国家自然科学基金(30570887) 作品数:3 被引量:9 H指数:2 相关作者: 肖海鹏 陈说 曹筱佩 李延兵 陈松锦 更多>> 相关机构: 中山大学附属第一医院 中山大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省科技计划工业攻关项目 教育部留学回国人员科研启动基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 历史地理 更多>>
FAM3A相互作用蛋白的检测 被引量:2 2008年 【目的】FAM3A(family with sequence similarity 3,memberA)为新近发现的细胞因子FAM3的家族成员之一,本研究检测FAM3A的相互作用蛋白。【方法】克隆FAM3A并连接到pGB载体,转化酵母Y190宿主菌,加入含主要信号传导细胞因子人cDNA文库,按标准程序进行酵母双杂交,以X-Gal显色评估活性。提取扩增阳性克隆,连接pACT2载体,测序、检索基因库确定阳性克隆基因。克隆阳性基因并与FAM3A质粒共转染酵母进一步确定相互作用。【结果】酵母双杂交检测到一个与FAM3A相互作用的阳性克隆,提取扩增后测序分析此相互作用蛋白为一睾丸特异性丝氨酸/苏氨酸激酶(TSSK4),一种与精子的发育、成熟、及生育功能有关的蛋白质.共转染pGB-FAM3A质粒与pACT2-TSSK4质粒入Y190酵母证实上述相互作用。【结论】FAM3A可能通过与TSSK4的相互作用参与精子功能与生育能力的调节。 陈说 肖海鹏 李延兵 陈松锦 银巍 修玲玲 曹筱佩关键词:酵母双杂交 胰高血糖素样多肽1拮抗游离脂肪酸诱导的胰岛β细胞胰腺衍生因子表达与机制 被引量:5 2011年 目的 观察游离脂肪酸(FFA)对胰岛β-TC3细胞胰腺衍生因子(PANDER)表达的影响,并探讨胰高血糖素样多肽1(GLP-1)对其的拮抗作用及与蛋白激酶B(Akt)信号通路的关系.方法 培养β-TC3细胞,以不同浓度棕榈酸(PA)处理12 h,0.5 mmol/L的PA处理不同时间后实时荧光定量PCR法检测PANDER mRNA表达;Western印迹检测对照组、PA组、PA+GLP-1组、GLP-1组处理12 h后PANDER、P-Akt及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3酶原蛋白表达;在上述各组加入Akt特异阻断剂(Akti-1/2)后,再检测PANDER蛋白表达,并以Hoechst33258核染色法检测细胞凋亡情况.结果 (1)PA浓度依赖性及时间依赖性增加PANDER mRNA表达(P〈0.05);(2)与对照组(100%)比较,PA组诱导PANDER蛋白表达高[(148±18)%,P〈0.05),PA+GLP-1组PA诱导PANDER表达为[(70±17)%,P〈0.01];(3)Akti-1/2减弱GLP-1抑制PA诱导的PANDER表达及细胞凋亡的效应:PA+GLP-1+Akti-1/2组较PA+GLP-1组PANDER蛋白显著高[(249+49)%比(110±54)%,P〈0.01],细胞凋亡率显著高[(37.8±1.5)%比(20.1±3.5)%,P〈0.01].结论 PA可诱导PANDER的表达及胰岛B细胞凋亡,GLP-1通过激活Akt通路拮抗PA诱导的PANDER表达及胰岛B细胞凋亡. 陈说 曹筱佩 肖海鹏 莫小庆 李延兵关键词:胰高血糖素 胰岛 脂肪酸类 非酯化 胰升血糖素样肽1对胰岛β细胞脂性凋亡的拮抗作用及机制 被引量:2 2011年 目的观察棕榈酸盐对胰岛β细胞凋亡及胰腺衍生因子(PANDER)的影响,并观察胰升血糖素样肽1(GLP-1)对其的干预。方法培养β3-TC3细胞分别以PA、PA+GLP-1以及空白处理24 h,以MTT法、Annexin-V/PI荧光染色流式细胞术、Tune1荧光染色法检测细胞凋亡,以RT-PCR法测定PANDER mRNA的表达。结果 PA浓度达0.25 mmol/L时细胞存活率开始显著下降,并随浓度上升逐渐下降(P<0.05)。GLP-1能显著拮抗PA致胰岛3细胞凋亡;PA能明显增加PANDER mRNA的水平,而GLP-1能显著抑制PA对PANDER的作用。结论 PA在诱导胰岛β细胞凋亡的同时刺激PANDER表达,GLP-1拮抗PA致胰岛β细胞凋亡及PANDER的表达;PANDER可能是GLP-1拮抗胰岛β细胞脂性凋亡的靶点之一。 陈松锦 曹筱佩 陈说 肖海鹏 李延兵关键词:游离脂肪酸 胰岛细胞