四川省应用基础研究计划项目(2008JY0129-1)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 相关作者：苟兴华郭秀兰刘达玉孙雁霞苟小军更多>>
- 相关机构：成都大学农业部沼气科学研究所更多>>
- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 穿山龙薯蓣皂甙次生代谢合成相关新基因的克隆和分析被引量：1
- 2010年
- 穿山龙植物根进行的特定发育过程在药用次生代谢物——薯蓣皂甙生物合成和累积中发挥重要作用.为从穿山龙根中分离出薯蓣皂甙生物合成相关基因,利用抑制性消减杂交(SSH)和SMART技术,构建了3年生和1年生穿山龙(Dioscorea nipponica)根组织mRNA群体间正向差减cDNA文库.从该文库中随机挑选了34个cDNA克隆进行酶切、测序和序列同源性比较分析.结果表明:其中25个cDNA克隆代表了新的EST序列,对其中6个克隆在3年生根组织的表达进行了半定量PCR和定量PCR分析,分别命名为DNR1、DNR2、DNR3、DNR4、DNR5和DNR6.结果表明在不同的发育阶段其表达量具有差异,为根发育阶段差异性表达基因.该研究结果为克隆其全长基因和进一步研究其在薯蓣皂甙次生代谢生物合成中的功能提供了重要的实验基础.
- 苟兴华何明雄孙雁霞王跃华苟小军
- 关键词：穿山龙薯蓣皂甙抑制性消减杂交SMART技术定量PCR
- 麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因在巴斯德酵母中的表达及遗传稳定性被引量：5
- 2010年
- 海藻糖是一种具有很多功能的非还原性二糖,在生物制品和食品等行业中具有较广泛的用途.对来自芝田硫化叶菌(Sulfolobus shibatae)B12海藻糖酶转化过程中的关键酶基因--麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)基因进行了遗传密码子的人工改造,合成酵母偏爱密码子和修改基因遗传密码子中的A/T含量,然后将完整的MTHase基因克隆到酵母表达载体pPICZαA,筛选出重组载体并将其导入巴斯德酵母(Pichia pastoris)细胞进行重组表达以用于海藻糖的酶转化.最后获得了一株高效稳定表达MTHase的酵母菌株,分泌到表达培养基上清中的MTHase的酶活大于800U/mg(蛋白质),该重组菌株遗传稳定率达84%以上,为工业化酶法生产海藻糖奠定了一定基础.
- 苟兴华王卫刘达玉郭秀兰张佳敏唐仁勇李德华胡海洋
- 关键词：海藻糖芝田硫化叶菌密码子偏爱性毕赤酵母
