国家自然科学基金(30572457)
- 作品数：5 被引量：54H指数：4
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- 乌梢蛇蛋白对滑膜细胞增殖、凋亡及wt-p53/bcl-2 mRNA表达的影响被引量：7
- 2009年
- 目的研究乌梢蛇蛋白对体外培养的类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)生长的抑制情况,探讨乌梢蛇蛋白影响FLS凋亡的可能分子机制。方法常规方法提取乌梢蛇总蛋白,组织贴块法培养FLS;采用不同剂量(高、中、低剂量)乌梢蛇蛋白作用FLS后,应用MTT法检测乌梢蛇蛋白对细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测细胞的凋亡情况,RT-PCR方法检测细胞wt-p53/bcl-2mRNA的变化。结果乌梢蛇蛋白中高剂量组FLS增殖率与空白对照组比较明显减少,细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01);乌梢蛇蛋白中高剂量组FLS的wt-p53mRNA表达量增加,Bcl-2mRNA表达量降低,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论乌梢蛇蛋白可抑制FLS增殖和促进其凋亡,其作用机制可能是通过调节wt-p53/bcl-2基因表达来实现。
- 吴贺勇李娟
- 关键词：成纤维样滑膜细胞增殖凋亡
- 水溶性乌梢蛇总蛋白的提取方法及细胞毒性检测被引量：3
- 2010年
- 背景:寻找分析乌梢蛇的具体活性成分,需对乌梢蛇总蛋白进行提取和分析,但目前有关乌梢蛇蛋白的提取方法甚少。目的:建立提取水溶性乌梢蛇总蛋白的方法,检验水溶性乌梢蛇总蛋白体外细胞毒性。方法:应用酶裂解与盐析相结合的方法提取乌梢蛇总蛋白,采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒检测盐析前后所得的蛋白浓度,使用SDS-PAGE分离蛋白,应用图像分析软件分析QuantityOne4.4比较分析其区带差异。分别用盐析后所得的不同浓度的蛋白(0.5,5,50,150,450和900mg/L)和蛋白提取液作用于成纤维样滑膜细胞,四甲基偶氮唑蓝法测定各组成纤维样滑膜细胞增殖率。结果与结论:水溶性总蛋白浓度与盐析总蛋白浓度比较差异无显著性意义(P>0.05);两种方法所提取的水溶性乌梢蛇总蛋白差异无显著性;提取液组和盐析后所得的蛋白质的150和450mg/L组均可以抑制成纤维样滑膜细胞的增殖;而空白对照组和酶裂解与盐析后所得蛋白的0.5,5和50mg/L对细胞的增殖作用无影响。提示酶裂解和盐析结合的方法可提取高质量低毒的水溶性乌梢蛇总蛋白,所提取蛋白包含了乌梢蛇的特征性蛋白,适合于体外细胞模型的研究。
- 吴贺勇李娟李亚玲
- 关键词：MTT法细胞毒性类风湿性关节炎
- 乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白对大鼠佐剂型关节炎滑膜细胞因子的作用被引量：18
- 2009年
- 目的:观察乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白(tyPeⅡcollagen,CⅡ)对大鼠佐剂型关节炎(adjuvant arthritis,AA)滑膜细胞因子的作用。方法:限制性胃蛋白酶降解法提取乌梢蛇CⅡ,SDS-PAGE凝胶电泳法和紫外分光光度计法鉴定;采用完全弗氏佐剂(complete Freud′s adjuvant,CFA)足垫皮下注射诱导AA大鼠模型;收集滑膜细胞上清液,L929细胞毒性法检测滑膜细胞上清液中TNF-α生物活性,MTT法检测滑膜细胞上清液中IL-1β生物活性;ELISA法检测滑膜细胞上清液细胞因子水平。