国家自然科学基金(30973476)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：杨文涛周璐张鹏更多>>
- 相关机构：复旦大学附属肿瘤医院复旦大学上海医学院复旦大学更多>>
- 发文基金：上海市浦江人才计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 异常高表达TCTP通过上调Bcl-xL抑制胰腺癌细胞的细胞凋亡被引量：4
- 2013年
- 背景与目的:胰腺癌是一种常见的恶性肿瘤,病死率高,5年生存率<5%,目前尚无很好的治疗方法。翻译控制肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)是一个生长相关的蛋白质,有促进肿瘤生长,抗细胞凋亡的作用,目前有研究显示TCTP在肝癌、结直肠癌中异常高表达,但其在胰腺癌中的相关研究报道较少。本研究通过对TCTP在胰腺癌细胞中的表达及其生物学作用机制分析,致力于寻找新的肿瘤分子靶点,为胰腺癌的靶向治疗提供依据。方法:采用免疫组织化学方法检测胰腺癌组织中TCTP表达情况;RT-PCR检测胰腺癌细胞株中TCTP的mRNA表达,Western blot方法检测胰腺癌细胞株中TCTP和Bcl-xL蛋白表达水平;免疫荧光染色方法检测TCTP在胰腺癌细胞中的定位;小分子RNA干扰技术沉默胰腺癌细胞中TCTP表达后,利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测胰腺癌细胞的细胞周期和细胞凋亡等生物学指标。结果:与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中TCTP异常高表达,并且主要位于胰腺癌细胞的细胞质中;不同胰腺癌细胞株中TCTP也呈高表达;siRNA沉默胰腺癌细胞中的TCTP,显著抑制细胞的增殖速度和细胞周期进程,促进细胞的凋亡;在胰腺癌细胞中Bcl-xL表达与TCTP表达呈正相关,沉默TCTP可以下调Bcl-xL的蛋白表达。结论:异常高表达TCTP,通过上调Bcl-xL抑制细胞凋亡,从而促进胰腺癌的发生和发展。
- 张飞王瑧张萍张波杨文涛李影奕
- 关键词：胰腺癌BCL-XLSIRNA
- ELISA高通量筛选PIM靶向抑制剂的研究被引量：1
- 2013年
- 背景与目的:Pim家族是具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的原癌基因,包括Pim-1、Pim-2、Pim-3。研究发现,Pim能够抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,导致肿瘤发生。本研究利用ELISA反应原理建立高通量筛选体系,对Pim抑制剂进行筛选,为药物的应用和解决恶性肿瘤临床治疗的难题提供研究基础。方法:通过计算机辅助药物设计的手段,以蔓生百部碱母核三环酰胺作为核心结构合成系列衍生物;利用Pim重组蛋白和Bad重组蛋白可以与Ni2+特异性结合的亲和层析原理进行重组蛋白的纯化精制;利用ELISA方法,通过Pim激酶磷酸化促凋亡蛋白分子Bad在112位丝氨酸的反应,建立筛选Pim靶向抑制剂的体系。结果:0.01 mmol/L的IPTG在37℃条件下,诱导Bad蛋白2 h,可以获得最大量的可溶性Bad重组蛋白;0.02%的阿拉伯糖在37℃条件下,诱导Pim-1、Pim-2、Pim-3蛋白3 h,可以获得最大量的Pim重组蛋白;ELISA结果显示,Pim激酶与Bad底物之间的作用存在剂量依赖性反应关系,进而成功建立药物筛选体系;初步筛选出低分子化合物T-18,在体外能有效抑制Pim激酶活性。结论:利用ELISA反应原理建立的筛选药物方法,是一种经济、简单、快速、高效、敏感的筛选手段,并初步筛选出小分子化合物T-18,能够抑制Pim激酶活性,阻断Pim对凋亡蛋白分子Bad的磷酸化过程,进而抑制肿瘤的发生。
- 尚琨张鹏周璐王瑧曹越李影奕
- 关键词：BADPIMELISA药物筛选
