重庆市自然科学基金(2006B135428)
- 作品数：9 被引量：57H指数：5
- 相关作者：李孝生王文丽陈爽邢旎旎阳宏更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院重庆市第三人民医院重庆医科大学附属口腔医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 川芎嗪和siRNA沉默转化生长因子β1干预大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子的表达
- 2012年
- 背景:作者前期研究发现川芎嗪可以通过抑制肝星状细胞的增殖、阻抑p38MARK信号通路、下调结缔组织生长因子的表达等多途径发挥抗肝纤维化的作用。一般认为转化生长因子β1是促进纤维化发生最重要的细胞因子,结缔组织生长因子是转化生长因子β1的下游效应介质,siRNA靶向抑制转化生长因子β1可能成为治疗肝纤维化的新方法。目的:观察川芎嗪及化学合成的siRNA转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子表达的影响。方法:体外培养大鼠肝星状细胞,从3条siRNA转化生长因子β1中筛选一条有效的基因沉默片段,然后利用脂质体转染试剂共同转染培养24h的细胞作为转染组,并设计空白对照组、转染试剂组、川芎嗪组及联合治疗组。结果与结论:与空白对照组相比,转染组、川芎嗪组、联合治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原及结缔组织生长因子mRNA表达均下调(P<0.05)。在转染组、川芎嗪组及联合治疗组,结缔组织生长因子蛋白表达均下调(P<0.05);培养上清液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量均降低(P<0.05)。结果表明,siRNA沉默转化生长因子β1基因能下调结缔组织生长因子的表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。川芎嗪也能下调结缔组织生长因子的表达,但对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的抑制作用更加显著,提示川芎嗪抗肝纤维化可能是多种作用靶点。
- 向颖李军贾茜阳宏李孝生
- 关键词：川芎嗪小干扰RNA转化生长因子Β1肝星状细胞结缔组织生长因子
- 川芎嗪对转化生长因子β1刺激肝星状细胞CTGF及Ⅰ型胶原表达的影响被引量：6
- 2009年
- 研究川芎嗪对大鼠肝星状细胞株(hepatic stellate cell-T6,HSC-T6)结缔组织生长因子CTGF(connective tissue growth factor)及Ⅰ型胶原表达的影响.培养HSC-T6细胞,不同浓度川芎嗪与转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激的HSC-T6共同孵育.用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)法检测HSC-T6增殖;免疫细胞化学法观察川芎嗪对CTGF表达的影响;Western印迹法检测CTGF蛋白的表达.ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)法测定Ⅰ型胶原表达.结果表明,一定浓度(100、200、400、600mg/L)川芎嗪能抑制HSC-T6增殖,且呈剂量依赖性.免疫细胞化学结果显示随着川芎嗪浓度的升高,CTGF表达依次递减,与正常对照组比较,具有显著性差异(t=4.216,P<0.01).川芎嗪还可以明显抑制CTGF蛋白的表达,并可抑制I型胶原合成,二者抑制程度呈正相关关系(r=0.861,P<0.01).川芎嗪可能通过抑制HSC-T6细胞增殖,下调CTGF的表达,阻断Ⅰ型胶原合成,从而发挥其抗肝纤维化的作用.
- 陈爽李孝生王文丽
- 关键词：川芎嗪肝星状细胞结缔组织生长因子转化生长因子-Β1
- 川芎嗪对肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子表达的影响被引量：6
- 2009年
- 目的探讨川芎嗪(TMP)对肝星状细胞HSC-T6增殖及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法不同剂量的TMP作用于HSC-T6细胞不同时间后,MTT法检测细胞的增殖;ELISA法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原和透明质酸(HA)的合成;West-ern blot法测定CTGF的表达。结果100～1000mg/L的TMP作用于HSC-T6细胞后,细胞的增殖明显受到抑制,且呈剂量依赖性;Ⅰ型、Ⅲ型胶原和HA的合成减少,CTGF的表达也减少,二者下降程度呈正相关(r分别为0.727、0.643和0.769)。结论TMP能够有效抑制肝纤维化形成,其可能的机制为抑制HSC增殖并降低CTGF的表达,从而阻断细胞内基质的形成。
