国家自然科学基金(30660125)
- 作品数：24 被引量：50H指数：4
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- 脂质体转染胚盘细胞将外源质粒pEGFP-C2导入鹌鹑胚的研究
- 2013年
- 运用脂质体转染第X期胚盘细胞的方法将外源质粒pEGFP-C2经脂质体包裹后注射到鹌鹑种蛋X期胚盘下腔,孵化种蛋。提取孵化6d的鹌鹑胚基因组DNA,进行PCR检测,嵌合体阳性率为84%,证实外源基因在胚胎中的表达。对孵化至出壳的G0代鹌鹑组织进行DNA提取并PCR分析,以及组织切片荧光检测,证实外源基因在G0代鹌鹑组织中成功表达。结果表明脂质体转染胚盘细胞是一种制备转基因鹌鹑行之有效的方法。
- 李艳李洪涛段丹丹赵宗胜
- 关键词：脂质体转染胚盘细胞荧光检测
- 利用DGE筛选早期雌性鸡与鹌鹑属间杂交种性分化相关基因被引量：1
- 2016年
- 已有研究表明鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎早期死亡与性别分化存在关联性,本试验通过高通量测序构建数字基因表达谱(DGE)筛选雌性鸡与鹌鹑杂交种早期(3d)性别分化的相关基因,有助于揭示胚胎性腺分化时期相关基因与其早期死亡间的作用,利用实时荧光定量PCR技术对筛选出与相关表达差异基因进行验证。结果表明,构建雌雄鸡、雌雄杂交种3d胚胎DGE文库,雌鸡与雄鸡之间差异表达基因中有25个上调,41个下调;雌杂交种与雌鸡之间差异表达基因中有55个上调,175个下调;雌杂交禽和雄杂交禽之间差异表达基因中有36个上调,36个下调;这些差异基因大都与胚胎生长发育、细胞分化繁殖相关基因为代表。GO功能富集分析表明,差异表达基因主要定位在参与细胞增殖、分化、胚胎发育等行使催化、促进生物学过程的功能;Pathway分析得出,雌雄鸡、雌鸡与雌杂交种、雌雄杂交种的差异基因分别富集在12、13、15条pathway中。分析推测得出可能由于这些差异基因在体内紊乱表达,导致调控胚胎发育、分化相关信号通路异常是雌杂交种早期死亡原因之一,筛选出的差异基因将为后续的雌性杂交种早期发育、死亡研究提供依据。
- 翟曼君赵宗胜李青峰胡海龙
- 关键词：鸡胚胎性别分化
- MLP在肉鸡、蛋鸡及其与鹌鹑属间杂交禽胚胎肌肉发育过程中的差异表达
- 2017年
- 本研究旨在探讨MLP基因在蛋种鸡(♂)×鹌鹑(♀)和肉种鸡(♂)×鹌鹑(♀)子代杂交禽胚胎肌肉发育过程中的表达规律,以及该基因在2种杂交禽中的差异表达情况。通过人工受精获得蛋鸡、肉鸡(♂)与鹌鹑(♀)杂交禽蛋,将4种受精蛋在相同条件下孵育。通过实时荧光定量PCR对7~17d胚胎胸肌组织中MLP基因的mRNA相对表达量进行测定,4种胚胎样品每天各测1次。结果显示,在胚胎肌肉发育的7~12d,4个物种的MLP mRNA表达水平很低,且在13d出现瞬时增高。其中,MLP mRNA的表达在鹌鹑胚胎发育14d达到高峰,在肉鸡胚胎发育的15d达到高峰。肉杂交禽在13~17d维持相对稳定的高表达水平,并在14,16d达到高峰。而蛋杂交禽在15d达到高峰后出现极显著性下降。上述结果表明,MLP mRNA的表达规律与肌管融合相一致,可能参与到肌管的融合过程,MLP可能在胚胎肌肉生长和发育过程中起调控作用。
- 胡海龙赵宗胜梁耀伟张虎军
- 关键词：鹌鹑MLP实时荧光定量PCR
- 绵羊支原体肺炎中不同甘露(聚)糖结合凝集素基因型对肺组织病变的影响被引量：3
- 2012年
- 为建立不同甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)基因型绵羊支原体肺炎的动物疾病模型,本研究选择MBL外显子1中4种不同基因型共32只绵羊作为试验组,6只健康羊作为对照组,在人工感染绵羊肺炎支原体3周后全部迫杀,取肺脏组织做病理切片,以组织病理学评分确定肺部的炎症反应程度。不同MBL型绵羊的肺脏呈现不同程度病理改变,组织病理学评分结果为MBL A型和B型平均分为18.3和19.1,表现为重度病变;MBL D型平均分为12.3,为中度病变;MBL C型平均分为8.9,为轻度病变。本研究以组织病理学评分方法客观量化了不同MBL基因型肺部炎症反应的严重程度,根据评分结果推测MBL A型和B型为易感型,C型为抗性型。本研究利用组织病理学评分方法对其肺炎程度进行量化评价,为筛选绵羊支原体肺炎抗性基因型提供依据。
- 张慧赵宗胜赵凤余鹏
- 关键词：绵羊肺炎支原体MBL组织病理学绵羊
