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山羊α-乳清蛋白乳腺特异性表达载体的构建及核供体细胞的转染: 2012年; 为了构建α-乳清蛋白乳腺特异性表达载体及提供山羊乳腺生物反应器α-乳清蛋白核移植供体细胞,提取乳腺组织中的总RNA,采用RT-PCR技术获得α-乳清蛋白基因cDNA,测序酶切后连接乳腺特异性表达载体pBCⅠ-Neo,并对重组载体进行酶切测序鉴定;取重组正确的载体酶切线性化后利用脂质体介导转染至山羊胎儿成纤维细胞,通过G418筛选培养转染了α-乳清蛋白乳腺特异性表达载体的山羊胎儿成纤维细胞。结果显示:经过RT-PCR特异性扩增克隆出α-乳清蛋白基因;克隆的基因碱基组成序列经测序与预期完全一致,α-乳清蛋白基因片段正向插入乳腺特异性表达载体;重组载体在山羊胎儿成纤维细胞中稳定转染,转入α-乳清蛋白乳腺特异性表达载体的山羊胎儿成纤维细胞生长迅速,仍保持原有的细胞生长形态。成功构建了α-乳清蛋白乳腺特异性表达载体,获得稳定转染的山羊胎儿成纤维细胞可用于核移植。; 任春环曹鸿国程箫冯颖张子军; 关键词：山羊胎儿成纤维细胞转染

fat-1基因脂肪组织特异性表达载体的构建及其山羊转基因细胞系的建立被引量：2: 2012年; 旨在构建一种筛选标记可全部去除的脂肪组织特异性表达fat-1基因的载体,将其转染山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定整合fat-1基因的转基因细胞系。首先将人工合成的fat-1基因连接至L28-Wnt10b载体(1种带有小鼠脂肪组织特异性启动子Fabp4的载体)上,构建成fat-1基因脂肪组织特异性表达载体L28-fat1;同时经多次克隆构建成1种筛选标记可全部去除的骨架载体MCS-3s-LoxP-RFP;然后,利用Hind III和Not I对上述2种载体进行双酶切,接着进行连接,构建出筛选标记可全部去除的脂肪组织特异性表达fat-1基因的表达载体。采用脂质体介导的方法转染山羊胎儿成纤维细胞,通过G418筛选转基因细胞。酶切鉴定及PCR检测结果表明,成功构建了3s-LoxP-RFP-FABP4-fat1表达载体,并首次获得了脂肪组织特异性表达fat-1基因的山羊胎儿成纤维转基因细胞系,为将来通过体细胞核移植创制脂肪组织特异表达fat-1基因的优质肉用转基因山羊新材料奠定了基础。; 陈建文刘星桂涛李运生章孝荣张瑾张运海; 关键词：转基因山羊

脂质体介导抗猪瘟病毒基因转染小鼠胚胎成纤维细胞的研究被引量：1: 2011年; 本研究旨在探索脂质体介导抗猪瘟病毒基因重组质粒PGPUG/GFP/Neo转染小鼠胚胎成纤维细胞的条件,为构建疾病模型动物及抗猪瘟病毒转基因猪提供技术平台。本研究比较了不同的小鼠胚胎成纤维细胞分离培养方法,将培养至3～5代的胚胎儿成纤维细胞,通过脂质体(LiPofectamineTM2000)介导转染抗猪瘟病毒基因重组质粒PGPUG/GFP/Neo。结果显示,在所选用的不同浓度脂质体和重组质粒,以及不同转染时间的组合中,2μL脂质体介导1.5μg重组质粒,转染6h时可获得19%的转染效率,极显著高于其他剂量和时间组合(P<0.01)。这些结果表明,脂质体、重组质粒及转染时间的优化组合,能有效介导抗猪瘟病毒基因重组质粒PGPUG/GFP/Neo转染小鼠胚胎成纤维细胞。; 孙旺吾曹俊新宋学雄; 关键词：小鼠胚胎成纤维细胞脂质体转染

脂质体介导抗猪瘟病毒基因转染猪胎儿成纤维细胞的条件优化: 2012年; 本研究以组织块法分离大白猪胎儿成纤维细胞(Porcine fetus fibroblasts,PFF),通过脂质体将含有抗猪瘟病毒基因及绿色荧光蛋白基因(GFP)的重组质粒转入猪胎儿成纤维细胞,探讨转染猪胎儿成纤维细胞的影响因素,如DNA质量、脂质体用量及转染时间。实验发现脂质体2.5uL、质粒1.2μg、转染时间6h时转染率最高,为32.5%。过量的脂质体、质粒及过长的转染时间(>6h)会引起细胞的皱缩及死亡。本研究旨在为构建抗猪瘟病毒转基因克隆猪提供核供体。; 曲洪磊李方正张莉平周婧宋学雄; 关键词：脂质体

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转基因生物新品种培育专项(2009ZX08006-007B)