山东省博士后创新项目(76247)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 猪附红细胞体ORF4基因片段的人工合成及基因表达
- 2011年
- 目的本研究通过人工合成猪附红细胞体ORF4基因,使其在大肠杆菌中高效表达。方法选择GenBank注册的AJ504999序列的ORF4基因,应用Graphical Codon Usage Analyser选择大肠杆菌偏爱的密码子,改变基因的transl_table,设计并合成3对寡核苷酸链,用PCR-based accurate synthesis（PAS）法进行人工合成。经测序正确后,连接到表达载体PET28a,获得重组表达质粒PET28a/ORF4,导入大肠杆菌BL21（DE3）,在30℃,IPTG终浓度1mmol/L的条件下诱导表达,经SDS-PAGE分析,在11 kDa附近出现目的片段。结果结果表明ORF4基因在大肠杆菌中能够得到高效的表达,通过生物信息学软件分析表明,该蛋白存在19个配基结合位点;在21~22位氨基酸可能存在信号肽裂解位点;为胞内蛋白,没有糖基化位点。结论 ORF4基因能够在大肠杆菌中表达,推测其在M.suis蛋白质的形成,M.suis的生物功能方面有着重要的作用。
- 周栋陈甜甜刘建柱成子强张利刘海涛张璐刘永夏柴同杰
- 关键词：猪附红细胞体
- 猪附红细胞体MSG1部分基因片段的全基因合成及克隆表达
- 通过人工合成猪附红细胞体MSG1基因的编码序列,提高目的基因在大肠杆茵中的高效表达。根据GenBank注册的AM407404的544-942氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成了12条寡核苷酸片段。用PAS方...
- 陈甜甜刘建柱周栋刘海涛成子强郭慧君王振勇张利柴同杰
- 关键词：猪附红细胞体
- 文献传递
- 猪附红细胞体MSG1部分基因片段的全基因合成及克隆表达被引量：1
- 2010年
- 通过人工合成猪附红细胞体MSG1基因的编码序列,以提高目的基因在大肠杆菌中的高效表达。根据Gen-Bank注册的AM407404的544～942氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成了12条寡核苷酸片段。用重叠区扩增法(PAS)全基因合成MSG1部分目的基因,克隆入pjet1.2/blunt载体。经测序证实正确后,构建原核表达载体pET-28c/MSG1,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,获得含重组表达质粒的转化子,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。测序、酶切鉴定等结果表明,表达载体构建成功,诱导表达后大约在16000的位置出现明显的蛋白条带。
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- 关键词：猪附红细胞体