- 雌激素受体等基因在鸡、鹌鹑及其属间杂交种早期胚胎中的表达分析
- ＜正＞引言鸡与鹌鹑属间杂交是一类比较典型的远缘杂交,其杂交不育的一个重要表现是杂交种胚胎孵化早期死亡,死亡集中时间为3-5天,与其性分化时期吻合,而胚胎的性分化在早期受性激素影响,特别是雌激素在性分
- 赵宗胜曹体婷班谦
- 关键词：杂交种胚胎雌激素受体实时定量PCR
- 文献传递
- 利用DGE技术筛选雌雄鹌鹑胚胎发育至第3天与性别分化相关的差异表达基因被引量：1
- 2014年
- 为了研究鹌鹑早期性别分化时期基因的表达情况,本研究利用数字表达谱技术(DGE)对发育至第3天的雌性鹌鹑胚胎和雄性鹌鹑胚胎进行研究。结果显示:建立了雌性鹌鹑胚胎和雄性鹌鹑胚胎2个DGE文库,对比分析后得到了34个差异表达的基因,其中雌性胚胎相对于雄性胚胎10个为上调基因,24个为下调基因,通过对这些差异基因进行GO/KO富集性分析,筛选出了4个跟性别分化相关的基因,分别为HINT1、ASW、HSD17B4基因和未知功能的ID为ENSGALG00000013312的基因。
- 李青峰赵宗胜郑炜翟曼君
- 关键词：鹌鹑性别分化差异表达基因
- Formestane和17β-estradiol诱导鸡、鹌鹑胚胎性反转的研究
- ＜正＞引言性别分化就是性别发育成表型性别的过程,这一过程严格受遗传控制。鸡的性别决定与分化过程与哺乳动物存在很大差别,容易受到性激素变化的影响。可以利用人工方法,用雌激素或雄激素处理鸡胚,以调节
- 米拉古丽姚守秀冯欣璐姚秀娟赵宗胜
- 关键词：鸡胚性反转17Β-ESTRADIOL
- 文献传递
- 脂质体转染胚盘细胞制备携pEGFP-C2基因的转基因鹌鹑
- 2014年
- 利用脂质体转染第X期胚盘细胞的方法将外源质粒pEGFP-C2经脂质体包裹后注射到鹌鹑种蛋X期胚盘下腔,处理种蛋110枚,封口后孵化。出壳9只G0代,出壳率为8.18%。经检验6只鹌鹑中有4只为阳性,阳性率为66.67%。对成年的4只转基因鹌鹑中的1只内脏组织进行PCR分析以及切片荧光检测,证实外源基因在G0代成年鹌鹑组织中成功表达。将3只成年转基因鹌鹑分别与野生型鹌鹑进行杂交,得到G1代阳性率分别为33.96%、20.59%、10%。再将3只成年转基因公母鹌鹑之间进行杂交,得到G1代阳性率分别为10.87%、42.86%。证实利用脂质体转染胚盘细胞制备转基因鹌鹑是可以将外源基因整合到G0代生殖系中,且外源基因能遗传给后代。
- 李艳王小义李青峰赵宗胜
- 关键词：脂质体转染荧光检测
- 鸡与鹌鹑杂交种早期胚胎与性分化相关的ER等基因的表达被引量：1
- 2014年
- 本研究旨在对影响鸡与鹌鹑杂交早期胚胎发育及性分化4个基因的表达进行检测,初步判定其对杂交种胚胎性别分化和早期死亡可能起到的作用。研究选取杂交早期胚胎发育不同时间点(72、78、84、90、96、102、108、114、120、144、168和192h)活胚全胚,在鉴定杂交种早期胚胎性别的基础上,采用Real-time PCR方法检测雌雄杂交早期胚胎发育过程中不同时间点性分化相关基因的表达。结果表明,鸡与鹌鹑杂交胚胎中3β-HSD和ER基因雌性的表达量总体显著高于雄性。3β-HSD表达量雄性胚胎在72h最低,雌性和雄性杂交胚胎96h表达量最高。在90h内雌、雄性杂交胚胎P-450c17基因表达水平较高,在78h达到最高峰,在90h内的各个时间点雌性与雄性比较差异极显著(P<0.01)。杂交胚胎P-450arom基因在雌性可以检测到表达,但是雄性不能检测到表达。在杂交胚胎发育早期ER的表达有2个时间点是高峰,分别在72和108h。
- 刘贤侠冯欣璐赵宗胜李大全高树
- 关键词：ER基因
- FGF8、SHH、FOXL2基因在鸡胚成纤维细胞中的调控作用研究被引量：1
- 2017年
- 为了研究SHH、FGF8和FOXL2三个基因在鸡和鹌鹑杂交禽胚胎早期发育中的作用,分别构建鸡SHH、FGF8和FOXL2三个基因共9个RNA干扰载体,构建FGF8基因和SHH基因的过表达载体;将干扰载体和过表达载体分别转染鸡胚成纤维细胞。结果表明:FGF8基因通过MAPK信号通路影响杂交种胚胎早期发育;SHH基因通过Hedgehog信号通路影响杂交种胚胎早期发育;FOXL2基因通过调节DMRT1、SOX9和CYP19等基因的表达变化来影响杂交种胚胎早期发育。本研究可为进一步研究雌性杂交种胚胎早期死亡的原因奠定理论基础。
- 张虎军赵宗胜翟曼君郑炜李青峰
- 关键词：RNA干扰
