,将毕赤酵母中编码Arg使用频率几乎为0的密码子CGC突变为使用频率高的AGA,构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9K-chi58A,电转化毕赤酵母GS115,获得的重组酵母株在诱导120h酶活力最高,平均可达101.71U/mL±3.33U/mL;其活力比未优化重组酵母株(31.83U/mL±4.85U/mL)提高了约3倍,且经10代传代培养后遗传稳定性良好。表达产物的SDS-PAGE分析表明,酶蛋白分子大小为58kD。
- 王艳君杨谦
- 关键词：角毛壳菌几丁质酶多点突变毕赤酵母
- 苯并咪唑类抗性基因Ben^r在角毛壳菌中的转化
- 2011年
- 为提高角毛壳菌对苯并咪唑类杀菌剂的抗性,利用聚乙二醇介导的原生质体转化方法,以pBT6质粒为载体,把苯并咪唑类抗性基因Benr转化到角毛壳菌原生质体中,转化率约为1.5×10-5。通过Southern印记杂交分析,证明得到的转化子是阳性转化子。转化子对植物病原菌立枯丝核菌、杨树叶枯病菌有较强的抑制效果,能在多菌灵质量浓度为60μg/mL的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上生长。其抗药性比野生角毛壳菌提高约100倍,并且抗药性能够稳定遗传。研究获得了具有苯并咪唑类杀菌剂抗药性的角毛壳菌转化子。
- 岳会敏杨谦吕游
- 关键词：苯并咪唑类杀菌剂抗性基因角毛壳菌
- PEG-CaCl_2介导苏云金杆菌CryⅠA(b)基因转化哈茨木霉被引量：6
- 2005年
- 为构建兼具杀虫防病双重功效的工程菌株，通过PEG-CaCl2介导的原生质体法将来自苏云金芽孢杆菌的CryIA（b）基因导入生防真菌哈茨木霉中．转化频率约为2～3个转化子／雌质粒DNA.Southern blot和RT-PCR检测结果表明，CryIA（b）基因已经整合到哈茨木霉基因组DNA中，并且在转录水平上得到了表达．各转化子都能够稳定遗传．对转化子的抑菌活性和杀虫活性检测结果表明，转化子不但保持了野生菌株的抑菌活性，而且表现出了一定的杀虫效果．转化子Tp1和Tp2对玉米螟幼虫的矫正死亡率分别为75．00％和72．75％．杀虫防病哈茨木霉工程菌株的构建为研究和开发新型微生物农药探索了新的诛径．
- 高兴喜杨谦
- 关键词：哈茨木霉苏云金杆菌
- 球毛壳菌几丁质酶3基因的序列分析被引量：4
- 2004年
- 根据EST分析的结果 ,从cDNA文库中挑取几丁质酶 3基因的克隆进行了测序并序列分析。结果表明 :cDNA文库中几丁质酶 3基因的克隆插入片断大小为 12 6 8bp;用Phrap软件拼接出来的几丁质酶 3的表达序列标签拼接序列与实际序列不完全吻合。因此 ,在EST分析中不用Phrap软件为好。
- 金红星杨谦高兴喜于寒颖宋金柱
- 关键词：球毛壳菌几丁质酶基因生物防治
- 嗜线虫致病杆菌YL001菌株代谢产物的抑菌活性被引量：7
- 2006年
- 从陕西杨凌土样中筛选得到一株昆虫病原线虫,从其体内分离到它的共生菌嗜线虫致病杆菌Xenorhabdusnematophilus,编号为YL001,为明确其代谢产物的抑菌活性,本试验采用抑制菌丝生长速率法、抑制孢子萌发法、组织测定法和盆栽试验法系统测定了其发酵液对植物病原真菌的抑制作用。结果表明,在离体条件下该菌株发酵液对供试的15种植物病原真菌菌丝生长均有一定的抑制作用,对番茄灰霉病菌和辣椒疫霉病菌的抑制作用最强,EC50分别为53.54和90.39mg·L-1;对供试的6种植物病原真菌孢子萌发均有一定的抑制作用,其中对番茄灰霉病菌和烟草赤星病菌孢子萌发有较强的抑制作用,EC50仅分别为16.97和21.87mg·L-1;组织法测定中,发酵液稀释10倍后,对番茄灰霉病的保护效果为74.98%,治疗效果为63.50%;对盆栽番茄灰霉病的保护效果为65.11%,治疗效果为54.64%。显微观察表明,YL001菌株的发酵液可使菌丝生长形态异常、变形萎缩,甚至断裂。
- 刘霞李骞王永宏许贤张兴
- 关键词：嗜线虫致病杆菌代谢产物抑菌活性生物测定
- 角毛壳菌几丁质酶诱导cDNA文库的构建被引量：3
- 2006年
- 应用EST技术,已经获得了角毛壳菌(Chaetomium cupreum)生长过程中的生防相关基因.在此基础上,利用几丁质为唯一碳源,诱导角毛壳菌几丁质酶及其相关基因的表达,构建了cDNA文库.以角毛壳菌菌丝体为材料,提取纯化mRNA.以mRNA为模板,逆转录合成cDNA双链.与EcoRI接头连接后,收集大于700 bp的cDNA片段与载体pbluscriptⅡsk+连接,转化.未扩增文库的滴度是1.02×106pfu/mL,重组率达95.3%.PCR结果证明cDNA插入片段大于700bp的占94%以上,平均插入片段大于1.5 kb.所构建的几丁质酶诱导cDNA文库质量较高,可用于进一步筛选角毛壳菌的几丁质酶基因及其生物防治相关基因.
