浙江省自然科学基金(Y2080599) 作品数:4 被引量:6 H指数:2 相关作者: 洪亮 付荣泉 丁继光 孙庆丰 吴金国 更多>> 相关机构: 温州医学院附属第三医院 中南大学 浙江大学医学院附属第一医院 更多>> 发文基金: 浙江省自然科学基金 温州市科技局资助项目 温州市科技局科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
转化生长因子β1小干扰RNA对肝星状细胞生物学特性的影响 被引量:2 2010年 目的 观察转化生长因子β1小干扰RNA(TGFβ1 siRNA)对肝星状细胞增殖、活化、胶原合成的影响.方法 利用脂质体将TGFβ1 siRNA表达质粒转入肝星状细胞中,培养72 h后,收集肝星状细胞和上清液,采用Western blotting和RT-PCR法分别检测细胞TGFβ1和a-SMA蛋白表达、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;MTT法检测细胞增殖活性和放射免疫法检测培养上清液中IV型胶原和透明质酸含量.结果 与无关对照siRNA组相比,TGFβ1和a-SMA蛋白表达分别下调(79±5)%和(55±4)%(均P〈0.01);细胞增殖活性降低(25±4)%(P〈0.01);Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达分别下调(63±6)%和(57±4)%(均P〈0.01);培养上清中IV型前胶原和透明质酸含量分别降低(53±8)%和(46±8)%(均P〈0.01).结论 TGFβ1 siRNA能显著下调TGFβ1的表达,抑制肝星状细胞活化、增殖及细胞外基质的合成和分泌. 付荣泉 谭德明 丁继光 吴金国 洪亮 孙庆丰 李强TGFβRⅡ-siRNA表达质粒构建及干扰效应鉴定 被引量:2 2010年 目的 通过构建转化生长因子βⅡ型受体小干扰RNA(TGFβRⅡ-siRNA)的表达质粒,观察其在肝星状细胞中对TGFβRⅡ的表达抑制效果,为研究其阻断肝纤维化作准备.方法 根据Ambion公司网上设计软件设计二个siRNA作用靶点,体外合成的相应双链DNA被插入pSilenc er2.1-U6质粒中,以脂质体Metafectene 2000转染HSC-T6细胞,利用RT-PCR法和western-blot分别检测对TGFβRⅡ mRNA和蛋白干扰效果.结果 表达针对TGFβRⅡ-siRNA的siRNA-a和siRNA-b二个质粒是成功构建;与对照组相比,其对TGFβRⅡ mRNA表达分别下调到0.89±0.06和0.25±0.03,对TGFβRⅡ蛋白表达分别下调到0.86±0.05和0.23±0.02,转染siRNA-b质粒组显著抑制TGFβRⅡ mRNA和蛋白表达(均P〈0.01),siRNA-a质粒组无统计学意义(均P〉0.05).结论 TGFβRⅡ-siRNA能明显抑制TGFβRⅡ的表达. 付荣泉 谭德明 丁继光 吴金国 洪亮 孙庆丰靶向转化生长因子β1的siRNA真核表达载体的构建及鉴定 2010年 [目的]构建靶向转化生长因子β1(TGFβ1)小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体.[方法]设计二个siRNA作用靶点,体外合成的相应双链DNA被插入pSilencer-2.1质粒中,对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序.采用脂质体转入HSC-T6细胞中,利用RT-PCR法和western-blot分别检测TGFβ1 mRNA和蛋白的表达.[结果]靶向TGFβ1 的siRNA-a和siRNA-b二个表达质粒是成功构建; 与无关对照组相比,siRNA-b组对TGFβ1mRNA和蛋白表达均明显下调( P 〈0.01),siRNA-a组无明显下调( P 〉0.05).[结论]成功构建了靶向TGFβ1 基因的siRNA表达质粒,为进一步研究其阻断肝纤维化打下基础. 付荣泉 盛吉芳 丁继光 吴金国 洪亮 孙庆丰 方辉关键词:RNA 转化生长因子Β TGFβRII-siRNA对肝星状细胞TGFβR/Smad信号通路的影响 被引量:2 2010年 目的:研究转化生长因子βⅡ型受体小干扰RNA(TGFβRⅡ-siRNA)对肝星状细胞TGFβR/Smad信号通路的影响。方法:构建TGFβRⅡ-siRNA的表达质粒,将TGFβRⅡ-siRNA质粒采用脂质体转染HSC-T6细胞。转染72 h后,采用半定量RT-PCR检测TGFβRⅡ、Samd2、Smad3、Smad7的mRNA的表达变化,放射免疫法测上清液Ⅲ型前胶原、IV型胶原和透明质酸含量变化。结果:与无关siRNA比较,TGFβRⅡ、Smad2和Smad3 mRNA表达差异有显著性(P<0.01),但Smad7表达差异无显著性,上清液Ⅲ型前胶原、IV型胶原和透明质酸含量明显减少(P<0.01)。结论:TGFβRⅡ-siRNA下调TGFβRⅡ、Samd2、Smad3 mRNA表达,减少肝星状细胞胶原合成,但对Smad7 mRNA无明显下调。 付荣泉 李刚 盛吉芳 丁继光 吴金国 洪亮 孙庆丰关键词:小干扰RNA 肝星状细胞