- 王文丽李孝生陈爽
- 关键词：川芎嗪肝星状细胞结缔组织生长因子
- 川芎嗪及大鼠CTGF miRNA质粒对高糖刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、转化生长因子-beta的影响被引量：4
- 2014年
- 本文旨在研究川芎嗪及大鼠结缔组织生长因子(CTGF)miRNA质粒对高糖刺激大鼠肝星状细胞(HSC)的CTGF和转化生长因子-beta(TGF-beta)mRNA表达量、蛋白表达量及Ⅰ型胶原表达量的作用。首先体外培养大鼠HSC以及稳定表达大鼠CTGF miRNA和稳定表达阴性质粒的大鼠HSC,高糖及川芎嗪作用后提取总RNA、总蛋白及收集细胞上清液,检测川芎嗪及大鼠CTGF miRNA质粒对高糖刺激HSC的CTGF、TGF-beta及Ⅰ型胶原表达量。实验结果表明,高糖导致HSC的CTGF mRNA、CTGF蛋白、TGF-beta mRNA、TGF-beta蛋白及Ⅰ型胶原表达量增加(P<0.05)。川芎嗪组CTGF mRNA、CTGF蛋白、TGF-beta mRNA、TGF-beta蛋白及Ⅰ型胶原的表达量较高糖组低(P<0.05)。大鼠CTGF miRNA质粒干扰组CTGF mRNA、CTGF蛋白、TGF-beta mRNA、TGF-beta蛋白及Ⅰ型胶原的表达量较高糖组低(P<0.05)。川芎嗪组与大鼠CTGF miRNA质粒干扰组相比,CTGF mRNA及CTGF蛋白的表达量差异无统计学意义(P>0.05),川芎嗪组Ⅰ型胶原的表达量明显低于大鼠CTGF miRNA质粒干扰组(P<0.05)。因此,高糖可刺激CTGF、TGF-beta、Ⅰ型胶原的表达,而川芎嗪、大鼠CTGF miRNA质粒可导致CTGF、TGF-beta、Ⅰ型胶原的表达量下降。
- 阳宏李军邢旎旎向颖沈艳李孝生
- 关键词：川芎嗪肝星状细胞结缔组织生长因子
- 川芎嗪对肝星状细胞基质金属蛋白酶13和金属蛋白酶组织抑制剂1表达的影响被引量：13
- 2009年
- 背景：既往动物实验表明,川芎嗪能降低肝纤维化大鼠血清Ⅲ型胶原、透明质酸及层粘连蛋白水平,延缓肝纤维化的形成,但其具体作用机制尚不清楚。目的：观察川芎嗪对肝星状细胞增殖及基质金属蛋白酶13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1mRNA表达的影响,并探讨川芎嗪抗肝纤维化的可能机制。设计、时间及地点：观察性实验,于2006-11/2007-06在重庆医科大学基础医学研究所完成。材料：盐酸川芎嗪注射液（10mL∶80mg）,使用时用含体积分数为0.1小牛血清的1640培养基稀释,为巴里莫尔制药（通化）有限公司产品;肝星状细胞株HSC-T6,系SV40转染SD大鼠肝星状细胞而成,其表型为活化的肝星状细胞,由中国医学科学院肿瘤研究所提供。方法：培养肝星状细胞株,传至三四代时增殖明显即可用于实验。实验分为2组,空白对照组：仅加入细胞;药物干预组：分别加入川芎嗪0.01,0.1,1,10,50,100,200,400,600,1000mg/L后作用于HSC-T6。主要观察指标：四甲基偶氮唑盐比色法测定肝星状细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及透明质酸质量浓度;反转录-聚合酶链反应检测基质金属蛋白酶13和基质金属蛋白酶13mRNA的表达。结果：①与空白对照组相比,川芎嗪100-1000mg/L各剂量组作用不同时间的吸光度值均降低（P〈0.01）。在川芎嗪100-1000mg/L这一质量浓度范围内,随着药物质量浓度加大,对细胞的抑制作用增加。②川芎嗪（100,200mg/L）对Ⅰ、Ⅲ型胶原、透明质酸的产生有抑制作用（P〈0.05-0.01）,并随着药物质量浓度增加,抑制作用增强。10mg/L川芎嗪对Ⅰ、Ⅲ型胶原均没有影响,但可以降低透明质酸质量浓度（P〈0.05）。③100,200mg/L川芎嗪可促进基质金属蛋白酶13的表达,随药物质量浓度增大,基质金属蛋白酶13/基质金属蛋白酶组织抑制因子1比值增大（P〈0.05-0.01）。结论：川芎嗪抗纤维化的可能机制�
- 王文丽李孝生李文生
- 关键词：川芎嗪基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶组织抑制因子
- 川芎嗪与大黄酸联用对大鼠免疫性肝纤维化的治疗作用被引量：19
- 2007年
