国家高技术研究发展计划(2007AA100602)
- 作品数：5 被引量：31H指数：3
- 相关作者：李荣荣和祯泉鲍恩东陈溥言吕英军更多>>
- 相关机构：南京农业大学中国农业大学华东理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划天津市科技支撑计划重点项目高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪乳铁蛋白肽的分子改良及改良肽的生物学活性研究被引量：1
- 2011年
- 本研究采用化学合成的方法获得了猪源乳铁蛋白肽LFP-20及其改良肽，旨在通过研究该抗菌肽一级结构与抗菌活性的关系，获得抗菌活性更高的改良肽。微量肉汤稀释法测定的最小抑菌浓度（MIC）及溶血性分析结果表明，猪乳铁蛋白肽LFP-20及其改良肽LF2A、LF-1和LF-3对大肠杆菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌均具有抗菌活性；LFP-20对5种试验菌株的MIC为64~128 μg/mL，改良肽LF-1和LF-3的MIC降低了2~4倍；改良肽LF2A对5种试验菌株的抗菌活性没有提高，但溶血性降低；改良肽LF-1的抗菌活性有所提高，但在4、32、64、128和256 μg/mL时的溶血性也显著提高（P〈0.05）。WST-1和LDH法检测4种抗菌肽对人外周血单核细胞（PBMC）增殖的影响及细胞毒性结果表明，LF2A、LF-1和LF-3对PBMC增殖的影响具有剂量依赖性；与LFP-20相比，25~200 μg/mL的LF-1显著提高了PBMC的增殖（P〈0.05），但在400 μg/mL浓度下却抑制了PBMC的增殖（P〈0.05）；200和400 μg/mL LF-1使得PBMC的乳酸脱氢酶（LDH）释放百分率显著提高（P〈0.05），在25~50 μg/mL浓度下却对LDH释放具有降低作用（P〈0.05）。对细胞膜去极化作用研究结果表明，4 μg/mL的改良肽LF-3对大肠杆菌细胞膜的去极化作用明显增强，而抗菌活性较低的LFP-20和LF2A对细菌细胞膜的去极化作用低于LF-3。由此可知，改良肽LF-3的抗菌活性比猪乳铁蛋白肽LFP-20提高了2~4倍，且溶血作用和细胞毒性均没有显著增强；LF-3可通过对细胞膜的去极化作用破坏大肠杆菌细胞膜电势梯度平衡，推测对细胞膜的破坏作用是其发挥抗菌作用的途径之一。
- 韩菲菲安沙谢永刚刘倚帆汪以真
- 关键词：乳铁蛋白肽抗菌活性溶血性细胞毒性
- 人乳铁蛋白肽的分子改良及在大肠杆菌中的表达研究被引量：2
- 2011年
- 采用SOE-PCR技术,设计合成hLF18-40的编码基因;以融合表达策略构建了pET-43.1a-hLF18-40表达质粒,并获得较高的可溶融合蛋白表达;将融合蛋白Nus-hLF18-40进行Ni2+柱亲和层析、除盐、浓缩后,用肠激酶切割释放抗菌肽hLF18-40,为今后基因工程法表达人乳铁蛋白肽提供了依据。同时,将hLF18-40的C末端氨基酸逐一缩短直至hLF18-32,用化学法合成hLF18-40、hLF18-39、hLF18-38、hLF18-37、hLF18-36、hLF18-35、hLF18-34、hLF18-33和hLF18-32等9条肽,采用肉汤微量稀释法分别测定其最小抑菌浓度(MIC),结果发现:hLF18-40的MIC为40μmol.L-1,hLF18-39的MIC略微下降(20～40μmol.L-1),hLF18-35的MIC与hLF18-40的相同。
- 蔡屾叶江张惠展
- 关键词：纯化抗菌活性
- 鸡源抗菌肽Fowlicidin-3表达条件的优化及生物学特性和体内疗效研究被引量：12
- 2011年
- 对重组X-33毕赤酵母菌株表达的鸡源Fowlicidin-3抗菌肽的条件进行优化,并研究了表达产物的生物学活性。结果表明:当含有重组酵母菌的BMGY培养基A600值达到5～6时,转接pH 6.0的BMMY培养基,每24 h补加2%甲醇,29℃条件下培养72 h,重组鸡源Fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达,含量达到170 mg.L-1。采用琼脂孔扩散法对该抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性等特性进行分析,结果表明:鸡源Fowlicidin-3抗菌肽具有较强的热、酸稳定性;对致病性大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌CowanⅠ的最小抑菌浓度分别为3.12、1.56和1.56μg.mL-1。在对大肠杆菌O1感染雏鸡的体内疗效试验中,鸡源Fowlicidin-3显示出了较好的预防和治疗效果。
- 李荣荣和祯泉吕英军鲍恩东陈溥言
- 关键词：生物学特性X-33
- 蛙抗菌肽Palustrin-OG1的分子改良及改良肽OG2在巴斯德毕赤酵母中的表达
- Palustrin-OG1(OG1)是从无指盘臭蛙(Odorrana grahami)中分离得到的一种新型抗菌肽,对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌具有较强的抑制和杀灭作用,但同时具有较高的细胞毒性。本研究旨在通过分子改良提高O...
