国家自然科学基金(30400286) 作品数:3 被引量:78 H指数:3 相关作者: 刘庆昌 王玉萍 翟红 杨元军 陈伟 更多>> 相关机构: 中国农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 国家杰出青年科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
甘薯块根总RNA的高效快速提取方法 被引量:12 2008年 甘薯块根富含多糖(主要为淀粉),提取RNA时,二者极易形成胶状沉淀而难以溶解,严重制约了甘薯块根RNA的提取产量和质量,从而影响后续分子生物学的研究。本研究以甘薯新品系农大辐14的块根为材料,采用异硫氰酸胍提取液结合10%(w/v)醋酸钾(KOAc)和1%(w/v)十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)沉淀多糖,在1.5h内完成块根总RNA的提取,平均产量为226μg/gFW,A260/A280值为1.95。提取的总RNA可成功进行单链cDNA的合成和反转录PCR。与已有相关报道相比,该方法在保证总RNA纯度的前提下,产量有所提高,所用时间仅为前人报道的1/3 ̄1/10。 杨元军 王玉萍 翟红 刘庆昌关键词:RNA提取 块根 异硫氰酸胍 甘薯高类胡萝卜素突变体农大辐14块根cDNA文库的构建及鉴定 被引量:3 2007年 为分析和克隆甘薯块根中类胡萝卜素生物合成的相关基因,以甘薯品种高系14号经^(60)Coγ射线慢照射结合茎尖培养获得的高类胡萝卜素含量突变体农大辐14的块根mRNA为材料,利用Clontech SMART cD- NA Library Construction Kit构建了其cDNA文库。初始文库的独立克隆为0.57×10~6pfu,滴度为4.9×10~6pfu/mL,重组率为88%,插入片段大小为0.3~2.5kb,大于0.4kb的克隆比例为70%,独立克隆数为理论值的3倍。扩增文库的滴度为5×10~9 pfu/mL。鉴定结果表明该文库可用于基因克隆与分析。 杨元军 王玉萍 翟红 陈伟 何绍贞 刘庆昌关键词:类胡萝卜素 突变体 块根 植物类胡萝卜素生物合成相关基因的表达调控及其在植物基因工程中的应用 被引量:63 2006年 类胡萝卜素是人类饮食结构中不可缺少的重要成分,具有多种重要的保健功能,尤其是有些类胡萝卜素,如β-胡萝卜素是合成维生素A的前体,具有抗癌和提高免疫力等功效。类胡萝卜素还广泛用于医药和化妆品工业。迄今为止,自然界中发现的大多数类胡萝卜素都是微量的中间产物,很难直接利用。本文概述了高等植物类胡萝卜素生物合成途径、类胡萝卜素生物合成关键酶基因的克隆,如异戊烯焦磷酸异构酶、牻牛儿牻牛儿基焦磷酸合成酶、八氢番茄红素合成酶、八氢番茄红素脱氢酶、ζ-胡萝卜素脱氢酶、!-番茄红素环化酶、ε-番茄红素环化酶,并对这些关键酶基因的功能进行鉴定。以水稻、油菜、马铃薯和番茄为例,阐明了类胡萝卜素合成关键酶基因在植物基因工程中的应用。将黄水仙的Psy和Lcy-b以及噬夏孢欧文氏菌(Eriwiniauredovora)CrtI基因同时转入水稻,水稻种子内胚乳类胡萝卜素含量得到提高。另外,在油菜、马铃薯和番茄中转入与类胡萝卜素合成相关的基因,类胡萝卜素含量也发生不同程度的提高,基因表达水平也发生变化。阐述了通过基因操作技术只能得到极少量的类胡萝卜素,只有进一步弄清类胡萝卜素代谢途径,提高外源基因在植物中的特异表达,才能合成大量类胡萝卜素,使类胡萝卜素遗传操作技术成功运用于作物品质改良。 王玉萍 刘庆昌 翟红关键词:类胡萝卜素 生物合成 基因工程