国家现代农业产业技术体系建设项目(nycytx009)
- 作品数：7 被引量：37H指数：3
- 相关作者：张桂红张民泽张得玉孙龙谢杰雄更多>>
- 相关机构：华南农业大学河南省农业科学院许昌学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪源戊型肝炎病毒ORF2部分基因的原核表达及其鉴定被引量：2
- 2012年
- 本试验旨在表达猪源戊型肝炎病毒(sHEV)ORF2部分基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析。以sHEV的cDNA为模板,PCR扩增ORF2基因片段,构建重组质粒pET32a-dORF2,转化表达菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting进行检测。试验结果表明,获得60ku的目的蛋白,该蛋白具有良好的抗原性,主要以可溶性形式存在。
- 欧阳昀张亮权刘志刚齐海涛徐廷川张民泽张超逸张桂红
- 关键词：戊型肝炎病毒ORF2基因重组质粒原核表达
- 可视化LAMP快速检测猪伪狂犬病毒被引量：10
- 2012年
- 为快速检测猪伪狂犬病毒(PRV),利用PRV DBP基因上的一段序列设计并合成3对LAMP引物,采用一种新的荧光染料——罗丹明B衍生物作指示剂,该指示剂在反应前加到反应缓冲液里,通过优化反应条件,建立了可视化LAMP快速检测PRV的方法。结果表明,63℃下恒温反应40min可得到肉眼可视结果,颜色变成蓝色判定为阳性,仍然保持紫色判定为阴性,可视化LAMP结果与电泳结果一致。建立的可视化LAMP方法可以快速、直观、准确地检测PRV。
- 王树芬王德国薛白李学伍赵东张改平
- 猪圆环病毒2型CC株ORF3基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2012年
- 为原核表达猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF3编码蛋白,本研究采用PCR方法以PCV2的CC株的基因组DNA为模板扩增ORF3基因,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白约为31 ku,并且以包涵体形式存在;western blot分析表明,ORF3重组蛋白能够与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应,表明原核表达的ORF3重组蛋白具有良好的反应原性。
- 徐廷川张亮权张得玉齐海涛张民泽张桂红
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF3原核表达
- 广东地区猪链球菌的耐药性特点及四环素耐药基因携带情况被引量：16
- 2013年
- 猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是危害世界养猪业的重要细菌性病原菌之一,本研究旨在了解猪链球菌临床分离株的耐药性特点和四环素耐药基因的携带情况,为临床上该病的防控提供科学依据。本试验采用K-B法和CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测猪链球菌广东分离株对18种抗菌药物的耐药性。结果显示,被检菌株对四环素类、磺胺类和氨基糖苷类抗菌药物表现较强的耐药性,尤其对四环素类药物的耐药率高达98.2%;对头孢菌素类药物比较敏感;菌株都耐受6种或6种以上的抗菌药物,其中以6和14重耐药菌株的数量最多,分别占20%和17%。本试验设计了4对引物检测四环素耐药基因携带情况,结果发现56株菌中以携带tetM基因为最多(85.71%)。结果表明tetM很可能是介导广东SS分离株对四环素产生极高耐药率的主要原因之一。
- 黄文明欧阳昀张民泽黄震谢杰雄孙龙张桂红
- 关键词：猪链球菌耐药性四环素耐药基因
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 根据GenBank中已登录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Nsp7基因中的保守区域设计合成了1对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测美洲型PRRSV的SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测方法,同时与商品化荧光定量PCR试剂盒进行比对分析。结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,能很好的区分美洲型猪繁殖与呼吸道综合征病毒和其他病毒。使用该方法对14份临床样品进行检测,阳性率85.7%,与商品化试剂盒符合率100%。
- 黄震魏春娅闫明菲田悦茹张民泽谢杰雄孙龙张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR
- 猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5重组杆状病毒疫苗的研究被引量：1
- 2010年
- 参照GenBank上收录的基因组序列自行设计引物,分别扩增猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5。将外源基因分别插入经改造的杆状病毒穿梭载体pFVC,获得3种重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2。将重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2分别转入带有杆状病毒骨架的DH10BacTME.coli感受态细胞中。提取高质量的重组质粒rBacmid-ORF2、rBacmid-ORF5、rBacmid-ORF5-ORF2,将重组质粒转染Sf9细胞,获取重组病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2。通过间接免疫荧光检测证实了外源基因正确表达。重组杆状病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2对BALB/c小鼠的免疫试验结果显示,rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2均能够刺激小鼠机体产生免疫应答,产生抗体,并能持续较长时间。
- 张翔峰何逸民曹宗喜孔留五张得玉秦宏阳张桂红
- 关键词：猪圆环病毒2型猪繁殖与呼吸综合征病毒重组杆状病毒
- 猪圆环病毒2型广东株全基因组的克隆与序列分析被引量：4
- 2010年
- 根据GenBank已发表的猪圆环病毒2型（PCV2）全基因组序列，设计2对特异性引物，对广东省不同地区规模化猪场采集的疑似断奶仔猪多系统消耗综合征（PMWS）组织病料进行了PCV2全基因组克隆和序列分析．结果表明，PCV2核苷酸序列较稳定，不同地区6个PCV2毒株全基因组序列均由1767bp组成，彼此间核苷酸序列相似性达95．3％～99．8％，亲缘关系密切；与GenBank已发表的国内不同地区PCV2参考毒株的相似性介于70．1％-99．1％；与欧洲各地区毒株的相似性介于67．7％～98．8％；其中与美国的毒株（AY094619）差异性最大，介于69．4％-70．8％之间．
- 张得玉何逸民秦宏阳张翔峰何冉娅曹宗喜张桂红
- 关键词：猪圆环病毒2型全基因组
