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流感病毒H1N1在MDCK细胞的培养及纯化条件的优化: 目的优化流感病毒HlNl在MDCK细胞上的培养条件,高效扩增流感病毒。方法对MDCK细胞培养流感病毒时添加的TPCK-Trypsin的浓度和培养基的种类进行了筛选;比较了不同细胞代次的MDCK对流感病毒的易感性;按MOI...; 冯婷涂文伟黄娟李晋蓉殷仲伟范营营李虹; 关键词：流感病毒; 文献传递

流感病毒多表位基因盒的设计与预测被引量：1: 2012年; 目的预测流感病毒抗原表位并设计合成多表位基因盒。方法收集不同类型流感病毒基因序列,联合运用Syf-peithi、ProPred、Multipred2、Bcepred、Clastal X1.83、SWISS-MODEL等多种生物信息学软件进行分析,预测流感病毒Matrix1(M1)、Matrix2(M2)、Nucleoprotein(NP)和HA蛋白上的抗原表位,设计并合成流感病毒多表位基因盒。结果在不同亚型流感病毒的HA蛋白抗原上成功筛选出2个B细胞表位,在M1、M2及NP蛋白上分别筛选出3个T细胞表位,以一定的间隔序列串联各表位,设计并合成流感多表位基因盒。预测结果显示该多表位基因盒具有良好的同源性及抗原性。结论成功设计出包含T细胞表位及B细胞表位的流感病毒多表位基因盒Eg,为流感多表位基因疫苗的研发奠定了基础。; 邵京京丰锋张强李虹李明远王保宁李婉宜; 关键词：流感病毒抗原表位生物信息学分析

Ag85A-HA2原核表达载体的构建及其抗甲型流感病毒免疫效果的研究被引量：1: 2014年; 目的构建结核杆菌分泌型抗原85A(Ag85A)与流感病毒血凝素(HA)中HA2(Ag85A-HA2)原核表达载体,并表达融合蛋白,研究其抗流感病毒的免疫保护效果。方法构建Ag85A-HA2原核表达载体pET-32a(+)/Ag85A-HA2;异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达Ag85A-HA2融合蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,并使用吸附多聚组氨酸标签(His-Tag)的蛋白纯化柱分离纯化蛋白;甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)攻击重组蛋白免疫后的BALB/c小鼠(并设PBS对照组),通过观察小鼠肺病理切片、测定肺指数及肺指数抑制率、死亡保护率等指标分析其免疫保护效果。结果成功构建了原核表达载体pET-32a(+)/Ag85A-HA2;SDS-PAGE电泳分析显示成功表达相对分子质量为70×103的重组融合蛋白;动物实验表明,融合蛋白Ag85A-HA2对IAV攻击后的小鼠肺指数抑制率达到39.30%,死亡保护率达到80%,效果明显高于PBS对照组(P<0.05),肺部病理切片也证实融合蛋白Ag85A-HA2对小鼠肺部的保护效果显著。结论成功构建了Ag85A-HA2原核表达载体并表达出融合蛋白,该融合蛋白在动物体内能发挥良好的抗甲型流感病毒感染的免疫保护效果。; 邵京京杨靖戴军孟俊杰裴德翠李虹潘兴李婉宜; 关键词：甲型流感病毒流感病毒血凝素免疫效果

流感病毒多表位基因盒的设计与预测: 目的预测流感病毒抗原表位并设计合成多表位基因盒。方法收集不同类型流感病毒基因序列,联合运用SYFPEITHI、ProPred、MULTIPRED2、Bcepred、ClastalX1.83、SWISS-MODEL等多种生...; 邵京京丰锋张强李虹王保宁李婉宜李明远; 关键词：流感病毒抗原表位生物信息学分析; 文献传递

流感病毒受体结合表位真核载体的构建及表达: 目的构建甲型流感病毒血凝素（HA）的信号肽（SP）与HA唾液酸受体结合部位（RB）所含T、B表位的基因片段（RBT、RBB）的真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法（overlap-...; 罗俊王欢戴军左斌裴德翠丰峰李婉宜邝玉王保宁蒋忠华李虹李明远; 文献传递

