国家自然科学基金(81170106)
- 作品数：7 被引量：10H指数：1
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- 相关机构：武警后勤学院中国人民武装警察部队后勤学院天津市环湖医院更多>>
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- 人ZNF580基因的原核表达及单克隆抗体的制备
- 2017年
- 【目的】原核表达纯化人锌指蛋白(zinc finger protein 580,ZNF580)并制备抗人ZNF580单克隆抗体。【方法】将构建的重组质粒pET30a-ZNF580转化大肠杆菌BL21(DE3),由异丙基-β-D-半乳糖苷(Isopropyl beta-D-galactosidase,IPTG)诱导表达并纯化目的蛋白。将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备针对ZNF580的特异性单克隆抗体并通过ELISA和Western blotting方法鉴定。【结果】含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19 kDa,通过将Sp2/0细胞与免疫鼠的脾细胞融合获得了1株能稳定表达ZNF580抗体的杂交瘤细胞株(H4E4C5),其分泌的单克隆抗体的IgG亚类IgG2b,ELISA检测腹水抗体效价为1:1.28×10~5,Western blotting结果显示抗ZNF580单克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本实验成功表达并纯化了ZNF580蛋白并制备了抗ZNF580蛋白的单克隆抗体,为进一步研究锌指蛋白ZNF580的功能奠定了基础。
- 牟心红温晓昶李海生张文成
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 酵母双杂交筛选与转录因子ZNF580相互作用的蛋白被引量：1
- 2012年
- 目的:寻找可能与锌指转录因子ZNF580存在相互作用的蛋白。方法:以ZNF580基因开放阅读框作为模版,PCR扩增后连接入酵母表达质粒pGB。诱饵质粒pGB-ZNF580经测序验证后转化酵母菌株Y190,人胎脑cDNA文库亦转化到能稳定表达诱饵蛋白的Y190酵母菌株中,并铺到含有营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-His/-Leu)的培养皿上进行初步筛选。所得阳性克隆再进行β-半乳糖苷酶克隆转移滤纸实验进一步去除假阳性。随机挑取部分阳性克隆,逐一转化入含有诱饵质粒的Y190酵母菌进行一对一验证。分离阳性克隆质粒测序,并应用生物信息学方法分析阳性克隆cDNA编码的蛋白。结果:确定了14种与ZNF580可能存在相互作用的蛋白。结论:初步探讨了ZNF580的功能及其可能参与的信号转导通路,为进一步研究转录因子ZNF580参与动脉粥样硬化的机制奠定了实验基础。
- 罗玉玉杨蓉孔麟麟任党丽张文成
- 关键词：转录因子酵母双杂交蛋白相互作用
- TGF-β1/Smads信号通路与eNOS在内皮细胞稳态及动脉粥样硬化发生中的作用被引量：9
- 2013年
- TGF-β1/Smads信号转导途径在动脉粥样硬化中的作用是当前心血管病研究的活跃领域。内皮细胞的病变是动脉粥样硬化发生发展的始动因素,内皮细胞有表达eNOS的体系。TGF-β1与内皮细胞表达eNOS关系密切,eNOS维持内皮细胞稳态。本综述旨在探讨TGF-β1/Smads信号通路对内皮细胞表达eNOS的调节机制,为内皮细胞稳态的维持和动脉粥样硬化的预防提供新的科学依据。
- 赵瑛罗玉玉张文成
- 关键词：动脉粥样硬化内皮细胞SMADSENOS
- 不同浓度TGF-β对内皮细胞锌指基因ZNF580表达的影响
- 2014年
- 目的探讨不同浓度转化生长因子(TGF-β)对内皮细胞锌指基因ZNF580表达的影响。方法以不同浓度(0.25~4 ng/ml)的TGF-β刺激EA.hy926内皮细胞12 h,提取细胞总RNA,通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析ZNF580基因在内皮细胞中的表达情况。结果成功提取内皮细胞总RNA并进行RT-PCR反应;当TGF-β浓度从0.25~2 ng/ml逐渐增加时,ZNF580的表达呈逐渐下降趋势(P<0.05,P>0.01);但继续增加TGF-β刺激浓度至4 ng/ml,ZNF580的表达又有所回升(P<0.05)。结论随TGF-β刺激浓度逐渐升高,EA.hy926内皮细胞中ZNF580基因表达呈先降低后升高变化,表明ZNF580很可能是受TGF-β信号转导通路调控的核转录因子,ZNF580和Smad2间的相互作用及ZNF580转录活性的改变可能进一步影响下游相应靶基因的转录,进而影响内皮细胞的功能。
