青岛市科技发展计划项目(2001-2)
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
- 相关作者：王志亮吴晓东王长杰刘雨田邹艳丽更多>>
- 相关机构：农业部动物检疫所更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划青岛市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 中国黄牛PrP^c成熟蛋白基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2002年
- 根据已发表的牛PrPc蛋白基因序列 ,设计合成一对引物 ,并在2个引物的两端分别加入BamHI和NdeI酶切位点。以从中国黄牛肝脏中提取的基因组DNA为模板 ,经PCR扩增出一约640bp的目的基因片段 ,将此基因克隆于 pET11a载体 ,构建了PrPc蛋白基因重组质粒b-pET11a -PrPc ,转化DH -5α并进行序列测定。同源性分析表明 :中国黄牛PrPc成熟蛋白基因与目前国外发表牛的成熟蛋白PrPc基因相比 ,有较大差异 ,发现了一个新的NdeI酶切位点 ;推导的氨基酸序列有4个氨基酸差异 。
- 王志亮王长杰吴晓东
- 关键词：中国黄牛克隆基因疯牛病
- 中国黄牛PrP^c成熟蛋白的原核表达和抗原性分析被引量：2
- 2002年
- 将中国黄牛PrPc 成熟蛋白基因重组质粒b -pET11a -PrPc(本室构建 )转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达。SDS -PAGE电泳显示表达产物的分子量约为23KD ,大小与预计相符 ;免疫印迹 (WesternBlotting)试验进一步证实 ,中国黄牛PrPc 成熟蛋白获得了正确的表达 ,且与大肠杆菌BL21(DE3)
- 吴晓东王长杰王志亮
- 关键词：中国黄牛抗原性
- 中国黄牛重组PrP^c成熟蛋白单克隆抗体的研制被引量：6
- 2002年
- 将纯化的牛重组PrPc 成熟蛋白免疫PrPc 基因敲除小鼠 (PrPc-nullmice) ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,经一次融合 ,共筛选出3株能稳定分泌针对中国黄牛PrPc 成熟蛋白特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株4D5、5C10和3F3。免疫印迹试验表明 :腹水单抗4D5、5C10和3F3均可特异识别重组中国黄牛PrPc
- 吴晓东王志亮
- 关键词：中国黄牛单克隆抗体
- 免疫组化法检测我国疯牛病结果初报被引量：11
- 2002年
- 将固定好的脑组织样品 ,按常规方法制备成石蜡切片。切片脱蜡入水 ,用蛋白酶K消化去除正常PrP蛋白 ,留下异常PrP蛋白。然后用适当工作浓度的兔抗牛PrP血清孵育切片 ,再用DAKOChemMateTM检测试剂盒处理。同时结合H·E染色法检测我国疯牛病。实验发现 ,在1131例国内样品中免疫组化的实验结果均为阴性 ,H·E染色的结果均未发现有特征性海绵状空泡变化。实验进一步证实 ,免疫组织化学方法是一种操作简单、结果容易判断、价格低廉的检测手段 。
- 刘雨田邹艳丽王志亮
- 关键词：免疫组织化学牛脑