结果:提取的CⅡ分子量约为118kD^120 kD,紫外光谱吸收仪测定提取的CⅡ吸收峰为230nm,均与标准的牛鼻中隔CⅡ相符;乌梢蛇CⅡ各剂量组体外对滑膜细胞上清液TNF-α和IL-1β活性没有直接作用;乌梢蛇CⅡ中剂量组可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结共培体系上清液TNF-α和IL-1β活性(P<0.01),乌梢蛇CⅡ低、高剂量可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结(PP)共培体系上清液IL-1β活性(P<0.05);灌服乌梢蛇CⅡ低、中剂量组与模型组比较,TNF-α活性下降(P<0.05);中剂量组与模型组比较,IL-1β活性下降(P<0.05);模型组与空白对照组比较,滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平显著升高(P<0.01);乌梢蛇CⅡ中、高剂量组与模型组比较,均能抑制滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平(P<0.01);乌梢蛇CⅡ低剂量组能显著抑制滑膜上清液IL-1β水平(P<0.01);乌梢蛇CⅡ中剂量能显著升高滑膜上清液TGF-β(P<0.01);结论:乌梢蛇CⅡ体外对滑膜细胞炎症因子无直接作用,灌服乌梢蛇CⅡ可以抑制滑膜细胞炎症因子的水平和活性。
- 庞捷李娟吴湘慧吴贺勇
- 关键词：乌梢蛇佐剂型关节炎细胞因子滑膜细胞
- 类风湿关节炎大鼠模型的构建及昆明山海棠对大鼠佐剂性关节炎的干预研究被引量：26
- 2009年
- 目的:制作和比较佐剂性关节炎大鼠模型及胶原性关节炎大鼠模型,选择外观及病理变化更明显的模型来观察昆明山海棠制剂对其的干预作用。方法:构建AA和CIA大鼠模型,采用肿胀度评分法观察造模前后大鼠关节变化情况,造模后28d分离关节滑膜、切片HE染色,观察滑膜炎症,ELISA方法检测血清中细胞因子(IL-1β、TNF-α、TGF-β)水平;观察昆明山海棠对大鼠关节肿胀度、血清细胞因子(IL-1β、TNF-α、TGF-β)及关节滑膜组织炎症的影响。结果:从造模后16d开始AA组和CIA组的关节肿胀度升高(P<0.01);AA组在出现肿胀的时间及程度上与CIA组比较有显著差异(P<0.01);造模后28d,两个模型组血清中IL-1β、TNF-α水平升高,TGF-β水平下降(P<0.01),同时,两个模型组间也存在显著差异(P<0.05);造模后,AA组滑膜组织有大量炎性细胞浸润、纤维素样渗出及出现丰富的血管翳;经过昆明山海棠的干预,高、中剂量组关节肿胀得到明显改善(P<0.01);昆明山海棠高、中剂量能抑制血清中IL-1β、TNF-α水平及提高TGF-β水平(P<0.01)。结论:AA大鼠模型与CIA模型比较出模时间更早,症状更明显;昆明山海棠能改善AA大鼠关节肿胀度,抑制血清中细胞因子的水平,对AA大鼠有明显的治疗作用。
- 吴湘慧李娟庞捷
- 关键词：佐剂性关节炎胶原诱导性关节炎昆明山海棠滑膜炎症
- 水溶性乌梢蛇总蛋白对成纤维样滑膜细胞分泌白介素-1β、α-肿瘤坏死因子和白介素-10的影响被引量：5
- 2009年
- 目的观察水溶性乌梢蛇总蛋白对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-10的影响,以探讨治疗RA的可能机制。方法用常规方法提取水溶性乌梢蛇总蛋白,取RA患者滑膜组织进行成纤维样滑膜细胞培养;选择对数生长期的细胞进行实验,实验分五组,分别加入昆明山海棠(200μg/ml,阳性对照组)、水溶性乌梢蛇总蛋白(50、150、450μg/ml)DMEM溶液,及加入等体积的DMEM溶液(空白对照组)进行细胞培养,72小后采用ELISA方法测定培养液上清中IL-1β、TNF-α和IL-10的水平,RT-PCR检测滑膜细胞IL-1β、TNF-α和IL-10的mRNA表达。结果水溶性乌梢蛇总蛋白150μg/ml、450μg/ml组和阳性对照组细胞培养液上清中TNF-α、IL-1β水平明显降低,mRNA表达减少,而IL-10水平升高,mRNA表达增加,与空白对照组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论水溶性乌梢蛇总蛋白可能通过抑制成纤维样滑膜细胞TNF-α和IL-1β及促进IL-10分泌来减轻炎症反应,到达治疗RA的目的。
- 吴贺勇李娟李亚玲
- 关键词：成纤维样滑膜细胞白介素-1肿瘤坏死因子白介素-10