- 韩国亮任党丽赵英张梅张文成罗玉玉
- 关键词：动脉粥样硬化TGF-Β转录因子
- 大鼠锌指蛋白ZFP580的原核表达与分离纯化
- 2012年
- 【目的】构建ZFP580基因的原核表达质粒,转化大肠杆菌,诱导表达并分离纯化大鼠锌指蛋白ZFP580。【方法】根据ZFP580 cDNA序列的开放阅读框设计引物,利用PCR技术扩增ZFP580的开放阅读框cDNA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别双酶切、回收纯化后做定向连接,Nco I、Xho I双酶切电泳筛选、鉴定并测序。将构建的重组质粒pET30a-ZFP580转化大肠杆菌BL21(DE3),由异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化目的蛋白。【结果】成功扩增ZFP580基因并构建了表达质粒pET30a-ZFP580,测序结果表明与GeneBank公布的序列一致。含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19 kDa。【结论】成功表达并纯化了大鼠ZFP580蛋白,为进一步研究锌指蛋白ZFP580的功能奠定了基础。
- 牟心红李海生梁林张文成
- 关键词：原核表达
- 带有Flag标签的ZNF580真核表达载体的构建及扩增
- 2013年
- 目的构建并扩增带有Flag标签的ZNF580真核表达载体,用于免疫共沉淀实验。方法 pGB-ZNF580质粒进行SfiI酶切,琼脂糖电泳,切胶并纯化回收ZNF580片段,与同样酶切的真核表达载体pCDEF-Flag连接构建重组质粒pCDEF-Flag-ZNF580。重组质粒转化细菌感受态,铺于氨苄抗性LB平板,37℃培养箱过夜,挑取转化了重组质粒的单克隆接种于液体LB培养基中摇床培养4～8 h。从大肠杆菌中提取质粒酶切鉴定及送Takara公司测序鉴定。结果成功构建重组质粒pCDEF-Flag-ZNF580并转化细菌感受态,于大肠杆菌中扩增得到足够用于细胞转染和免疫共沉淀实验的重组质粒,Takara测序结果显示重组质粒序列完全正确。结论成功构建和扩增了重组质粒pCDEF-Flag-ZNF580,为后续进行真核细胞的转染及免疫共沉淀实验奠定了基础。
- 罗玉玉赵瑛孔麟麟张文成
- 关键词：转录因子真核表达载体
- 牛磺酸对颅脑创伤小鼠海马区GFAP和TauT表达的影响
- 2018年
- 【目的】通过研究牛磺酸对急性重型颅脑创伤(traumatic brain injury,TBI)小鼠海马胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和牛磺酸转运体(taurine transporter,TauT)表达的影响探讨牛磺酸对颅脑机械损伤的治疗作用。【方法】选择BALB/C小鼠18只,随机分为假手术组(Sham组)、脑创伤组(TBI组)、牛磺酸治疗组(Tau组),每组6只。采用液压打击法在小鼠左侧大脑半球制作TBI模型,Sham组只在相同位置开骨窗,不予打击。Sham组、Tau组造模后立刻尾静脉注射牛磺酸(10 mg/kg),TBI组给予相同剂量的无菌生理盐水。脑创伤后24、48 h分别进行免疫组化染色检测伤侧海马TauT和GFAP蛋白表达。【结果】(1)TBI组在脑损伤后24 h较Sham组伤侧海马TauT表达明显下降(P<0.01),与TBI组相比,Tau组小鼠TauT表达明显增加(P<0.01)。伤后48 h,TBI组较Sham组伤侧海马TauT表达下降更加明显(P<0.01),Tau组较TBI组表达上升趋势显著(P<0.01)。(2)伤后24 h,与Sham组相比,TBI组小鼠GFAP表达明显增加(P<0.01);与TBI组相比,Tau组小鼠GFAP表达无显著差异(P=0.198)。伤后48 h,TBI组较Sham组小鼠伤侧GFAP增加趋势更加明显(P<0.01);与TBI组相比,Tau组小鼠GFAP表达明显下降(P<0.01)。【结论】牛磺酸通过上调急性重型脑损伤小鼠脑部海马区牛磺酸转运体、抑制胶质纤维酸性蛋白表达,发挥其对神经组织创伤的治疗作用。
- 温晓昶孟斌黄慧玲靳颖牟心红
- 关键词：颅脑损伤牛磺酸
