甘肃省国际合作计划(0804WCGA133)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
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- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所新疆农业大学更多>>
- 发文基金：甘肃省国际合作计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
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- 小反刍兽疫病毒Nigeria75／1株F基因的克隆与原核表达被引量：6
- 2009年
- 提取小反刍兽疫病毒(PPRV)疫苗株Nigeria 75/1的总RNA,用RT-PCR方法扩增F基因并克隆到pMD18-T载体中,以鉴定正确的质粒为模板克隆去掉N端信号肽和跨膜区的F基因(F-1)并亚克隆于原核表达载体pET-30a(+),得到重组质粒pET30-F-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫SPF家兔制备抗体,进行间接免疫荧光检测并用ELISA测定抗体效价。结果显示,目的基因正确插入了表达载体,在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,用重组蛋白免疫3次后,兔血清抗体达到较高水平,Western-blot分析说明表达产物能够与兔血清抗体发生特异性反应,间接免疫荧光试验显示重组蛋白免疫兔阳性血清能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原。表明,重组蛋白在原核表达系统内得到了高水平的表达,并且具有较好的反应原性。
- 杨帆窦永喜朱学亮骆学农岳城才学鹏
- 关键词：小反刍兽疫病毒F蛋白克隆原核表达
- 小反刍兽疫病毒基因组全长cDNA的构建及其序列的测定
- 2010年
- 根据小反刍兽疫Nigeria75/1株全基因组序列设计并合成PPRV特异引物,进而应用RT-PCR技术分5段扩增了PPRV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片段JF1、JF2、JF3、JF4和JF5分别克隆到载体上,建立了PPRV的初级cDNA克隆。在扩增5′末端时,引入AscI酶切位点和T7启动子序列;在基因组3′末段引入PacI酶切位点,后者供cDNA模板的线性化之用。将扩增片段再依次连接,最后亚克隆到质粒pok12中,获得了PPRV全长基因组cDNA克隆pok12-PPRV。通过序列同源性和进化树分析,结果表明,Nigeria75/1与MV和RPV的遗传关系最近。Nigeria75/1株全长cDNA的序列测定及构建,为拯救PPRV和在分子水平进一步深入研究PPRV打下坚实的基础。
- 翟军军窦永喜张海瑞毛立蒙学莲骆学农才学鹏
- 关键词：小反刍兽疫病毒RT-PCR全长CDNA克隆分子克隆
