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国家高技术研究发展计划(2007AA100601)

作品数:10 被引量:77H指数:6
相关作者:姚斌杨培龙王亚茹黄火清石鹏君更多>>
相关机构:中国农业科学院饲料研究所浙江省淡水水产研究所浙江大学更多>>
发文基金:国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”动物营养学国家重点实验室开放课题基金更多>>
相关领域:生物学农业科学化学工程更多>>

文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 6篇生物学
  • 4篇农业科学
  • 1篇化学工程

主题

  • 6篇聚糖酶
  • 4篇木聚糖
  • 4篇木聚糖酶
  • 2篇饲料
  • 2篇酵母
  • 2篇甘露聚糖
  • 2篇甘露聚糖酶
  • 2篇高通量
  • 2篇高通量筛选
  • 2篇毕赤酵母
  • 1篇蛋白质工程
  • 1篇低聚糖
  • 1篇点突变
  • 1篇淀粉酶
  • 1篇定点突变
  • 1篇性质分析
  • 1篇芽孢
  • 1篇芽孢杆菌
  • 1篇异麦芽低聚糖
  • 1篇植酸

机构

  • 5篇中国农业科学...
  • 1篇哈尔滨师范大...
  • 1篇吉林大学
  • 1篇兰州大学
  • 1篇湖北工业大学
  • 1篇浙江大学
  • 1篇中南民族大学
  • 1篇浙江省淡水水...
  • 1篇中国农业大学
  • 1篇中国农业科学...

作者

  • 5篇姚斌
  • 3篇杨培龙
  • 2篇黄火清
  • 2篇王亚茹
  • 2篇石鹏君
  • 1篇丁强
  • 1篇王阳
  • 1篇付正
  • 1篇孙建义
  • 1篇张华山
  • 1篇高朝辉
  • 1篇柏映国
  • 1篇罗会颖
  • 1篇曾小英
  • 1篇李志民
  • 1篇陈轶群
  • 1篇李樊
  • 1篇杨霞
  • 1篇熊海容
  • 1篇曹云鹤

传媒

  • 4篇中国农业科技...
  • 1篇生物技术通讯
  • 1篇棉花学报
  • 1篇湖北农业科学
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇吉林大学学报...
  • 1篇Journa...

