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国家自然科学基金(30860272)
国家自然科学基金(30860272)
- 作品数:6 被引量:17H指数:2
- 相关作者:邵江华刘天德袁荣发余新蒋成行更多>>
- 相关机构:南昌大学第二附属医院江西省分子医学重点实验室金华市中心医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金江西省研究生创新基金江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶与细胞凋亡被引量:1
- 2013年
- 细胞凋亡是生命的基本现象之一,可以发生在生理或病理条件下。形态学表现为胞膜对称性丧失、染色质凝集、细胞皱缩、DNA破碎、线粒体肿胀和凋亡小体形成。它与一系列复杂的生化反应及不同基因的表达及调控、信号转导系统的正负调节密切相关。最近的研究表明,Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(Rho—associatedcoiled—coilcontainingproteinki-nase,ROCK)在调节多种细胞表型和动物疾病模型的凋亡方面起重要作用。本文就ROCK在细胞凋亡中所起的功能及作用作一综述。
- 刘天德袁荣发邵江华
- 关键词:细胞凋亡蛋白激酶RHO形态学表现线粒体肿胀病理条件
- 原发性肝癌细胞中Rock2调控MMP2对其侵袭迁移的作用被引量:10
- 2014年
- 目的探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rho associated coiled coil containing protein kinase 2,Rock2)调控基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法用Western blot法检测30例肝癌组织及对应癌旁组织中Rock2和MMP2的蛋白表达,同时分析它们之间的关联;用荧光定量PCR和Western blot法观察稳定降低Rock2细胞中MMP2 mRNA及蛋白表达变化;利用PCR定点突变技术构建Rock2同义突变质粒"恢复"稳定干扰Rock2的肝癌细胞中Rock2表达后检测MMP2蛋白表达变化;采用Transwell侵袭实验和划痕实验观察空白对照组、稳定低表达Rock2组、"恢复"Rock2组HepG2细胞侵袭和迁移能力变化。结果Rock2和MMP2蛋白在肝癌组织中均比对应癌旁组织明显增高,且两者的表达呈正相关性。稳定降低肝癌细胞中Rock2的表达后发现MMP2的mRNA和蛋白表达也随之降低;另外,"恢复"稳定干扰Rock2的肝癌细胞中Rock2的表达,MMP2表达也"恢复";同时证实Rock2通过调节MMP2表达从而影响肝癌细胞的侵袭和迁移。结论在原发性肝癌细胞中降低Rock2可引起MMP2表达下降,进而抑制肝癌细胞的侵袭和迁移。
- 陈磊峰刘天德杜晓红胡俊文黄子曦邵江华
- 关键词:基质金属蛋白酶2肝细胞性肝癌
- Rock2对紫外线诱导肝癌细胞DNA损伤的保护作用及调节机制被引量:1
- 2012年
- 背景与目的:Rock2基因在肝癌等多种恶性肿瘤中呈现高表达,本研究利用紫外线(ultraviolet,UV)诱导DNA损伤,观察Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rho associated coiled coilforming protein kinase 2,Rock2)基因对肝癌细胞生存的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将特异性抑制Rock2表达的干扰质粒shRock2转染到人肝癌细胞Huh-7和HepG2中,用荧光定量PCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测Rock2 mRNA及蛋白的表达。通过UV照射造成肝癌细胞DNA损伤模型,用MTT比色法检测肝癌细胞增殖的变化,Western blot检测细胞分裂周期素25A(cell division cycle 25A,Cdc25A)蛋白表达的变化,并用能量共振转移法检测Cdk2/Cyclin E活性的改变。结果:shRock2转染到肝癌细胞后,其mRNA及蛋白的表达均明显降低;经过UV诱导肝癌细胞DNA损伤时,Rock2低表达组肝癌细胞较Rock2正常组肝癌细胞增殖受到抑制。Western blot检测发现,UV诱导DNA损伤时抑制Rock2表达可导致肝癌细胞中Cdc25A表达进一步下降,并且Cdk2/CyclinE活性也随Cdc25A的降低而降低。结论:UV诱导肝癌细胞DNA损伤时,Rock2通过调节Cdc25A对肝癌细胞的生存起保护作用,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。