流感病毒H1N1在MDCK细胞的培养及纯化条件的优化被引量：18: 2012年; 目的优化流感病毒H1N1在狗肾细胞(MDCK)上的培养条件,高效扩增流感病毒。方法对MDCK细胞培养流感病毒时添加的胰酶(TPCK-Trypsin)浓度和培养基的种类进行筛选;比较不同细胞代次的MDCK对流感病毒的易感性;按MOI值0.001、0.01、0.1接种H1N1于MDCK细胞,CPE>75%时收获病毒上清,并按MOI值0.001接种H1N1后连续培养,分别于1、2、3、4、5d收获病毒上清,HA试验检测上清病毒滴度,浓缩纯化后行TCID50检测,分别选取最佳接种MOI值和收毒时间;对浓缩纯化病毒的红细胞吸附方法进行检验。结果通过对比,确定TPCK-Trypsin的最佳使用浓度是0.25μg/ml,MEM为培养病毒的最佳培养介质;代次低的MDCK对流感病毒的易感性强于代次高的MDCK细胞;按MOI值0.001接种H1N1于MDCK细胞,第3d收获的上清病毒滴度最高,为1∶1 024;用红细胞吸附法浓缩纯化流感病毒的Log 1/TCID50为8.5。结论选用MEM,添加0.25μg/ml TPCK-Trypsin,使用低代次MDCK,病毒接种含量MOI=0.001为H1N1最佳培养条件,红细胞吸附法能高效浓缩纯化培养上清中的H1N1。; 冯婷殷仲伟李晋蓉范营营涂文伟李虹; 关键词：流感病毒

姜黄素防治兔眼增生性玻璃体视网膜病变的实验研究被引量：2: 2011年; 背景先前的系列研究表明，姜黄素可以诱导体外培养的兔视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡，抑制其RPE细胞的增生，且在玻璃体内应用后不良反应较小，具有防治增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的潜在价值。目的探讨姜黄素玻璃体内注射对RPE细胞诱导的兔眼PVR模型的防治效果。方法新西兰白兔20只40只眼，所有兔眼玻璃体注射前先抽取0．2ml玻璃体液，然后在兔眼玻璃体内注射0．1ml（2×10^6）同种RPE细胞，每只兔随机选取1只眼立即注入1mg／L的姜黄素0．1ml作为姜黄素组（20只眼），对侧眼注入等量的含质量分数0．5‰DMSO的生理盐水作为对照组（20只眼）。注药后1、3、7、14、21、28d裂隙灯显微镜下观察角膜、房水、晶状体的透明度及眼前节炎症反应情况；使用间接检眼镜、眼底彩色照相和B型超声检查玻璃体视网膜情况。以视网膜脱离发生眼数作为检测指标，评价姜黄素对PVR的防治效果。结果玻璃体注药后1d、3d所有兔眼发生眼前节炎症反应，玻璃体轻中度混浊，但未见增生条带及视网膜脱离。玻璃体注药后7d，所有兔眼前节炎症反应基本消退，对照组14只眼（75％）玻璃体出现增生条带，姜黄素组2只眼（10％）玻璃体内出现增生条带，差异有统计学意义（P〈0．01），但2组均未见视网膜脱离。注药后14d，对照组11只眼（55％）出现视网膜脱离，姜黄素组2只眼（10％）出现视网膜脱离，差异有统计学意义（P〈0．01）；注药后21d，对照组16只眼（80％）出现视网膜脱离，姜黄素组3只眼（15％）出现视网膜脱离；注药后28d，对照组19只眼（95％）出现视网膜脱离，姜黄素组3只眼（15％）出现视网膜脱离，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论姜黄素玻璃体腔内注射可以有效预防RPE细胞诱导的兔眼实验性PVR的发生发展。; 安建斌马景学刘丹岩高彦军崔月先蔡素贞刘丽娅; 关键词：姜黄素玻璃体视网膜病变增生视网膜脱离

Vγ9Vδ2-T lymphocytes have impaired antiviral function in small-for-gestational-age and preterm neonates被引量：1: 2013年; Jinrong LiHong LiHuawei MaoMeixing YuTing FengFan YangYingying FanQiao LuChongyang ShenZhongwei YinWenwei TuMeng Mao; 关键词：T淋巴细胞微生物感染

甲型H1N1流感大流行的机遇与挑战: 2010年; 自2009年4月北美首次发现甲型H1N1流感病毒以来，该新型猪源病毒已播散至全球，引起21世纪首次流感大流行，对人类健康产生巨大威胁。与季节性流感不同，本次甲型H1N1流感大流行是由一种整合了古典猪流感、欧亚猪流感、禽流感和人季节性H3N2流感病毒基因的新型四源重组毒株引起。; 涂文伟毛华伟秦刚郑建李虹刘宇隆; 关键词：流感大流行甲型病毒基因 H3N2 季节性

Human Vγ9Vδ2-T cells efficiently kill influenzavirus-infected lung alveolar epithelial cells被引量：3: 2013年; Hong LiZheng XiangTing FengJinrong LiYinping LiuYingying FanQiao LuZhongwei YinMeixing YuChongyang ShenWenwei Tu; 关键词：A型流感病毒肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体肺泡细胞毒活性

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国家自然科学基金(30973235)

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