博士科研启动基金(2008c46)
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 相关作者：高庆春袁芳梁兵殷建瑞解龙昌更多>>
- 相关机构：广州医学院第二附属医院广州医科大学山东大学齐鲁医院(青岛)更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
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- 纳米材料PEG-PEI介导双基因促体外拟神经细胞凋亡的作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨新型纳米材料PEG-PEI介导的双基因pIRES2-EGFP/CD-5-FC和pIRES2-EGFP/TRAIL在体外对拟神经细胞模型(神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞)的联合杀伤作用。方法将PEG-PEI介导的联合基因pIRES2-EGFP/CD-5-FC和pIRES2-EGFP/TRAIL转染SH-SY5Y细胞后,采用MTT法观察其对SH-SY5Y细胞的杀伤作用,荧光显微镜下观测以及流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞凋亡率及FPEG-PEI的转染效率。结果 N/P=15时PEG-PEI转染两种目的基因中单一基因的细胞凋亡作用最强(P<0.01);两种基因联合转染SH-SY5Y细胞时的细胞凋亡率为77%,较单一基因转染的细胞凋亡率提高了27%(P<0.01)。结论 CD-5-FC和TRAIL基因在体外联合转染对SH-SY5Y细胞的杀伤作用较单一基因更强;PEG-PEI可以作为神经细胞基因靶向传输的载体行神经系统疾病基因治疗的体内实验研究。
- 梁兵袁芳殷建瑞蒲蜀湘解龙昌高庆春高聪
- 关键词：体外转染基因治疗细胞凋亡
- 真核表达载体pIRES2-EGFP/TRAIL,pIRES2-EGFP/CD的构建和鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的构建真核表达载体pIRES2-EGFP/TRAIL和pIRES2-EGFP/CD,为研究其联合表达对恶性胶质瘤的联合治疗作用提供基础。方法将pCMV/CD质粒和pcDNA3.1(+)/TRAIL质粒行琼脂糖凝胶电泳检测,确定其完整性,并进行序列测定确定有无基因突变。pCMV/CD质粒用SacⅡ/XhoⅠ双酶切,pcDNA3.1(+)TRAIL质粒用BamHⅠ/XhoⅠ双酶切,将目的基因定向克隆到真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,转化E.coli DH5α感受态细胞,通过限制性内切酶双酶切、PCR及核酸序列分析等筛选、鉴定重组质粒。结果所构建的真核表达载体pIRES2-EGFP/TRAIL经SacⅡ/XhoⅠ双酶切回收片段分别为1.0、5.2 kb;pIRES2-EGFP/CD经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切回收片段分别为1.3、5.2 kb。PCR及测序证实,pIRES2-EGFP/TRAIL和pIRES2-EGFP/CD质粒基因组中分别包含TRAIL和CD基因。结论成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/TRAIL和pIRES2-EGFP/CD,为研究其联合表达对恶性胶质瘤的联合治疗作用奠定了基础。
- 梁兵袁芳殷建瑞谭丽华高庆春高聪
- 关键词：真核表达载体
- 脑血流有效灌注压的无创检测及其对急性脑梗死的临床意义被引量：9
- 2014年
- 目的探索脑血流有效灌注压（effective cerebral perfusion pressure，CPPe）的无创检测方法的有效性以及急性脑梗死患者CPPe与颈内动脉血管狭窄程度的相关性。 方法本研究为前瞻性研究，收集2010年1月∽2012年1月在广州医科大学附属第二医院神经内科住院的41例发病1周内的急性脑梗死患者，所有患者均经数字减影血管造影（digital subtraction angiography， DSA）和经颅多普勒超声（transcranial Doppler ultrasonography，TCD）评估颈内动脉狭窄程度及大脑中动脉无创血压、有创血压及血流速度，根据上述检测结果计算CPPe，比较TCD、DSA评价CPPe的有效性。同时根据北美症状性颈动脉狭窄内膜切除研究（North American Symptomatic Carotid Endarterectomy Trial，NASCET）标准分为轻度狭窄组、中度狭窄组和重度狭窄组，比较各组间的血管狭窄危险因素、CPPe和美国国立卫生研究院卒中量表（National Institutes of Health Stroke Scale，NIHSS）评分，以及CPPe和NIHSS评分与颈内动脉血管狭窄程度的相关性。 结果所有急性脑梗死患者的有创和无创CPPe比较，结果发现有创CPPe的中位数为56.6 mmHg，无创CPPe的中位数为57.8 mmHg，两者之间的差异无显著性（P＞0.05）。轻度狭窄组、中度狭窄组和重度狭窄组3组急性脑梗死患者的有创CPPe的中位数分别为60.6 mmHg、42.5 mmHg和1.6 mmHg；无创CPPe的中位数分别为62.2 mmHg、42.7 mmHg和0.27 mmHg；NIHSS评分的中位数分别为4、3和8；比较CPPe、NIHSS评分在各组间的差异有显著性，H值分别为26.906、26.906及11.233（P＜0.01）。相关分析显示急性脑梗死患者CPPe与DSA显示的血管狭窄程度密切相关，相关系数分别为-0.782和-0.814，差异有显著性（P＜0.01）；而NIHSS评分与DSA显示的血管狭窄程度无相关性，相关系数为0.222，差异无显著性（P＞0.05）。〈br〉 结论通过TCD无创检测并计算CPPe的新方法可以
- 梁兵袁芳梁云云傅贤解龙昌殷建瑞高庆春
- 关键词：急性脑梗死数字减影血管造影
- 3种不同类型基因导入系统转染类神经元细胞的效率比较被引量：3
- 2012年
- 目的应用3种不同类型基因导入系统携带能表达绿色荧光蛋白的pAAV-EGFP质粒转染两类神经元细胞株,并对细胞毒性和转染效果进行比较。方法 LipofectAMINE 2000、聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI,相对分子质量为25×103)及该课题组合成的PEI-聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)4.6在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞和C6胶质瘤细胞中的转染效果,通过MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜荧光观察法和流式细胞仪法检测转染效果。结果 MTT检测发现,在C6胶质瘤细胞中,PEG-PEI 4.6的细胞存活率为83%,比PEI(70%)和LipofectAMINE 2000(73%)的细胞存活率要高(P<0.05);但Lipo-fectAMINE 2000和PEI的细胞存活率比较,差异无统计学意义(P>0.05);在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中的检测结果与C6胶质瘤细胞类似。倒置显微镜观察发现,在C6胶质瘤细胞中,PEG-PEI 4.6的细胞荧光表达效果比LipofectAMINE2000和PEI要好;而在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中,LipofectAMINE 2000的荧光表达效果比另外两种复合物的效果好,同时PEG-PEI 4.6的荧光表达效果比PEI要好。流式细胞仪检测发现在C6胶质瘤细胞中,PEG-PEI 4.6的转染效率最好,为23.2%;Lipo-fectAMINE2000其次,为16.9%;PEI最差,为12.6%,三者两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中则是LipofectAMINE 2000的转染效率最好,PEG-PEI 4.6其次,PEI最差,转染效率分别为22.3%、17.2%、10.6%,三者两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LipofectAMINE 2000和PEG-PEI 4.6都可作为目前神经系统基因转染的传输载体。
- 梁兵袁芳杨宁殷建瑞蒲蜀湘解龙昌高庆春高聪
- 关键词：神经胶质瘤神经母细胞瘤脂质体转染
