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江苏省自然科学基金(BK20088171)
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
相关作者:
叶建新
任大明
仉元亭
张学光
陈卫昌
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相关机构:
复旦大学
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发文基金:
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陈卫昌
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任大明
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叶建新
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中国免疫学杂...
年份
1篇
2009
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含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌株的构建与鉴定
被引量:2
2009年
目的:构建含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261(减毒鼠伤寒沙门氏菌)疫苗菌。方法:将质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入LB5000(鼠伤寒沙门氏菌)进行甲基化,利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261,抗生素筛选后挑取单个菌落扩增进行抽提质粒和PCR鉴定,SL3261疫苗菌与HepG2细胞体外共培养,荧光显微镜和RT-PCR分别检测GFP(绿荧光蛋白)的表达和4-1BBL基因的转录。结果:导入pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261经抽提质粒电泳后获得了同原转化质粒相同大小的目的条带,质粒PCR获得了约930bp的条带,200个HepG2细胞感染SL3261为201±46CFU、SL3261-pIRES2-EGFP为163±37,而SL3261-pIRES2-EGFP-4-1BBL为158±32,含质粒SL3261在体外感染HepG2细胞的能力同原细菌基本相同(P>0.05)。感染含质粒SL3261的HepG2细胞观察到GFP表达,感染含重组质粒SL3261的HepG2细胞经RT-PCR检测到约930bp的目的条带。结论:成功构建了能携带大鼠4-1BBL基因真核表达质粒的SL3261疫苗菌。
叶建新
仉元亭
陈卫昌
张学光
任大明
关键词:
4-1BBL基因
减毒沙门氏菌
DNA疫苗
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