国家教育部博士点基金(20060635008)
- 作品数：16 被引量：57H指数：5
- 相关作者：朱勇张永亮艾均文张学松柳照应更多>>
- 相关机构：西南大学周口师范学院中华人民共和国农业部更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金重庆市教委科研基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学更多>>
- 野桑蚕各发育时期酚氧化酶原基因的表达谱分析被引量：2
- 2010年
- 酚氧化酶在昆虫的免疫防御机制中起着非常重要的作用。利用在GenBank上登录的野桑蚕酚氧化酶原基因的cDNA序列,设计正反向特异引物,通过半定量RT-PCR技术检测了酚氧化酶原基因PPO1及PPO2在野桑蚕不同发育时期（蚁蚕、一龄、二龄、三龄、四龄、五龄1~6 d、预化蛹和蛹）的转录表达活性。结果表明,PPO1基因除了五龄1 d无表达及二龄表达量较低外,其他时期的表达量均较高。PPO2基因在野桑蚕的不同发育时期中均有表达,并且没有明显的差异。说明在野桑蚕的不同发育时期,PPO1基因的表达是特异性的,而PPO2基因的表达是非特异的。
- 张永亮朱勇
- 关键词：野桑蚕发育时期
- 桑尺蠖多酚氧化酶的纯化及其部分生物化学性质被引量：4
- 2007年
- 经硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤等步骤,使桑尺蠖Phthonandria atrineata(Butler)多酚氧化酶纯化,纯化倍数为6.28倍.该酶对焦性没食子酸、邻苯二酚和L-多巴的Km值分别为9.64 mmol/L、6.82 mmol/L和4.30 mmol/L.这种多酚氧化酶在pH=7.0,37℃时活性最高.利用多种氧化酶抑制剂对该酶活性的抑制结果表明,所用抑制剂对其均有不同程度的抑制作用.此外,该酶对EDTA和金属离子比较敏感.
- 张永亮曾媛琴贾永红柳照应艾均文朱勇
- 关键词：桑尺蠖多酚氧化酶纯化抑制剂
- 野桑蚕多酚氧化酶分离纯化的试验初报被引量：5
- 2009年
- 多酚氧化酶是昆虫初生新表皮硬化过程中的关键性酶。为有利于研究野桑蚕(Bombyxmandarina)多酚氧化酶的功能与性质,探讨了野桑蚕多酚氧化酶的分离纯化方法。以野桑蚕5龄幼虫为材料,用磷酸盐缓冲液浸提多酚氧化酶粗提液,再经40%饱和度硫酸铵沉淀、透析及Sephadex G-100凝胶过滤进一步分离纯化,得到了部分纯化的多酚氧化酶,其酶纯化倍数为57.14倍±0.19倍,酶得率为10.17%±0.18%,酶比活力为(10 166.67±66.16)U/mg。采用该试验方法可有效分离纯化野桑蚕多酚氧化酶。
- 张永亮朱勇
- 关键词：野桑蚕多酚氧化酶纯化
- 桑尺蠖多酚氧化酶的分离纯化被引量：3
- 2010年
- 多酚氧化酶是昆虫初生新表皮硬化过程中的关键酶。为了研究桑尺蠖(Phthonandria atrineata)多酚氧化酶的功能与性质,探讨了桑尺蠖多酚氧化酶的分离纯化方法。以桑尺蠖五龄幼虫为材料,用磷酸盐缓冲液提取多酚氧化酶粗提液,再经80%饱和度硫酸铵沉淀、透析及SephadexG-100凝胶过滤进一步分离纯化,得到了部分纯化的多酚氧化酶,其酶纯化倍数为6.28倍,酶得率为3.34%,酶比活力为812.8 U/mg。
- 张永亮朱勇
- 关键词：桑尺蠖多酚氧化酶纯化
- 家蚕P450基因CYP18A1的克隆、序列分析及转录活性被引量：13
- 2008年
- 蜕皮激素对昆虫生长、发育和繁殖有重要调控作用,尤其对蜕皮和变态过程。利用GenBank上登录的蜕皮激素C26羟基化酶候选基因CYP18A1的氨基酸序列对家蚕Bombyx mori全基因组数据库进行BLASTP比对,发现了家蚕直向同源基因(ortholog),其完全编码序列经RT-PCR检测和克隆、测序验证后,再以此为信息探针检索家蚕表达序列标签(expressed sequence tags,EST)数据库进行拼接延伸,获得了一条包括5′非翻译区在内的长度为1737bp的cDNA序列,验证结果也表明与电子克隆序列完全一致(GenBank登录号为EF421988,P450命名委员会将其命名为CYP18A1)。该基因的开放阅读框为1623bp,编码541个氨基酸,含有包括P450s特征结构域在内的所有昆虫P450基因的5个保守结构域,其推定的分子量为61.67kD,等电点为8.54。将该基因cDNA序列与家蚕基因组序列进行比对,结果表明该基因具有6个外显子,5个内含子,外显子/内含子边界符合经典的GT-AG规则。同源性分析也发现家蚕CYP18A1与其他昆虫的直向同源基因具有较高相似性。用RT-PCR方法对家蚕主要发育变态时期与组织进行检测,显示出该基因的转录表达不仅具有时空特异性,而且在表达时期上与已报道的蚕体内蜕皮激素含量变化有紧密的一致性。该研究进一步证实了CYP18A1基因与昆虫体内蜕皮激素代谢平衡相关联。
