浙江省科技计划项目(84008012)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：楼永良严杰丁卉王波谢旦立更多>>
- 相关机构：浙江大学温州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- rVvhA诱导小鼠单核巨噬细胞凋亡的作用及其机制被引量：1
- 2010年
- 目的研究重组创伤弧菌溶细胞素（rVvhA）诱导小鼠单核巨噬细胞（J774A．1）凋亡的作用及机制。方法MTT法、电子透射电镜、流式细胞仪结合AnnexinV-PI标记法、线粒体膜电位和caspase活性检测等方法测定rVvhA诱导J774A．1凋亡的作用。结果MTT结果显示rVvhA能够抑制J774A．1生长。2．0溶血单位（HU）／ml和3．0HU／ml的rVvhA作用J774A．18h后，透射电镜观察细胞和线粒体形态发生凋亡改变；流式细胞仪检测凋亡率分别为（7．80±0．62）％、（12．33±0．12）％，均高于正常组（3．07±0．67）％；线粒体膜电位也下降，流式细胞仪结果显示绿色荧光率分别是9．8％、39．2％。其中3．0HU／mlrVvhA作用组，caspase-3、9活性增加，并且具有时间依赖性，而caspase-8活性没有明显改变。3．0HU／mlrVvhA加caspase-3抑制剂（Ac—DEVD-FMK）或caspase-9抑制剂（Ac—LEHD-FMK）的凋亡率与3．0HU／mlrVvhA作用组相比都降低，分别为（6．23±3．95）％、（9．60±3．14）％；同时caspase-3、9活性也下降。结论rVvhA具有诱导J774A．1凋亡的生物学活性；其机制可能与依赖caspase的线粒体途径有关。
- 王波金疆钟毓红赵志超杨军楼永良严杰
- 关键词：创伤弧菌凋亡线粒体
- 膜胆固醇对重组创伤弧菌溶细胞素活性的影响被引量：2
- 2010年
- 研究膜胆固醇对重组创伤弧菌溶细胞素(recombinant Vibrio vulnificus hemolysin,rVvhA)生物学活性的影响,以进一步明确rVvhA的分子致病机制。利用甲基-β-环糊精(MβCD)可以去除细胞膜上胆固醇的能力,rVvhA作用细胞之前,细胞预先经5 mmol/L MβCD处理。测定MβCD预处理组和未处理组(即rVvhA直接作用组)细胞的存活率、细胞内钙离子浓度、培养上清中钾离子浓度及细胞凋亡与坏死情况。结果显示MβCD预处理组的细胞存活率较rVvhA直接作用组高、rVvhA引起的钙离子内流和钾离子释放受到抑制、细胞凋亡率也明显降低。结果表明,在rVvhA活性发挥中细胞膜上的胆固醇是必须存在的,胆固醇的降低会抑制rVvhA的活性。
- 丁卉潘娌妮郭秋楼永良严杰伍越王福乐
- 关键词：创伤弧菌胆固醇
- 重组创伤弧菌溶细胞素诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及其机制被引量：5
- 2010年
- 为了研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的作用及其机制。采用MTT法、普通光学显微镜和电子透射电镜、流式细胞仪结合Annexin V-PI标记法、caspase活性检测等方法测定rVvhA诱导HUVEC凋亡的作用。结果显示rVvhA能够抑制HUVEC生长。3.0溶血单位(HU)/ml和4.0 HU/ml的rVvhA作用HUVEC 8 h后,细胞和线粒体的形态发生凋亡改变,其中4.0 HU/ml处理组的凋亡率(51.73±1.96)%高于对照组(3.53±0.64)%和3.0 HU/ml处理组(12.83±5.00)%,具有剂量依赖性;4.0 HU/ml rVvhA诱导HUVEC凋亡过程中,caspase-3、caspase-9活性增加,并且具有时间依赖性,而caspase-8活性没有明显改变;4.0 HU/ml rVvhA加caspase-3抑制剂Ac-DEVD-FMK或caspase-9抑制剂Ac-LEHD-FMK的凋亡率分别下降到(14.2±3.47)%、(24.93±3.93)%。同时caspase-3、caspase-9活性也下降。结果表明rVvhA具有诱导HUVEC凋亡的生物学活性;其机制可能与依赖caspase的线粒体途径有关。
- 王波丁卉谢旦立楼永良严杰杨军赵志超
- 关键词：创伤弧菌人脐静脉内皮细胞凋亡CASPASE
- 创伤弧菌溶细胞素T和B有效联合表位的筛选与鉴定被引量：2
- 2010年
- 利用生物信息学预测技术成功筛选出含部分创伤弧菌溶细胞素(Vibrio vulnificushemolysin,VvhA)基因片段的T细胞、B细胞联合表位Vvha1、Vvha2、Vvha3和Vvha4,通过噬菌体展示技术成功获得四段表位多肽M13KE-Vvha1、M13KE-Vvha2、M13KE-Vvah3、M13KE-Vvha4,且M13KE-Vvah2、M13KE-Vvha4抗原反应性强于M13KE-Vvha1、M13KE-Vvha3。将四种抗原性多肽经腹腔注射ICR小鼠后,利用流式细胞仪及ELISA方法检测小鼠CD4^+T淋巴细胞亚群及IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ细胞因子时发现,与M13KE-Vvha3相比,经M13KE-Vvha1、M13KE-Vvha2、M13KE-Vvha4作用的小鼠CD4^+T淋巴细胞亚群的变化更为显著。与正常组相比,该三组小鼠的IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ细胞因子分泌量的变化都具有统计学意义;而经M13KE-Vvha3作用的小鼠仅IL-4的改变具有明显统计学意义。因此本研究成功筛选出含部分VvhA片段的T细胞、B细胞联合表位Vvha2、Vvha4,从而为进一步研制多抗原肽(multipleantigenic peptide,MAP)疫苗打下基础。
- 王波丁卉谢旦立楼永良肖美英庞碧芳严杰
- 关键词：创伤弧菌噬菌体展示B细胞表位T细胞表位