- 谢永刚栾超刘倚帆汪以真
- 关键词：分子改良巴斯德毕赤酵母抗菌活性
- 文献传递
- 一种高效表达抗菌肽Cecropin AD的枯草芽孢杆菌基因工程菌株的构建及表达产物抗菌活力的研究
- 抗菌肽Cecropin AD是一种嵌合体抗菌肽,天蚕素（cecropins）家族的一员,它的基因序列是由惜古比天蚕（Hyalophora cecropia）成熟肽Cecropin A的前11个氨基酸残基和惜古比天蚕（Hy...
- 陈香谯仕彦祝发明曹云鹤
- 文献传递
- 抗菌肽研究进展被引量：10
- 2009年
- 抗菌肽是指存在于生物体内能抵抗外界微生物侵害,消除体内突变细胞的一类小分子多肽。自从Boman从天蚕蛹中分离出抗菌肽cecropin后,已在多种生物体内发现并分离出多种不同类型的抗菌肽,按其结构可分为4类。抗菌肽对微生物具有广谱抗菌作用,但其分离和合成的成本昂贵。用基因工程方法生产抗菌肽是将其大规模应用的有效手段,其中巴斯德毕赤酵母是最有效的表达体系之一。
- 陈轶群曹云鹤
- 关键词：抗菌肽生物活性基因工程
- 抗菌肽Fowlicidin-3在毕赤酵母中的表达及产物活性
- 目的:本研究的目的是在毕赤酵母中表达一种新型抗菌肽Fowlicidin-3。方法:选择酵母偏好密码子合成Fowlicidin-3基因,将其连接到pPIC9K载体上。重组质粒经过SacⅠ线性化后电转化毕赤酵母GS115,在...
- 陈轶群李志民曹云鹤
- 关键词：抗菌肽毕赤酵母抑菌活性
- 文献传递
- 不同动物源抗菌肽体外抗菌活性、细胞毒性及抗菌机理的比较研究
- 本研究对不同动物来源的抗菌肽包括人源LL-37、猪源protegrin-1(PG-1)、PMAP-23、Porcine Lactoferricin-20(LFP-20)、牛源indolicidin、Bovine Lact...
- 刘倚帆韩菲菲栾超汪以真
- 文献传递
- 鸡源抗菌肽Folicidin-3在毕赤酵母中的分泌表达及其生物学活性鉴定被引量：7
- 2010年
- 【目的】研究鸡源重组抗菌肽Fowlicidin-3的生物学特性,并为重组抗菌肽在临床上的应用奠定基础。【方法】根据抗菌肽数据库中Fowlicidin-3的氨基酸序列,选用毕赤酵母的偏嗜密码子,设计抗菌肽的基因,通过SOE法合成得到全长为114bp的Fowlicidin-3基因。将Fowlicidin-3基因克隆入pPICZα-A质粒,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-F。将线性化重组表达载体pPICZα-A-F通过电击法转入毕赤酵母宿主菌X-33中,构建分泌型重组酵母表达菌株。【结果】获得分泌型重组酵母表达菌株,Fowlicidin-3多肽表达量达到170mg·L-1,对致病性大肠杆菌K99和鸡白痢沙门氏菌显示出较好的抑制活性,抑菌圈直径分别为1.9cm和2.2cm。优化表达条件结果显示,转接到BMMY培养基中(pH6.0),每24h补加2%甲醇,29℃培养72h后,Fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达。【结论】成功构建分泌型重组酵母表达菌株,并获得了具备高效表达能力和较好生物学活性的抗菌肽。
- 李荣荣和祯泉鲍恩东陈溥言
- 关键词：抗菌肽毕赤酵母抑菌试验
