江西省卫生厅科研基金(20123192)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王育蓉孙辉刘沛章欢李艳艳更多>>
- 相关机构：九江市第一人民医院中国医科大学南昌大学更多>>
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- PKC在人肾小球系膜细胞IP3R1表达中的作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨肿瘤坏死因子（TNF-α）对人肾小球系膜细胞（HMCs）IP，R1蛋白和mRNA表达的影响及PKC在此信号通路中的作用，以期为肝肾综合征（HRS）肾小球滤过率下降的发生机制提供理论依据。方法用实时定量PCR和免疫印迹检测IP3R1mRNA和蛋白表达的情况，并分别用蛋白激酶c（PKC）激动剂PMA、PKCct、PKCB特异性抑制剂及HA—DN—PKCct质粒转染干预上述诱导实验检测IBRl的表达变化。此外，免疫印迹检测TNF-α对P-PKCct蛋白的表达影响。结果TNF-α明显上调IRRl蛋白和mRNA表达。PMA、PKCcx抑制剂Safingol和HA-DN-PKCoL质粒瞬时转染预处理HMCs后，均能明显阻断TNF-α诱导IP3R1蛋白的表达，而PKCB抑制剂Rottlerin预处理后，对IRR1蛋白表达无明显影响。此外，TNF-α刺激HMCs，各不同时间组总PKCct蛋白表达无明显差异，而TNF-α刺激8hp-PKCα蛋白表达明显增加。结论TNF-α能上调人系膜细胞IP3R1蛋白及mRNA的表达，TNF-α活化PKCct是TNF-OL上调帔R1表达的重要上游信号。
- 王育蓉
- 关键词：肝肾综合征肿瘤坏死因子Α人肾小球系膜细胞
- PKCα在人系膜细胞IP_3Rl蛋白表达中的调控作用
- 2013年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对人肾小球系膜细胞(HMCs)IP3R1蛋白和mRNA表达的影响及PKC在此信号通路中的作用,以期为肝肾综合征(HRS)肾小球滤过虑下降的发生机制和防治思路提供理论依据。方法用实时定量PCR和免疫印记法检测IP3Rl mRNA和蛋白表达的情况,并分别用PMA耗竭内源性蛋白激酶C(PKC),PKCα特异性抑制剂Safingol和PKCδ特异性抑制剂Rottlerin及HA-DN-PKCα质粒转染干预上述诱导实验。同时,用免疫印记法检测TNFα对PKCα和p-PKCα表达的影响。用非放射性测活检测TNFα对PKCα的活化及抑制剂对PKCα活化的影响。结果 TNFα作用HMCs后,IP3R1蛋白和mRNA表达均明显增加。PMA,PKCα抑制剂Safin-gol,HA-DN-PKCα质粒转染均能明显阻断TNFα诱导的IP3R1蛋白的上调,而PKCδ抑制剂Rottlerin无明显阻断作用。TNFα刺激HMCs,各不同时间组总PKCα蛋白表达无明显差异,而TNFα刺激8h p-PKCα蛋白表达明显增加。此外,非放射性测活表明TNFα活化PKCα,Safingol可阻断PKCα的活化。结论 TNFα能上调HMCs中IP3R1蛋白及IP3RlmRNA的表达。活化的PKCα在TNFα上调IP3Rl的表达中起重要作用。
- 王育蓉章欢孙辉刘沛
- 关键词：肝肾综合征肿瘤坏死因子Α蛋白激酶C
- TNF—α通过PKCα信号通路诱导人系膜细胞IP3R1表达
- 2013年