年份

  • 1篇2011
  • 6篇2010
  • 2篇2009
  • 1篇2008
10 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的分泌表达被引量:8
2010年
目的:研制高效分泌表达枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的毕赤酵母基因工程菌株。方法与结果:将优化设计的枯草芽孢杆菌MA139β-甘露聚糖酶基因用EcoRⅠ/XbaⅠ双酶切,克隆到诱导型表达载体pPICzαA中α因子信号肽编码序列的下游,转化大肠杆菌筛选重组质粒,转化毕赤酵母X-33感受态细胞,经Zeocin筛选,获得重组表达菌株X-33/mann。将重组菌株在10L全自动发酵罐中进行高密度发酵培养,甲醇诱导72h发酵活力达到2100U/mL。重组甘露聚糖酶的最适催化温度为40℃,最适催化pH值为6.0。结论:枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中获得了高效分泌表达,具有开发作为饲料添加剂的潜能。
马威沈志娜陈轶群李志民曹云鹤
关键词:Β-甘露聚糖酶枯草芽孢杆菌毕赤酵母分泌表达
高比活木聚糖酶XYN-W及其突变体在酵母中的高效表达被引量:3
2010年
将来源于瘤胃真菌Neocallimastix frontalis的高比活木聚糖酶基因xyn-w整合到毕赤酵母表达载体pPIC9上,通过电击转化得到重组转化子。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,木聚糖酶基因xyn-w得到了高效分泌表达,在5 L发酵罐中木聚糖酶蛋白表达量达到1 mg/mL,酶活性达到13 000 IU以上。XYN-W的C端57个氨基酸序列为连接序列和锚定区域,利用PCR方法将此段序列去除,得到截短的木聚糖酶序列xyn-m。用相同方法构建高效表达XYN-M蛋白的毕赤酵母工程菌株,表达产物经纯化后进行酶学性质测定,结果表明,其比活为19 856.6 IU/mg,Kcat值为4 433.8 s-1,与纯化的XYN-W蛋白(比活性13 795.3 IU/mg、Kcat值2 717.1 s-1)相比,分别提高了43.9%和63.2%。
罗建杰王亚茹袁铁铮柏映国黄火清罗会颖姚斌范云六
关键词:木聚糖酶毕赤酵母
链霉菌Streptomyces sp. S9木聚糖酶基因xynBS9的克隆表达及性质分析被引量:2
2009年
通过设计简并引物和构建基因组文库的方法从链霉菌Streptomycessp.S9中克隆得到-βl,4-木聚糖酶基因xynBS9。该基因全长1 023 bp,编码340个氨基酸。将不带原基因信号肽编码序列的xynBS9以正确阅读框架克隆到表达载体pET-22b(+)上,并在大肠杆菌BL2 l(DE3)中诱导表达。重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和疏水柱纯化后达到电泳纯。酶学性质分析表明,重组木聚糖酶最适温度为60℃,最适pH为6.5,在碱性条件下具有良好的稳定性。
姚国玉李宁石鹏君陈强姚斌
关键词:链霉菌木聚糖酶
嗜热真菌木聚糖酶1YNA的表达和定点突变被引量:6
2011年
为了进一步提高嗜热真菌(Thermomyces lanuginosus DSM10635)本已较耐热的木聚糖酶1YNA的热稳定性。利用重叠延伸PCR技术从嗜热真菌基因组DNA中扩增获得了木聚糖酶1YNA的基因xyl,将其插入到大肠杆菌表达载体pET-22b(+)中,构建了重组表达质粒pET-22b(+)-xyl。该质粒转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)后获得了能成功表达的工程菌。工程菌表达木聚糖酶1YNA的最适温度为65℃,最适pH值为6.0。其在75℃,pH值为6.5的条件下失活处理30min后还残存有30%的酶活,与嗜热真菌生产的木聚糖酶特性相近。在对该木聚糖酶的N端氨基酸序列进行定点突变后发现,T4A、T4G、T4R均对该木聚糖酶的热稳定性无显著影响,其中T4G突变体的耐热性有变弱的趋势。
付正张华山曾小英熊海容
关键词:嗜热真菌重叠延伸PCR定点突变木聚糖酶
植酸酶发展现状和研究趋势被引量:17
2010年
植酸酶作为一种新型的饲料添加剂已经得到越来越多的重视和应用。其可以提高饲料中磷和其他成分的利用率,并减轻环境污染。综述了新型酶制剂的筛选、高效表达和应用等方面的进展,并对进一步的研究开发趋势进行了分析。
丁强杨培龙黄火清王亚茹姚斌
关键词:植酸酶饲料高通量筛选
饲料用酶制剂的研究进展与趋势被引量:19
2009年
饲料用酶目前已成为世界工业酶产业中增长速度最快、势头最强劲的一部分。畜牧业开发应用饲料用酶制剂有着重大意义:可缓解饲料资源短缺、人畜争粮的局面,有利于保障粮食安全;提供更为安全、优质的动物产品,有利于保障食品安全;减轻环境污染,保障养殖业的可持续发展。饲料用酶的应用效果已在世界范围内得到公认,但酶的使用量还较低,其主要原因在于饲料用酶的性质难以满足饲料工业的要求,以及饲料用酶表达量低,生产成本较高。因此,目前的研发趋势主要体现在:1)饲料用酶基因资源的高通量筛选技术,尤其是特殊环境微生物和未培养微生物中的基因资源;2)酶蛋白的分子改良技术,利用蛋白质工程技术定向改良,创造具有优良特性的酶蛋白质分子,进一步提高饲料用酶的应用性能;3)饲料用酶高效表达和生产技术;4)饲料用酶的应用效果快速评估技术和配套应用技术体系。
杨培龙姚斌
关键词:饲料酶制剂基因克隆高通量筛选蛋白质工程
棉酚降解菌株的分离、筛选及鉴定被引量:12
2010年
以醋酸棉酚为唯一碳源,从土壤中筛选到2株棉酚降解菌,命名为MM-2及RP-3。经形态学及分子生物学鉴定:MM-2与基因登录号为AF219122.1(Fusarium oxysporum)的同源性达93%,推测MM-2属于镰刀菌属;RP-3与EU294522.1(Rhodotorula mucilaginosa)的同源性达92%,故此推测RP-3属于红酵母属。棉酚降解菌在不同碳源及温度条件下生长试验表明:MM-2在葡萄糖中生长好于在棉酚中,葡萄糖中最适取种时间为48~72 h,棉酚中最适取种时间为60~84 h,最适生长温度均为30℃;RP-3在葡萄糖中的最适取种时间为24~48h,最适生长温度在25~30℃之间。RP-3在棉酚中生长时,由于醋酸棉酚本身为黄色晶体,影响了OD值的结果,但仍能显示出对棉酚具有降解作用。
