安徽省自然科学基金(98436329)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：沈继龙祖莹汪学龙李小月都建更多>>
- 相关机构：安徽医科大学蚌埠医学院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人类神经元14-3-3-zeta信号蛋白的纯化及抗体制备被引量：1
- 2004年
- 目的 制备抗人脑 14 3 3zeta蛋白 (31ku)的多克隆抗体与单克隆抗体 ,为神经系统退行性疾病的诊断提供标志物。方法 用纯化的rh14 3 3zeta蛋白免疫家兔 ,制备抗 14 3 3多克隆抗血清 ;电洗脱、透析纯化rh 14 3 3/ β 半乳糖苷酶融合蛋白 ,免疫BALB/c小鼠 ,用杂交瘤技术制备抗rh 14 3 3zeta单克隆抗体 ;测定所得抗体效价及其特异性反应。结果 得到大量纯化的表达产物 ;制备的多克隆抗血清双扩效价达 1∶8～ 1∶6 4 ;获得 1株能稳定分泌抗rh 14 3 3zeta单抗的杂交瘤细胞株 ,其亚型为IgG1型 ,该株单抗可与重组14 3 3蛋白发生特异性反应。结论 获得了敏感、特异的抗rh 14 3 3zeta多克隆抗血清及稳定分泌抗rh 14 3 3zeta单抗的杂交瘤细胞株 ,为神经系统退行性疾病提供诊断标记。
- 胡敏李锋沈继龙
- 关键词：多克隆抗体
- 神经元细胞信号传导蛋白质14-3-3ζ编码基因的扩增和克隆被引量：1
- 2001年
- 目的 克隆神经元信号传导蛋白质 14 3 3ζ编码基因 ,以研究其在人神经退行性病变中的诊断价值、细胞信号传导过程中的作用及对细胞分裂、细胞凋亡的影响。方法 提取人脑胶质瘤细胞总mRNA ,以其为模板逆转录合成cD NA第一链 ,设计合成引物 ,用PCR扩增 14 3 3ζ基因编码序列 ,将其插入 pGEM T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的PCR进行鉴定。结果 RT PCR扩增出一条约 75 0bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的PCR获得了一条与RT PCR大小相同的条带。经DNA测序证明所克隆的DNA片段与GenBank收录序列一致。结论 信号传导蛋白质 14 3 3ζ重组 pGEM T克隆载体的成功构建 ,为进一步研究提供了条件。
- 祖莹沈继龙汪学龙
- 关键词：遗传学CJD编码基因基因扩增
- 弓形虫信号转导蛋白14-3-3的高效表达及免疫学诊断的初探被引量：3
- 2005年
- 目的 构建弓形虫信号转导蛋白 14 -3- 3基因的重组质粒 ,并在E .coli中高效表达 ,用于免疫学诊断。方法 以限制性内切酶EcoRI和XhoI双酶切质粒pGEM T/Toxo 14 - 3- 3,获得弓形虫信号转导蛋白 14 - 3 -3编码基因片段 ,插入载体pET2 8a ,转化E .coliBL2 1,IPTG诱导表达 ,在非变性条件下纯化融合的表达产物 ,通过Westernblot和ELISA检测其特异的免疫反应性。结果 所构建的弓形虫信号转导蛋白 14 -3 -3(rToxo 14 - 3- 3)在原核系统中的重组表达质粒 ,以 6个His融合蛋白的形式得到高效表达 ,其表达量占细菌裂解液中总蛋白量的 4 9 .2 %。该重组抗原经纯化能被弓形虫感染的人血清所识别。用rToxo 14- 3 -3作为抗原 ,ELISA检测弓形虫病具有高度的敏感性和特异性。结论 rToxo 14 - 3- 3在大肠杆菌中已得到高效表达 ,该重组抗原能有效检测弓形虫的感染 ,可用于弓形虫病诊断试剂盒的研制。
- 都建沈继龙王维李小月胡元生钟政荣刘淼
- 关键词：弓形虫信号转导蛋白免疫学诊断重组抗原E.COLIELISA检测
- 信号蛋白质14-3-3ζ的高效融合表达和鉴定被引量：2
- 2002年
- 目的 利用分子克隆技术在原核细胞中研究 1 4-3 -3ζ蛋白的表达。方法 1 4-3 -3ζ c DNA经测序后 ,亚克隆至 p BK-CMV表达载体 ,转化大肠杆菌 BL2 1菌株 ,筛选阳性克隆 ,经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。结果 经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)和蛋白印迹 (Western blot)分析 ,表达的融合蛋白相对分子质量为 3 2 0 0 0左右 ,能与 1 4-3 -3ζ蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应。结论 人 1 4-3 -3ζ蛋白在原核细胞中有大量表达 。
- 祖莹沈继龙汪学龙李德发
- 关键词：克隆信号传导免疫反应性原核细胞