- 艾均文王根洪李艳红余泉友张学松朱勇向仲怀
- 关键词：家蚕细胞色素氧化酶克隆转录活性
- 家蚕变态期酚氧化酶原基因PPO1的表达谱分析被引量：7
- 2008年
- 酚氧化酶在昆虫的变态发育和免疫防御机制中起着非常重要的作用。利用GenBank上登录的家蚕酚氧化酶原基因PPO1的cDNA序列设计正反向特异引物,通过半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测了家蚕变态期(从5龄第3天到化蛾)雌、雄个体酚氧化酶原基因PPO1的转录活性。家蚕雌性变态期的PPO1基因仅在5龄第4天和上蔟第0、12、24、36、48、60小时及第3、4、5、6、8、10天有表达,其中上蔟第48小时和上蔟第3天的表达量最高;而在雄性家蚕变态期,该基因仅在5龄第4、5、6天及上蔟第36、48小时与第3、5、9、10天和蛾期有表达,其中上蔟第5天的表达量最高。家蚕PPO1基因的转录表达具有时空特异性,推测其在家蚕雌、雄个体变态发育的不同时期中执行不同的功能。
- 张永亮朱勇
- 关键词：家蚕表达谱变态期
- 家蚕和野桑蚕酚氧化酶原基因的组织表达差异比较被引量：12
- 2009年
- 酚氧化酶在昆虫体液免疫反应中起着非常重要的作用。根据GenBank中登录的家蚕和野桑蚕酚氧化酶原基因cDNA序列设计特异引物,用半定量RT-PCR方法检测了家蚕和野桑蚕各组织中酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)的表达谱,发现该基因在家蚕和野桑蚕组织中的表达差异较大,且具有明显的组织特异性。家蚕PPO1基因只在血液中被检出有很高的表达,而野桑蚕PPO1基因在血液和头部中均有表达,且在血液中的表达量最高;PPO2基因在家蚕组织中的表达量从高至低顺序为血液、脂肪体、卵巢、头部、表皮、精巢、中肠和丝腺,而在野桑蚕组织中的表达量从高至低顺序为血液、头部、中肠、表皮、精巢、卵巢和脂肪体,在丝腺中没有被检出有表达。推测可能是由于起源于野桑蚕的家蚕在长期的驯化及人工选择过程中引起了酚氧化酶原基因功能的变化。
- 张永亮朱勇
- 关键词：家蚕野桑蚕组织表达谱半定量RT-PCR
- 野桑蚕酚氧化酶原基因cDNA的分子克隆及其特征(英文)被引量：2
- 2008年
- 酚氧化酶在昆虫的免疫防御机制中起着重要作用。利用RT-PCR和RACE方法,克隆了野桑蚕酚氧化酶原基因,获得了其cDNA序列。该序列长2 134 bp,含有一个2 082 bp的完整开放阅读框,编码一个由693个氨基酸残基组成的蛋白质。推导的氨基酸序列与其他鳞翅目昆虫PPO2基因相应氨基酸序列有较高的同源性,该序列具有它们的PPO基因所共有的典型特征。组织特异性表达分析表明了该基因在野桑蚕5龄幼虫的血细胞、体壁、头部、精巢、卵巢、脂肪体和中肠等组织及其不同的发育阶段均有表达。这些结果为进一步研究野桑蚕酚氧化酶原基因的功能提供了分子基础。
- 张永亮黄重李志清张春冬朱勇
- 关键词：野桑蚕克隆
- 槲皮素和硫脲对野桑蚕多酚氧化酶的抑制类型被引量：4
- 2011年
- 多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)在昆虫的变态发育和免疫防御中起着非常重要的作用,为开发以该酶为靶标的新型害虫抑制剂提供理论依据,以野桑蚕(Bombyx mandarina)五龄幼虫为材料提取多酚氧化酶,探讨了槲皮素和硫脲对该酶的抑制作用。结果表明,这两种抑制剂分别属于竞争性和非竞争性抑制剂。
- 张永亮朱勇
- 关键词：多酚氧化酶槲皮素硫脲
- 家蚕细胞色素P450基因CYP6AE2的分子克隆与序列分析被引量：11
- 2007年
- 为了在分子水平上研究家蚕(Bom byx mori)细胞色素P450基因的特性,更好地探讨该基因与家蚕抗性的相关机制,依据已有的家蚕基因组数据,通过BLASTP比对,选择与抗性相关的6家族中含有预测基因数量最多的CYP6AE亚家族的1条序列,并设计1对引物,用RT-PCR方法克隆了家蚕细胞色素P450家族基因CYP6AE2(Gen-Bank登陆号:EF415296)。该基因的ORF为1 572 bp,编码523个氨基酸,推定的蛋白质分子质量为60.2 kD,等电点为8.50。将该基因的cDNA和家蚕基因组序列比对,结果表明该基因只有1个内含子;与已知的同亚家族基因CYP6AE1(欧洲防风草结网毛虫Depressaria pastinacella)、CYP6AE12(棉铃虫Helicoverpa armigera)编码的氨基酸序列比对,同源性同为53%。
- 艾均文董元凌孔卫青杨金宏刘劲张永亮张学松柳照应朱勇
- 关键词：家蚕细胞色素P450基因基因克隆