杨霞翁晓燕郭建林孙建义
关键词:棉酚生物降解菌种鉴定
双功能木聚糖酶研究进展被引量:4
2010年
植物细胞壁的降解需要多种酶的参与协作,能够同时具有木聚糖酶、纤维素酶或其他辅酶活性的双功能酶在降低生产成本、提高催化效率等方面都具有一定的优势。随着分子生物学技术的完善,很多新的双功能酶得到分离和鉴定。以双功能木聚糖酶为主,综述了近年来在双功能木聚糖酶结构、功能及作用机理等方面的研究进展,并对其在工业生产中的应用潜力进行了探讨。
刘欣石鹏君杨培龙姚斌
关键词:木聚糖酶双功能纤维素酶半纤维素酶
In vitro Evaluation of Feed Enzyme Compound Produced by Aspergillus sulphureus in Solid-state Fermentation
2010年
Three trials were conducted to analyze a multi-enzyme compound produced by Aspergillus sulphureus in solid-state fermentation (SSF) as a potential feed additive.The results of the first trial showed that there were at least 5 non-starch polysaccharide enzymes:xylanase,β-glucanase,pectinase,mannase and carboxy methyl cellulase (CMCase) contained in the compound.Xylanase and β-glucanase showed good activities at pH 2.5-7.0,which were in the range of 649-1046 U/g and 444-648 U/g,respectively.Pectinase showed good activity in acidic solution (pH 2.5-3.0),which ranged from 195 to 917 U/g.Mannase showed high activity of 235-298 U/g at pH 3.5-4.5 and the activity of CMCase was relatively constant at pH 2.5-7.0,which was in the range of 38.2-78.6 U/g.The second trial was aimed to test the stability of the enzymes in gastric liquor (pH 2.6) of finishing pigs and Na2HPO4-gastric liquor (pH 5.5).After 6 h incubation at 40℃ in gastric liquor,the retained activity of xylanase,β-glucanase,pectinase,mannase and CMCase was 26.3%,65.0%,71.0%,74.8% and 85.6%,respectively.While after 6 h incubation at 40℃ in Na2HPO4-gastric liquor,the retained activity of xylanase,β-glucanase,pectinase,mannase and CMCase was 87.9%,91.1%,92.3%,95.0%,and 97.5%,respectively.The third trial was carried out in a jejunum liquor (pH 5.8,200 mL),which contained 0.2 g of the multi-enzyme compound and 10 g of soybean hull or wheat bran,respectively.After 8 h incubation at 40℃,18.7% of soybean hull and 20.1% of wheat bran could be degraded to soluble saccharide,respectively.Compared with the traditional methods for feed enzyme testing which involve feeding animals for 1-3 months,enzyme assay in this way was relatively convenient.
W.Q.LuC.L.WangR.G.LiY.H.Cao
关键词:曲霉3-葡聚糖酶甘露聚糖酶
一株产新型淀粉酶嗜温菌ZW2531-1的分离与鉴定被引量:6
2008年
根据淀粉筛选平板上透明圈的大小,从土壤中筛选、分离出12株产淀粉酶嗜温菌株,由各菌株分泌淀粉酶催化淀粉降解的产物组分特征判定,菌株ZW2531-1为初筛12个菌株中较优良的产酶菌株.由ZW2531-1产生的新型淀粉酶可催化淀粉降解产生麦芽糖、麦芽三糖和异麦芽三糖及异麦芽四糖,但不产生葡萄糖.通过电镜观察,可见ZW2531-1菌株的杆菌形态及芽孢.提取ZW2531-1的全基因组,根据已知16S rDNA上的保守序列设计引物,扩增出ZW2531-1菌株的16S rRNA基因,并与其他标准菌16S rDNA序列进行对比分析,建立进化树,最终确定了ZW2531-1的系统发育地位,推断ZW2531-1应属于Bacillus属的一个种,为Bacillus sp.ZW2531-1.
王阳李樊高朝辉郑晓一张应玖
关键词:淀粉酶进化树异麦芽低聚糖
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