- [目的]观察川芎嗪和大黄酸2种单体联用(简称芎黄联用)治疗猪血清诱导的大鼠肝纤维化的效果,并探讨其可能作用机制。[方法]将48只雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组、模型对照组、大黄酸组、川芎嗪组及芎黄联用组,各治疗组在造模同时分别用相应药物干预,于16周末处死全部大鼠。分光光度比色法检测肝组织匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);免疫组织化学方法观察Smad 4、Smad 7、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达及其在细胞中的定位。[结果]与模型对照组比较,芎黄联用组的肝组织中MDA水平明显降低,SOD水平明显升高;大鼠肝组织内Smad4、TGF-β1、CTGF表达明显降低,Smad 7表达明显升高,肝纤维化程度明显减轻。[结论]芎黄联用能有效地减轻猪血清诱导的肝纤维化大鼠的肝损伤及纤维化程度,其机制可能与干预肝内脂质过氧化反应及抑制TGF-β1和CTGF表达有关。
- 王朝阳李孝生尚军洁
- 关键词：肝纤维化大黄酸川芎嗪转化生长因子Β1结缔组织生长因子
- 大鼠结缔组织生长因子基因miRNA表达质粒的构建及其稳定转染大鼠肝星状细胞系的建立被引量：1
- 2013年
- 目的构建大鼠结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)基因miRNA表达质粒,并建立稳定转染大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)系。方法根据大鼠CTGF基因mRNA序列,设计并合成3对寡聚单链DNA X191-1、X191-2和X191-3及1对阴性对照序列DNA X191-4,将4对寡聚单链DNA退火成双链后,分别与载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR连接,构建CTGF基因miRNA重组表达质粒,分别转染HSC-T6细胞,荧光显微镜观察细胞的转染效率,RT-PCR检测转染细胞中CTGF基因mRNA的转录水平;取干扰效率最高的重组质粒及阴性对照质粒,分别转染HSC-T6细胞,经杀稻瘟菌素持续加压筛选。结果经测序鉴定,重组表达质粒构建正确,插入片段的碱基序列与设计相符;细胞的瞬时转染效率约为50%;3组干扰质粒转染的HSC-T6细胞中,CTGF基因mRNA的转录水平明显低于空白对照组(P<0.01),其中X191-2质粒对CTGF基因转录的干扰效率最高;获得了稳定转染的HSC-T6细胞。结论成功构建了CTGF基因miRNA表达质粒,并获得了稳定转染的肝星状细胞系,为进一步研究肝纤维化的形成机制及其治疗奠定了基础。
- 阳宏李孝生向颖邢旎旎沈艳
- 关键词：结缔组织生长因子肝星状细胞
- 川芎嗪对大鼠肝纤维化转化生长因子β1、Smad2/3表达的影响被引量：11
- 2013年
- 目的研究川芎嗪对大鼠肝纤维化TGF-β1/Smads信号通路的影响。方法 Wistar雄性大鼠50只,随机分为5组:空白组、模型组、川芎嗪组(200 mg/kg组、400 mg/kg组、800 mg/kg组)。用CCl4诱发大鼠肝纤维化,川芎嗪不同剂量组作用大鼠8周后处死并分离肝星状细胞。应用免疫细胞化学法及Western印迹法检测肝星状细胞中TGF-β1、Smad 2/3的表达及分布。结果 TGF-β1、Smad 2/3均主要表达于肝星状细胞中。免疫细胞化学结果示TGF-β1主要在胞核表达,Smad 2/3蛋白则在胞核及胞浆均有表达。CCl4注射诱导后,大鼠肝组织中TGF-β1、Smad 2/3蛋白的表达较空白对照组明显增强(P<0.05)。随着川芎嗪浓度(200、400、800 mg/kg)的升高,TGF-β1、Smad 2/3蛋白在肝组织的表达强度呈逐级递减的趋势,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论川芎嗪可能通过抑制TGF-β1/Smads信号转导通路,从而发挥其抗肝纤维化的作用。
- 陈爽张艳李孝生
- 关键词：川芎嗪肝纤维化转化生长因子B1SMAD肝星状细胞
- 自体骨髓干细胞治疗肝硬化基础研究与临床应用现状被引量：3
- 2011年
- 背景:活体肝移植仍面临很多问题:如供体的匮乏、移植后的免疫排异反应及其高额的费用等,因此使其在临床上的开展受到限制。目的:说明自体骨髓干细胞移植可以分化成熟肝细胞而替代受损的肝脏组织发挥功能,从而改善患者症状,提高患者生活质量。方法:利用计算机在PubMed、CNKI、万方数据库和维普数据库中检索2000-01/2010-12关于自体骨髓干细胞移植相关文章,在标题和摘要中用"骨髓干细胞;自体骨髓干细胞移植;肝硬化"或"Bone marrow stem cell,autologous bone marrow stem cell,hepatic cirrhosis"为检索词进行检索。选择与骨髓干细胞移植相关的文章内容,同一领域文献选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到235篇文献,根据纳入标准选择20篇文章进行综述。结果与结论:通过对自体骨髓干细胞移植从基础研究及临床研究方面的最新进展的了解,说明自体骨髓干细胞移植在对肝硬化的治疗方面前景广阔。
- 邢旎旎李孝生
- 关键词：骨髓干细胞自体骨髓干细胞移植肝硬化动物实验