- 张海燕杨谦姚琳
- 关键词：角毛壳菌菌丝体CDNA文库
- 三株昆虫病原线虫共生菌胞外产物的抑菌活性被引量：5
- 2008年
- 采用生长速率法、孢子萌发法、活体组织法和盆栽试验对3株昆虫病原线虫共生菌胞外产物甲醇提取物的抑菌活性进行了系统研究。结果表明,3个菌株甲醇提取物对番茄灰霉病菌、辣椒疫霉病菌、油菜菌核病菌的菌丝生长,对番茄灰霉病菌、玉米大斑病菌、稻瘟病菌、白菜黑斑病菌、杨树溃疡病菌、小麦根腐病菌的孢子萌发均有很强抑制作用。其中嗜线虫致病杆菌YL001菌株对辣椒疫霉病菌菌丝生长的抑制作用最强,EC_(50)为35.11mg/L;伯氏致病杆菌YL002菌株对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用最强,EC_(50)为42.16mg/L;嗜线虫致病杆菌TB菌株对油菜菌核病菌菌丝生长的抑制作用最强,EC_(50)为18.95mg/L。3个菌株甲醇提取物对玉米大斑病菌孢子萌发都有很强的抑制作用,EC_(50)分别为28.03、36.77和26.40mg/L。3个菌株甲醇提取物在1000mg/L浓度下,对离体番茄果实灰霉病的治疗和保护效果均在70%以上;对盆栽番茄灰霉病和辣椒疫霉病的治疗和保护效果均在65%以上。
- 方香玲张武岗易晓华王永宏张兴
- 关键词：昆虫病原线虫共生菌胞外产物抑菌活性
- 哈茨木霉Thi4基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2009年
- 哈茨木霉(Trichoderma harzianum)是一种丝状土壤真菌,作为一种优秀的生防因子在植物病害防治过程中发挥着重要的作用。为研究其生防机制并获得生防相关基因,构建了菌丝生长期cDNA文库,通过对部分ESTs序列的测定与生物信息学分析,成功获得了噻唑生物合成酶基因Thi4的全长cDNA序列。Thi4基因全长1311bp,包含一个编码322个氨基酸残基长度为969bp的开放读码框,编码蛋白理论分子量为34.5kDa,等电点为5.18。基因的氨基酸序列含有多个功能性位点且在进化上保守。将基因提交国际权威基因数据库GenBank,序列号为DQ647956。
- 黄彩红杨谦刘志华
- 关键词：哈茨木霉克隆
- 核盘菌EPSP合酶基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2006年
- 不含有内含子的核盘菌arom基因已经被扩增、测序.该基因编码五功能的AROM蛋白.为了大量获得核盘菌AROM蛋白的结构域之一5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS),将该菌arom基因编码脱氢奎尼酸合酶(DHQS)和EPSPS两结构域的DNA序列和只编码EPSPS结构域的DNA序列分别克隆入载体pGEX-4t-2和载体pET28b中,构建了4个表达载体pGEX-DE、pGEX-E、pET-DE和pET-E,并将其转入大肠杆菌DH5α、大肠杆菌BL21(DE3)或大肠杆菌JM109中表达.酶活测定和SDS-PAGE分析结果显示,上述编码序列在大肠杆菌细胞内获得了表达,含有表达载体pGEX-E、pET-DE和pET-E的大肠杆菌BL21(DE3)转化子具有EPSPS的催化活性,说明核盘菌arom基因的这些DNA片段可以被单独表达.核盘菌EPSPS异源表达系统的建立为该酶的抑制剂设计奠定了基础.
- 于寒颖杨谦
- 关键词：基因表达核盘菌大肠杆菌
- 从微生物信息代谢看物质运动形式演进
- 2018年
- 从微生物信息代谢过程中的病原菌与寄主相互识别、微生物之间招募作用等研究领域的新发现入手,在微生物及其他生物信息代谢本质、微生物及其他生物信息代谢对其周围物质运动的影响等方面,对物质变信息,特别是经过生物界物质变信息规律进行了分析,对物质运动方式的演进规律,即无机界→有机界→信息界,做了开创性探索,这将为人类认识宇宙间物质运动的深层次规律产生重要引领作用。
- 杨谦
- 关键词：微生物量子
