上海市科学技术委员会资助项目(04ZR14106)
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 全反式维甲酸诱导下NB4细胞TGF-β1信号转导途径基因表达的变化
- 2008年
- 目的:探讨全反式维甲酸(all-transretinoic acid,ATRA)诱导分化急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leuke-mia,APL)过程中转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号转导途径基因表达的变化。方法:应用荧光实时定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)的方法检测ATRA作用于人APL细胞株NB4不同时间后TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad2、Smad3、Smad4和Smad7 mRNA表达的变化。利用共聚焦显微镜观察NB4细胞中间接免疫荧光法标记的PML-RARα融合蛋白和Smad3蛋白定位。结果:在ATRA诱导NB4细胞分化过程中,TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad 2、Smad 3、Smad 4和Smad 7的表达量逐渐上升,48或72h时表达量达到最高,然后逐渐下降,而无水乙醇对照组则无明显变化;在NB4细胞中PML-RARα融合蛋白和Smad3蛋白有共定位现象。结论:TGF-β1信号转导途径与NB4细胞的分化密切相关,ATRA可以上调该信号转导途径中基因的表达。PML-RARα融合蛋白可以和Smad3蛋白结合。
- 徐榕陈芳源钟华赵劲秋黄洪晖林佳瑶欧阳仁荣
- 关键词：白血病粒细胞维甲酸白血病
- 全反式维甲酸诱导NB4细胞分化过程中TGF-β1/Smad信号途径蛋白表达的变化
- 2008年
- 目的:观察在全反式维甲酸(ATRA)作用下,人急性早幼粒细胞白血病(APL)NB4细胞株转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号转导途径中蛋白表达的变化,探讨TGF-β1/Smad途径在NB4细胞分化过程中的作用机制。方法:将ATRA作用于NB4细胞株不同时间后,应用蛋白印迹(Western blot)方法检测TGF-β1、Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)、Smad2、Smad4和Smad7蛋白表达的变化。结果:ATRA作用3h后TβRⅠ、TβRⅡ的表达量开始增加;12h后TGF-β1的表达量开始增加,随着加药时间延长,蛋白表达量逐渐上升,48h表达量至最高,然后下降。而Smad2、4、7蛋白的表达在加药3～6h后开始增加,呈逐渐上升趋势,Smad2表达量于48h达峰值,然后逐渐下降;而Smad4和Smad7的最高值出现较晚,出现在72h,然后下降。结论:TGF-β1信号转导途径与APL细胞的分化密切相关,ATRA在体外能上调TGF-β1/Smad途径的蛋白表达,以发挥抗白血病效应。
- 林佳瑶陈芳源王海嵘钟华黄洪晖钟济华王利民
- TGF-β/Smads信号转导与白血病细胞的关系被引量：4
- 2008年
- 转化生长因子β(TGF-β)是一种多功能的细胞因子,参与细胞的生长、分化、衰老、凋亡、伤口愈合、胚胎发育等多方面的调节。TGF-β作为一种肿瘤抑制信号,在实体肿瘤中有信号降低或异常表达,在正常、异常造血中也有调节作用。TGF-β抑制细胞生长的作用贯穿于整个正常造血过程,能将细胞稳定在静止期,是细胞周期抑制物,下调造血刺激因子及肿瘤蛋白的表达。在异常造血过程中,TGF-β/Smads信号通路组成部分的突变失活或TGF-β表达下调导致TGF-β/Smads信号转导通路破坏,肿瘤细胞得以异常生长和分化。PML-RARα能通过抑制nPML和cPML途径来抑制急性早幼粒细胞白血病的TGF-β信号转导及其功能。当全反式维甲酸治疗PML-RARα表达降低后,TGF-β信号转导又可恢复。
- 沈璟璟钟璐陈芳源
- 关键词：转化生长因子-ΒSMADS蛋白白血病
- miRNA-146a在全反式维甲酸诱导NB4细胞分化中的变化及作用被引量：1
- 2009年
- 目的:检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导的急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞株NB4分化前后表达发生显著变化的微小RNA(miRNA),并对其靶基因进行预测及功能研究,进而探讨miRNA在APL发生中的作用机制。方法:ATRA(1μmol/L终浓度)处理NB4细胞,分别于4、24、72和96h时收集细胞,用miRNA基因芯片检测细胞分化前后各时间点的表达谱差异,找出其中关键的miRNA;实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quanti-tative PCR,RFQ-PCR)(TaqMan探针)方法验证其表达,并对其靶基因进行预测;应用RFQ-PCR及Western印迹法检测靶基因及靶蛋白的表达情况。结果:miRNAs芯片检测结果显示:表达显著上调的miRNAs有8个,显著下调的有15个;其中miRNA-146a在ATRA处理NB4细胞4、24、72和96h后的表达量,分别是处理前的0.82、0.83、0.44和0.37倍。利用TargetScan软件对其靶基因进行预测,发现TGF-β1信号转导途径中的公共调节型Smad4是其中一个靶基因。ATRA处理后Smad4mRNA的表达量上调,蛋白表达水平也呈逐渐上升趋势。结论:抑制miRNA-146a的表达有可能通过上调其靶基因Smad4的表达,恢复TGF-β1信号转导通路,在ATRA诱导APL细胞分化中发挥重要作用。
- 杨爽钟华陈芳源王海嵘王利民钟济华黄洪晖
- 关键词：维甲酸细胞分化微RNAS
- PML-RARα融合蛋白对Smad蛋白转录调节作用的影响
- 2007年
- 目的:探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML-RAR$融合蛋白对Smad蛋白转录调节作用的影响及其机制。方法:用PML-RAR$融合蛋白表达质粒与(CAGA)9-lux报告基因质粒共转染293T细胞,测定荧光素酶活性,分析PML-RAR$融合蛋白对(CAGA)9-lux报告基因转录活性的影响;利用共聚焦显微镜观察APLNB4细胞中间接免疫荧光法标记的PML-RAR$融合蛋白和Smad2、Smad3蛋白。结果:PML-RAR$融合蛋白可使(CAGA)9-lux报告基因转录活性下降(P<0.05);NB4细胞中PML-RAR$融合蛋白和Smad2、Smad3蛋白有共定位现象。结论:NB4细胞中的PML-RAR$融合蛋白可与Smad2、Smad3蛋白结合,抑制TGF-β1信号途径的传导。
- 徐榕陈芳源钟华赵劲秋黄洪晖林佳瑶欧阳仁荣
- 关键词：SMAD急性早幼粒细胞白血病转录调节
