国家重点基础研究发展计划(2009CB008300)
- 作品数：3 被引量：14H指数：3
- 相关作者：谢鹏齐志国刘霞刘成宇朱晓峰更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院佳木斯大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 星形胶质瘤细胞GFAP的缺失对细胞周期相关蛋白的影响被引量：3
- 2016年
- 目的:应用RNA干扰(RNAi)方法下调胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)基因表达,研究GFAP对星形胶质瘤细胞U251细胞增殖的影响及可能的作用机制。方法:采用小分子RNA干扰(Small interfering RNA,si RNA)技术特异性的干扰U251细胞中内源性GFAP的表达,并通过RT-PCR和Western blot技术检测U251细胞中GFAP的m RNA和蛋白表达水平,确定干扰效率。Western blot技术检测si-NC和si-GFAP转染48 h后,U251细胞中GFAP、CREB、cyclin D1、CDK2、CDK4、CDK6、p15、p18、p27、Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白表达变化;MTT检测各组的细胞增殖情况。结果:(1)在U251细胞中特异性的抑制GFAP表达,抑制细胞增殖,降低细胞总RNA和总蛋白含量(si-NC组vs.si-GFAP组:t=3.962,P=0.017;t=3.833,P=0.019)。(2)在U251细胞中干扰GFAP表达,显著性抑制CREB(si-NC组vs.si-GFAP组:t=4.834,P=0.008)、cyclin D1(si-NC组vs.si-GFAP组:t=3.610,P=0.023)、CDK2(si-NC组vs.si-GFAP组:t=6.678,P=0.003)和CDK4(si-NC组vs.si-GFAP组:t=4.530,P=0.011)的表达水平;并且显著性提高细胞周期依赖性激酶抑制因子p18(si-NC组vs.si-GFAP组:t=-3.339,P=0.029)和p27(si-NC组vs.si-GFAP组:t=13.859,P=0.000)的蛋白表达水平。(3)MTT检测结果显示24和48 h时si-GFAP组细胞生长速度明显低于si-NC组(si-NC组vs.si-GFAP组:t=6.389,P=0.000;t=6.058,P=0.000),差异有统计学意义。(4)在U251细胞中抑制GFAP表达,对凋亡相关蛋白Bax(si-NC组vs.si-GFAP组:t=-0.657,P=0.547)、Bcl-2(si-NC组vs.si-GFAP组:t=-0.991,P=0.378)和Caspase 3(si-NC组vs.si-GFAP组:t=-1.848,P=0.138)的表达无明显影响。结论:在U251细胞中抑制GFAP的表达,影响细胞周期相关蛋白的表达,从而抑制细胞的增殖。
- 刘成宇谢鹏
- 关键词：细胞周期抑郁症
- GAD_(65)基因修饰的神经干细胞移植治疗癫痫的实验研究被引量：8
- 2011年
- 目的:将谷氨酸脱羧酶65(GAD65)基因修饰的神经干细胞移植到海仁酸颞叶癫痫模型大鼠海马中,检测目的基因在脑内的表达以及基因工程化细胞移植对癫痫的影响。方法:建立海仁酸致癫痫大鼠模型,完全随机分为GAD-NSCs移植组、单纯NSCs移植组、生理盐水对照组,每组20只。在移植后1、2、3天,1、2、4、8周各时间点,通过小剂量戊四氮诱发试验检测大鼠的癫痫敏感性;移植l周后,取海马进行WesternBlotting检测GAD65表达;移植8周后,取脑组织,进行海马区HE病理染色及BrdU和GAD65的免疫组化染色。结果:移植后,GAD-NSCs移植组2天就表现出癫痫敏感性下降,而单纯NSCs移植组术后2周才出现该变化,并且生理盐水对照组和单纯NSCs移植组Racine评分标准评分高于GAD-NSCs称植组;Western Blotting检测表明仅有GAD-NSCs移植组海马区GAD65高表达;GAD-NSCs移植组的BrdU阳性标记细胞、GAD65阳性标记细胞均显著高于其他两组。结论:GAD65基因修饰神经干细胞移植到癫痫大鼠海马中,海马区GAD65呈高表达,可持续抑制实验动物癫痫敏感性,并对移植后的宿主神经干细胞具有保护作用,改善实验动物神经病理变化。
- 刘霞齐志国谢鹏
- 关键词：神经干细胞谷氨酸脱羧酶癫痫
- EPCs与NSCs共移植对MCAO模型大鼠神经功能缺损恢复影响被引量：3
- 2010年
- 目的:将体外培养的EPCs与NSCs共移植体移入MCAO模型大鼠脑内,观察缺血区血管新生和神经功能缺损修复情况。方法;选择240只SD大鼠随机分为假手术组、MCAO组、MCAO+NSCs组、MCAO+EPCs组、MCAO+EPCs和NSCs共移值体组,在1d、3d、7d、14d、30d、60d各时间点观察各组脑缺血半暗区微血管密度和大鼠的电生理指标(运动诱发电位)及行为学(mNSS改良神经功能评分)。结果:MCAO+NSCs组的微血管密度与MCAO组在各时间点无差别;MCAO+EPCs组、MCAO+EPCs和NSCs共移值体组的微血管密度除1d外其他各时间点均高于MCAO组。在7d后MCAO+NSCs组、MCAO+EPCs组、MCAO+共移植体组运动诱发电位与缺血对照组有差异,MCAO+共移植体组差异最大。MCAO+EPCs组、MCAO+共移值体组与MCAO照组相比在3d后有差异,MCAO+共移植体组差异最大。结论:EPCs与NSCs共移植体移入MCAO模型大鼠脑内,可增加其缺血半暗区血管新生,促进神经功能的进一步恢复。
- 齐志国梁红梅朱晓峰谢鹏
- 关键词：血管新生神经功能
