国家教育部博士点基金(20113250120006)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 22种中药单体的Ⅱ相代谢酶诱导活性筛选
- 2018年
- 目的研究22种常见中药单体对Ⅱ相代谢酶的诱导活性。方法以Hep G2-4ARE-TK-EGFP细胞系为筛选模型,采用绿色荧光蛋白报告基因检测系统进行检测。结果 22种中药单体中有8种中药单体(穿心莲内酯、黄芩苷、大黄酸、大黄素、槲皮素、大豆苷元、熊果酸、白藜芦醇)对Ⅱ相代谢酶具有较好的诱导作用,且具有明显的剂量效应关系。结论 8种中药单体(穿心莲内酯、黄芩苷、大黄酸、大黄素、槲皮素、大豆苷元、熊果酸、白藜芦醇)的抗肿瘤作用可能是通过诱导Ⅱ相代谢酶表达实现的。
- 徐海荣马瑶李晶张勇王劲松
- 关键词：中药单体诱导活性
- 抗氧化反应元件调控的EGFP在HepG2细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的:采用增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,用HepG2细胞构建可敏感、快速、方便地筛选出Ⅱ相酶诱导剂的评价体系。方法:通过分子生物学技术,将TK启动子克隆到pEGFP-N1上,再将人工合成的抗氧化反应元件(ARE)序列插入TK启动子上游,并转染入HepG2细胞株,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养。结果:重组载体经酶切和PCR鉴定,发现有TK和ARE-TK基因特异条带。DNA测序发现ARE-TK-EGFP框架正确。转染细胞在荧光显微镜下可见大量的绿色荧光颗粒,该细胞经不同浓度已知Ⅱ相酶诱导剂tBHQ作用后,与EGFP表达量有剂量效应关系。结论:ARE调控的EGFP在HepG2细胞中成功表达。为进一步高通量筛选Ⅱ相酶诱导剂奠定了基础。
- 徐海荣汪步海武文娟戴尔峋刘丽琴焦寒凝张西志
- 关键词：基因重组
- 4ARE强化的双荧光蛋白报告基因载体的构建及鉴定
- 2018年
- 目的:构建4ARE强化的红、绿双荧光蛋白报告基因载体。方法:人工合成3对ARE序列,经退火和磷酸化后插入pARE-TK-GFP载体,构建成p4ARE-TK-GFP载体。以质粒pDsRed2-N1为模板,PCR扩增红色荧光蛋白及其启动子序列与pMD18-T载体连接,构建成pMD-DsRed载体。用Ade Ⅰ酶和BspT Ⅰ酶对载体pMD-DsRed和p4ARE-TK-GFP进行双酶切,连接产物转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提酶切及测序鉴定。结果:经酶切及DNA测序证实,目的片段ARE及DsRed的序列完全正确,重组双荧光蛋白报告基因载体成功转入DH5α。结论:成功构建4ARE强化的双荧光蛋白报告基因载体并在DH5α内表达,为进一步研究ARE的调控作用奠定了基础。
- 徐海荣任雪迪翟达马瑶李晶戴尔珣
- 关键词：报告基因