- 目的探讨肿瘤坏死因子（TNF—α）对人。肾小球系膜细胞（HMCs）I型1，4，5-三磷酸肌醇受体（IP，R1）蛋白和mRNA表达的影响及其分子机制，以期为肝肾综合征（HRS）肾小球滤过率下降的发生机制和防治思路提供理论依据。方法用实时定量PCR和免疫印迹法检测TNF-α刺激HMCs0、2、4、8、24h的IP3R1mRNA和蛋白表达的情况。以TNF-α刺激HMCs8h为对照，应用D609，U73122，PP1，Safingol和Rottlerin预处理HMCs后，实时定量PCR法检测JJTNF-α对IP3R1mRNA表达的影响；以TNF-α刺激HMCs24h组为对照，免疫印迹法检测上述抑制剂预处理后，TNF-α对IP3R1蛋白表达的影响。此外，应用非放射性测活法检测0、4、8、24hTNF-α对PKC-α的活化影响，并予D609、Safingo干预后，检测TNF-α对PKC-α的活化的影响。结果TNF-α刺激HMCs2h到8hIP3R1mRNA表达明显增加，于8h达高峰（P〈0．01），而于24h有所下降（P〈0．01）；而IP3R1蛋白表达于TNF-α刺激4h开始升高，至24hIP3R1蛋白升高达高峰（P〈0．01）。与8h组比较，抑制剂＋TNF-α各组中，Safingol＋TNF-α组和D609＋TNF-α组IP3R1mRNA的表达明显下降，差异具有统计学意义（3．30±0．81）vs．（1．95±0．13），P〈0．05；（2．10±0．49），P〈0．01。与24h相比，Safingol＋TNF-α组和D609＋TNF-α组，IP3R1蛋白的表达亦明显下降（3．09±0．13）vs．（1．86＋0．39），P〈0．01；（1．98±0．02），P〈0．01。非放射性测活检测显示TNF-α处理8h使PKC—α自动磷酸化而活化，而D609或Safingol预处理后，可抑制TNF-α对PKC-α的活化。结论TNF-α能上调IP3R1mRNA及蛋白的表达，PC-PLC／PKC—α信号途径可能在TNF-α上调1只R1的表达中起重要作用。
- 王育蓉章欢孙辉刘沛
- 关键词：肝肾综合征人肾小球系膜细胞
- 转录因子 Sp1在人肾小球系膜细胞 IP3 R1表达中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨转录因子Sp1在肿瘤坏死因子（ TNF-α）上调人肾小球系膜细胞（ HMCs ） IP3R1表达中的作用，进一步阐明肝肾综合征（ HRS）肾小球滤过率（ GFR）下降的分子机制。方法用实时定量PCR和免疫印迹检测TNF-α刺激HMCs后，IP3R1 mRNA、IP3R1蛋白及Sp1蛋白表达的情况，重组质粒PGL3-IP3R1 promoter瞬时转染HMCs，应用荧光素酶报告基因检测TNF-α对IP3R1启动子活性的影响；应用Sp1和DNA结合抑制剂光辉霉素（ Mithramycin A ）及Sp1-siRNA质粒瞬时转染预处理HMCs后，检测IP3R1蛋白表达的变化。此外，免疫印迹法检测肿瘤坏死因子受体（ TNFR）对Sp1的活化及IP3R1蛋白表达的影响。结果 TNF-α作用HMCs后，IP3R1 mRNA、IP3R1蛋白和Sp1蛋白表达均明显增加，TNF-α显著增强IP3R1基因启动子的活性，Mithramycin A呈剂量依赖性阻断TNF-α诱导IP3R1蛋白表达上调，Sp1-siRNA预处理HMCs后，IP3R1蛋白表达明显下降。 TNFR1抗体＋TNF-α组和TNFR2抗体＋TNF-α组，IP3R1蛋白表达均有不同程度的下降。 TNFR1抗体＋TNF-α组Sp1蛋白表达明显下降，而TNFR2抗体＋TNF-α组，Sp1蛋白表达无明显变化。结论 TNF-α能上调人系膜细胞IP3R1的表达，TNF-α可能通过TNFR1/Sp1上调IP3R1的表达。
- 王育蓉李艳艳卢仁隆孙辉
- 关键词：转录因子SP1
