国家自然科学基金(30873033)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- c-Src结构域真核表达载体的构建及鉴定
- 2011年
- 通过聚合酶链式反应(PCR),将c-Src的三个结构域SH3、SH2和KD分别定向克隆至C端带有HA蛋白标签序列的真核表达载体pcDNA3中.经HindIII和XbaI双酶切分析和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞48 h,蛋白免疫印迹法可以检测到细胞内SH3、SH2和KD的表达,证明重组表达质粒pcDNA3-SH2、pcDNA3-SH3和pcDNA3-KD构建成功,为进一步研究Src激酶在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础.
- 张瑶楠石冲马永超王泽生张玉祥
- 关键词：SRCSH2KD真核表达载体
- 利用RNA捕获法在全基因组进行egfr启动子片段的富集被引量：1
- 2011年
- 目的以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,egfr)启动子片段为目标靶序列,用RNA捕获法在全基因组进行靶序列的富集,结合第二代测序技术,实现候选基因区段的深度测序。方法本研究以宫颈癌细胞系HeLa S3 egfr启动子为模型,提取基因组后用MboⅠ酶切,补平加PE接头,回收400 bp～1000 bp的DNA片段作为模板,并用egfr启动子RNA与制备的基因组模板杂交将egfr启动子片段富集,富集的DNA片段PCR扩增15轮后用Solexa高通量测序。结果通过生物信息学技术分析,从实验组中随机取总条数为106 reads,比对到egfr启动子片段reads条数为1 889条,而比对到随机挑选的notch 1、pdgf-B、src基因reads条数分别为2、3、3条。从人类全基因组随机取总条数为106的等长reads作为对照组,比对到notch 1、pdgf-B、src、egfr基因reads条数分别为3,2,3,2条。在本实验中egfr启动子片段通过RNA捕获法被富集了630倍。结论用本研究建立的RNA捕获法进行基因组靶序列捕获、富集、测序文库建立的技术路线可行,所建DNA文库可直接用于Solexa测序仪的测序。RNA捕获技术与第二代高通量测序技术结合能应用于靶区域的重测序,研究可变剪切、核小体分布,发现和分析新的单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphisms,SNPs)位点,寻找许多复杂疾病相关基因及位点,针对性强,简便易行,节约成本。
- 杨锦邹斌斌张玉祥王泽生
- 关键词：高通量测序
