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重庆市自然科学基金(CQCSTC2010BB5199)
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李磊
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转化生长因子-β2诱导人Tenon囊成纤维细胞转化及其在瘢痕形成中的作用
被引量:7
2013年
背景研究表明转化生长因子-β2(TGF-β2)能够促进瘢痕形成,但其在青光眼滤过术后局部瘢痕形成中的作用机制值得研究。目的探讨TGF-β2对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)转化以及在滤过术后瘢痕形成中的作用。方法在斜视手术中获取3例患者的Tenon囊组织,并用组织块培养法在含质量分数10%胎牛血清的DMEM中培养,培养的细胞贴壁后达到70%~80%亚融合状态时更换为无血清培养基饥饿培养24h,然后分别加入质量浓度1、2、5、10、20Ixg/LTGF-β2诱导HTFs24h,另用2tzg/L或5μg/LTGF-β2 诱导HTFs6、24、48、72h,阴性对照组培养基中不加TGF-β2 用Westernblot法检测HTFs中α-平滑肌肌动蛋白(n—SMA)和pSmad2蛋白的表达,采用细胞免疫荧光技术检测“-SMA及纤维状肌动蛋白(F—actin)表达的定位,采用凝胶收缩实验检测培养细胞收缩力的变化。结果不同质量浓度TGF—B,组HTFs中0I—SMA表达的强度均明显强于阴性对照组,2tzg/L、5μg/LTGF—B,作用24~48h后HTFs中d—SMA表达强度达峰值,10μg/L、20μg/LTGF-β2组较2μg/L、5μg/LTGF-β2组α—SMA蛋白表达强度减弱。对照组HTFs中有少量α—SMA及F—actin表达,1、2、5μg/LTGF-β2组d—SMA及F—actin荧光表达明显增强,阳性细胞数明显增加,10μg/LTGF-β2组α—SMA及F-actin荧光表达较低质量浓度组减弱。2μg/LTGF-β2作用后pSmad2表达强度明显强于PBS组和FBS组,在作用后30rain~2h表达较强,2h后开始出现下降。对照组HTFs收缩凝胶面积所占原面积的百分数为(78.00-3.13)%,1、2、5、10tzg/LTGF-β2组分别为(63.88±1.78)%、(20.69±O.65)%、(19.49±O.54)%、(16.24~0.84)%,HTFs收缩凝胶面积占原面积的百分数随着TGF-β2质量浓度的增加而明显增加(F组别=859.400,P=0.000)。结论TGF-β2可诱导成纤维细胞转分化,一定程度上其作�
朱晓燕
李磊
鲜光军
李海军
谭燕
谢琳
关键词:
转化生长因子-Β2
青光眼
滤过手术
瘢痕形成
TENON囊成纤维细胞
Α-平滑肌肌动蛋白
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