广州市医药卫生科技项目(201102A213020)
- 作品数：3 被引量：14H指数：3
- 相关作者：张振辉刘世明尤祥宇刘连刘少军更多>>
- 相关机构：广州医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广州市医药卫生科技项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 过表达miR-29a对大鼠心肌细胞凋亡的影响被引量：5
- 2012年
- 目的探讨microRNA-29a(miR-29a)对大鼠心肌细胞凋亡的调控作用。方法体外培养新生SD大鼠心肌细胞,合成人miR-29a的拟似物(mimic)。用Lipofectamine RNAiMAX转染miR-29a的mimic进入心肌细胞,转染48 h后用荧光定量PCR方法检测心肌细胞miR-29a的表达变化,流式细胞仪检测细胞凋亡水平变化,Westernblot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9前体的表达变化。结果心肌细胞转染miR-29a的mimic 48 h后,心肌细胞中miR-29a的表达水平较对照组明显升高(P<0.05);心肌细胞的凋亡水平也明显升高,凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9前体的含量则明显下降(P<0.05)。结论在大鼠心肌细胞中过表达miR-29a能促进心肌细胞凋亡,其机制可能是通过Caspase-3和Caspase-9途径起作用。
- 张振辉黎佼刘本荣李爱群刘世明
- 关键词：细胞凋亡半胱氨酸蛋白酶3
- MicroRNA-29a对大鼠心肌细胞Bcl-2和Mcl-1表达的调控作用及其机制
- 目的:探讨microRNA-29a(miR-29a)对大鼠心肌细胞(CM细胞)B细胞白血病/淋巴瘤-2(Bcl-2)和髓样细胞白血病-1(Mcl-1)表达的调控机制。方法:体外培养新生Sprague-Dawley大鼠CM...
- 张振辉尤祥宇刘少军刘连刘世明
- 关键词：细胞凋亡
- 文献传递
- MicroRNA-29a在脂多糖诱导人单核细胞凋亡中的作用和机制被引量：3
- 2013年
- 目的探讨microRNA-29a（miR-29a）对人单核细胞株THP-1凋亡的作用及其机制。方法体外培养人单核细胞株THP-1和人胚肾细胞株293T，合成人miR-29a的拟似物（mimic）和抑制剂（inhibitor）。用脂质体LipofectamineRNAiMAX转染miR-29a的mimic或inhibitor进入THP-1细胞，分组处理后收集细胞标本。第1组细胞转染mimic（100nmol／L）48h；第2组细胞先转染inhibitor（100nmolfL）24h，再用脂多糖（LPS）诱导24h，分别用流式细胞仪方法检测两组细胞凋亡，用realtimeRT—PCR方法检测抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的表达变化。构建Bcl-2和Mcl-1的荧光素酶报告基因载体，用脂质体Lipofectamine2000转染293T细胞（DNA质粒和miRNA片段共转染），双荧光素酶报告基因系统（1uciferase）检测荧光素酶的表达变化。应用SPSS13．0统计软件，采取单因素方差分析或￡检验进行数据统计分析。结果THP-1细胞转染miR-29a的mimic48h后，细胞凋亡较对照组增加（17．38％增加至42．06％）；单独用LPS诱导THP-1细胞，24h后细胞凋亡较对照组增加；THP-1细胞先转染inhibitor24h后，再用LPS诱导24h，细胞凋亡较单独用LPS诱导组减少（由51．50％降至38．09％）；THP·1细胞转染miR-29a的mimic后，抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的表达水平降低明显（P〈0．05）。另外，Luciferase检测结果显示，在293T细胞中，双萤光报告系统显示miR-29a可特异抑制带有Bcl-2和Mcl-13’UTR上野生型识别元件的报告基因表达（P〈0．05）。结论上调miR-29a的表达水平能促进THP-1细胞发生凋亡，下调miR-29a的表达水平则能抑制LPS诱导的THP-1细胞凋亡，miR-29a调控THP-1的凋亡水平是通过靶向于两个抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1实现的，提示miR-29a在调控免疫细胞的凋亡过程中具有重要的作用。
- 熊旭明张振辉江子欣陈伟燕杨其霖刘卫江
- 关键词：单核细胞脂多糖凋亡BCL-2基因MCL-1基因
- MicroRNA-29a对大鼠心肌细胞Bcl-2和Mcl-1表达的调控作用及其机制被引量：6
- 2012年
- 目的:探讨microRNA-29a(miR-29a)对大鼠心肌细胞(CM细胞)B细胞白血病/淋巴瘤-2(Bcl-2)和髓样细胞白血病-1(Mcl-1)表达的调控机制。方法:体外培养新生Sprague-Dawley大鼠CM细胞和人胚肾细胞株293T。合成大鼠miR-29a的拟似物(mimic)和抑制剂(inhibitor)。用脂质体Lipofectamine RNAiMAX转染miR-29a mimic进入CM细胞,转染48 h后分别用实时荧光定量PCR和Western blotting检测Bcl-2和Mcl-1mRNA和蛋白的表达变化。构建Bcl-2和Mcl-1的萤光素酶报告基因载体(DNA质粒),转染293T细胞(DNA质粒和miRNA共转染)和CM细胞(miRNA和DNA质粒先后转染),双萤光素酶报告基因系统检测萤光素酶的表达变化。结果:CM细胞转染miR-29a mimic 48 h后,Bcl-2和Mcl-1 mRNA和蛋白的水平均下调(P<0.05)。双萤光素酶报告基因系统显示,在293T细胞中,miR-29a可特异抑制带有bcl-2和mcl-1 3’UTR上野生型识别元件的报告基因表达(P<0.05),在CM细胞中,抑制内源性的miR-29a水平能促进bcl-2和mcl-1 3’UTR上野生型识别元件的报告基因表达。结论:抗凋亡基因bcl-2和mcl-1是miR-29a的靶基因。miR-29a可能通过作用于Bcl-2和Mcl-1实现对心肌细胞凋亡的调控作用,具体效应仍待进一步阐明。
- 张振辉尤祥宇刘少军刘连刘世明
- 关键词：细胞凋亡