- 李国惠刘天德余新刘秀霞袁荣发蒋成行邵江华
- 关键词:ROCK2肝细胞癌紫外线
- Rock2对肝癌细胞放疗敏感度的影响
- 2012年
- 目的探讨Rock2对肝癌细胞放疗敏感度的影响。方法降低人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中Rock2的表达,利用IR照射造成DNA损伤模型,MTT法检测细胞增殖情况,Western blot检测Cdc25A的变化,并用能量共振转移法检测Cdk2/CyclinE活性的改变。结果 IR诱导DNA损伤时,干扰Rock2组细胞较Rock2正常组细胞增殖受到抑制。Western blot检测发现,降低Rock2表达可导致肝癌细胞中DNA损伤时Cdc25A表达的进一步下降,而且Cdk2/CyclinE活性也随Cdc25A的降低而降低。结论降低Rock2表达可能通过抑制Cdc25A而增强肝癌细胞的放疗敏感度,为肝癌的治疗及基因表达调控研究提供新的靶基因。
- 刘天德余新刘秀霞袁荣发蒋成行邵江华
- 关键词:ROCK2肝细胞癌CDC25A放疗
- Rock2对细胞周期检查点Cdc25A的调节作用被引量:5
- 2012年
- 目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中,Western blotting检测Cdc25A蛋白表达变化;针对Rock2干扰序列,利用PCR定点突变技术进行碱基突变,构建Rock2突变质粒从而"恢复"Rock2表达,分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变。Western blotting检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中检查点激酶1(Chk1)和检查点激酶2(Chk2)蛋白的变化,免疫共沉淀及免疫荧光分析Rock2与Cdc25A的相互作用。结果:Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达,而且两者呈正相关。肝癌细胞中稳定低表达Rock2后,Cdc25A蛋白表达明显下降;"恢复"Rock2表达后,Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象。Rock2低表达对Chk1和Chk2蛋白变化无明显影响。免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用,免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位。结论:Rock2对细胞周期检查点Cdc25A起直接的正向调控作用,而且不依赖于Chk1/Chk2,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。
- 刘天德余新袁荣发王庆诺杨志强邵江华
- 关键词:细胞周期肝肿瘤
- 沉默Rock2对肝癌细胞增殖及凋亡作用的研究被引量:1
- 2012年
- 目的:探讨沉默Rock2基因对人肝癌细胞Huh-7和HepG2增殖和凋亡作用的影响。方法:实验分为空白对照组、干扰无意义组、转染PBS组及干扰Rock2组。将Rock2干扰质粒shRock2转染到人肝癌细胞Huh-7和HepG2中,通过实时荧光定量PCR检测Rock2mRNA的表达水平;Westernblot检测Rock2蛋白的表达水平;MTT比色法检测沉默Rock2后对Huh-7和HepG2细胞增殖抑制的影响;流式细胞术检测沉默Rock2对Huh-7和HepG2细胞周期及早期凋亡的变化。结果:将shRock2转染肝癌细胞系Huh-7和HepG2后,Rock2mRNA以及Rock2蛋白的表达水平均明显下降。沉默Rock2表达后,MTT结果显示Huh-7和HepG2细胞较对照组细胞增殖能力明显减弱(P<0.01);Huh-7和HepG2细胞G0/G1期细胞比例明显升高,而S期和G2/M期细胞比例明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);肝癌细胞的早期凋亡较对照组明显增加(P<0.01)。结论:沉默Rock2能明显抑制肝癌细胞系Huh-7和HepG2的增殖,并诱导其早期凋亡,提示Rock2可作为肝癌基因治疗的一个新的分子靶点。
- 刘天德袁荣发王庆诺蒋成行杨志强邵江华
- 关键词:蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶转染基因沉默