广东省科技计划工业攻关项目(2007B030704012)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：廖旺军罗荣城尤长宣吕成伟徐瑞凤更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院华南农业大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- LMP-1增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建
- 2010年
- 目的构建EB病毒潜伏膜蛋白-1(LMP-1)增强型绿色荧光蛋白真核表达载体。方法用PCR的方法从EB病毒阳性的鼻咽癌组织中调取EB病毒潜伏膜蛋白-1的基因,然后定向克隆到真核表达质粒pEGFP-C3上,以此构建成重组质粒pEGFP-C3-LMP1。结果经酶切及测序鉴定,确定已获得重组质粒pEGFP-C3-LMP1。结论在增强型绿色荧光蛋白真核表达质粒中已成功克隆了EB病毒LMP-1基因。
- 徐瑞凤石敏尤长宣吕成伟罗荣城廖旺军
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白-1增强型绿色荧光蛋白
- 超声微泡造影剂介导LMP-1基因转染树突状细胞的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨超声微泡造影剂介导LMP-1基因转染外周血来源的树突状细胞的有效性及最佳的超声辐照参数。方法体外培养树突状细胞,在不同的超声波强度、机械指数、照射时间及不同的超声微泡造影剂浓度作用下,观察LMP-1基因与绿色荧光蛋白共表达的融合重组质粒pEGFP-C3-LMP1在树突状细胞的定向转染。在荧光显微镜下观察荧光蛋白质粒在树突状细胞中的表达,流式细胞仪评价重组质粒的转染效率,台盼蓝染色检测细胞活性。结果超声辐照机械指数1.0、照射时间60s、微泡造影剂浓度为20%,达到最佳的基因转染效率(14.37±2.12)%,且细胞生存率>90%。结论微泡造影剂在超声辐射下可以有效地介导基因转染树突状细胞。
- 徐瑞凤石敏尤长宣吕成伟罗荣城廖旺军
- 关键词：微泡造影剂超声树突状细胞潜伏膜蛋白1基因转染
- N-软脂酰基壳聚糖叶酸靶向微泡的体内外特性和靶向效果被引量：3
- 2010年
- 目的应用N-软脂酰基壳聚糖制备叶酸靶向微泡,评价其基本特征、体外靶向性及体内超声显影效果。方法以高速剪切法制备叶酸靶向微泡和对照微泡,观察叶酸靶向微泡的大小、形态和叶酸分子在微泡的分布及对昆明鼠肾脏的超声显影效果和体外靶向效果,并与对照微泡比较。结果叶酸靶向微泡呈空心球形结构,形态规则,分散均匀,平均粒径(1.32±0.20)μm,浓度(1.93±0.01)×109/ml;鼠肾对比显影明显增强,1min、7min视频强度分别为(30.35±5.01)GU、(17.41±3.15)GU,可视性对比增强持续时间(10.00±3.00)min;与叶酸受体高表达细胞结合数明显大于叶酸受体低表达细胞组和对照微泡组(P<0.01)。结论 N-软脂酰基壳聚糖构建的叶酸靶向微泡可与叶酸受体有效结合,可用其作为分子探针,对叶酸受体高表达的肿瘤进行超声分子成像。
- 肖云彬李美瑜宾建国廖旺军刘伊丽蒋刚彪宾建平
- 关键词：壳聚糖叶酸造影剂微泡
- 负载LMP-1基因的树突状细胞诱导CTL对鼻咽癌细胞的杀伤效应被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨超声联合微泡造影剂能否增强绿色荧光蛋白(GFP)质粒pEGFP-C3-LMP-1转染树突状细胞(Dendritic cells,DC),进而探讨转染LMP-1基因的DC诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对鼻咽癌(NPC)细胞株的体外杀伤作用。方法:体外培养的人DC分为四组:①单纯质粒组(A组):加入质粒;②超声照射组(B组):质粒+超声辐照;③微泡造影剂组(C组):质粒+微泡造影剂;④超声+微泡造影剂组(D组):质粒+微泡造影剂+超声辐照。荧光显微镜观察GFP质粒在DC内的表达,流式细胞仪评价GFP质粒的转染效率。另将体外培养的DC分为两组用于检测DC表面表型的表达及体外杀伤实验:①空白对照组,单纯培养的DC;②基因转染组,具体实验方法同上述D组。流式细胞仪检测DC表面分子表型的表达。DC和T细胞混合共培养获得的CTL为效应细胞,LMP-1表达阳性的NPC细胞株C666-1为靶细胞,按效靶比10:1的比例混合培养24h后,MTT法检测CTL对靶细胞的杀伤作用。结果:D组DC内有较多的绿色荧光表达,且转染效率最高(14.86±2.36)%,和其余各组均有显著性差异。LMP-1基因转染组DC表面标志CD80、CD83、CD86、CD40、HLA-DR的表达明显高于对照组,所诱导产生CTL对靶细胞有明显的杀伤作用,其杀伤效率为(41.72±3.53)%,明显高于空白对照组(7.62±2.36)%。结论:超声联合微泡造影剂可有效地介导GFP质粒转染DC。LMP-1基因转染组DC诱导产生特异性的CTL对靶细胞有明显的杀伤作用。
- 徐瑞凤石敏尤长宣吕成伟罗荣城廖旺军
- 关键词：超声微泡造影剂树突状细胞鼻咽癌
