国家自然科学基金(30470784)
- 作品数：11 被引量：30H指数：3
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- PGE2通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号通路上调SnoN的表达而促进CCLP1细胞的增殖被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对人胆管上皮癌细胞CCLP1增殖能力影响的作用机制。方法:用PGE2、EP1～4 4种受体激动剂、AC激动剂Forskolin、PKA抑制剂H89、cAMP拟似物db-cAMP处理CCLP1细胞,通过RT-PCR、Western blot、WST等实验检测SnoN mRNA、SnoN蛋白等表达水平、CREB蛋白磷酸化水平以及CCLP1细胞增殖能力的变化。结果:10μmol/L PGE2处理CCLP1细胞24 h后,SnoN mRNA的表达水平与对照组相比上升了22.5%(P<0.01),SnoN蛋白的表达水平上升了35.6%(P<0.05);10μmol/L EP受体激动剂处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中以EP2受体激动剂的作用最明显,上升了64.9%(P<0.05),细胞增殖能力上升了26.5%;10μmol/L AC激动剂Forskolin处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平及CREB蛋白的磷酸化水平较对照组分别上升了25.1%、71.3%(P<0.05),细胞增殖能力也上升了4.4%(P<0.05);用500μmol/L cAMP拟似物dbcAMP处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平较对照组上升了90.1%(P<0.05);而PKA抑制剂H89阻断Forskolin的作用后,SnoN蛋白的表达水平和CREB蛋白的磷酸化水平较Forskolin处理组分别下降了9.1%、14.1%,20μmol/L H89处理CCLP1细胞后,细胞增殖能力较对照组下降了45.7%(P<0.05)。结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号转导通路上调CCLP1细胞SnoN的表达,从而促进CCLP1细胞的增殖。
- 黄文勇张丽束为彭韬张海马娟白小明冷静
- 关键词：胆管上皮癌PGE2SNON
- 肝细胞癌组织中环氧合酶-2与p16的表达及相关性
- 2010年
- 沈波刘宁波彭韬冷静
- 关键词：肝细胞癌环氧合酶-2P16蛋白
- 肝细胞癌组织中环氧化酶2与增殖性细胞核抗原的表达及相关性
- 2010年
- 目的观察环氧化酶2(COX-2)和增殖性细胞核抗原(PCNA)在肝细胞癌组织中的表达及相关性。方法应用免疫组化法检测肝细胞癌组织COX-2与PCNA蛋白的表达,并对阳性结果进行图像分析。结果肝癌组织和癌旁组织中COX-2、PCNA阳性表达率及其阳性面积百分比差异均有统计学意义(P<0.05)。COX-2阳性组和COX-2阴性组中PCNA阳性表达率之间差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织和癌旁组织中COX-2阳性表达面积百分比与PCNA阳性表达面积百分比之间有相关性。结论肝细胞癌组织存在COX-2过度表达,且与PCNA表达水平有相关性。
- 沈波刘宁波彭韬冷静
- 关键词：肝细胞癌环氧化酶2增殖性细胞核抗原
- 肝癌细胞前列腺素E_2受体表达和分布的研究被引量：14
- 2006年
- 目的:基于肝癌细胞(肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞)对PGE2的不同反应性,研究Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1肝癌细胞株前列腺素E2受体的表达类型和分布定位。方法:体外培养肝细胞癌细胞株(Hep3B,HuH7)和胆管上皮癌细胞株(SG231,HuCCT1),分别给予不同浓度的外源性PGE2处理,以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率;以RT-PCR实验检测上述细胞4种PGE2受体(EP1、EP2、EP3和EP4)的mRNA表达情况;采用上述肝癌细胞的细胞涂片或细胞爬片进行荧光免疫细胞化学实验,于荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察上述4种EP受体蛋白的表达和定位分布。结果:WST-1细胞增殖实验结果显示PGE2可以促进Hep3B和HuH7细胞的生长,但对胆管上皮癌细胞(SG231、HuCCT1细胞)则表现为生长抑制作用;RT-PCR和荧光免疫细胞化学实验结果表明Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1细胞株均有4种EP受体的表达;激光共聚焦结果显示4种EP受体不仅有胞浆、胞膜定位,而且部分在胞核也有表达,其中EP4受体的表达主要定位于细胞核。结论:Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1,4种肝癌细胞株均可以表达EP1、EP2、EP3和EP4受体,且受体的细胞内定位不同。肝癌细胞对前列腺素E2的反应性可能与EP受体的定位以及不同的细胞内信号转导通路激活有关。
- 张静敏HAN ChangWU Tong刘宁波彭韬冷静
- 关键词：肝癌细胞前列腺素E2信号转导
- 表皮生长因子受体信号通路调控人肝细胞癌细胞增殖分子机制的研究被引量：10
- 2007年
- 目的:研究人肝细胞癌中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达及其细胞内信号转导通路,探讨EGFR在促进肿瘤细胞增殖中的作用。方法:用免疫组化实验检测癌组织中EGFR的表达;用EGF和AG1478处理人肝癌细胞HuH7;用Western blot法检测EGFR、p-EGFR、p-ERK蛋白表达;用WST法检测细胞增长率。结果:17例HCC患者癌组织中,EGFR的阳性表达率为100%;HuH7中EGFR的表达明显高于正常肝细胞HL-7702。外源性EGF(10μg/L)处理后,ERK和EGFR的磷酸化水平提高,同时细胞生长率提高9.2%,而此作用能被AG1478(20μmol/L)阻断。结论:人肝细胞癌中,EGFR高表达,EGFR的激活主要通过受体磷酸化完成,活化的p-EGFR可能通过ERK/MAPK下游信号通路传递信息,调控人肝细胞癌的发生发展。
- 蒋丽张丽彭韬孙秋艳冷静
- 关键词：肝细胞癌表皮生长因子受体细胞外信号调节激酶细胞增殖
- PGE2对HuH7细胞Survivin表达影响的研究
- 2009年
- 目的:研究前列腺素E2(PGE2)对人肝癌细胞HuH7Survivin表达的影响及其与PI3K/AKT信号转导通路的相关性。方法:用PGE2、EP受体激动剂、EP受体抑制剂、PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞,用Westernblot检测Survivin蛋白表达。结果:5μmol/LPGE2处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与对照组相比上升了63.59%(P<0.01);5μmol/LEP1、5μmol/LEP3、5μmol/LEP4受体激动剂分别处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与对照组相比分别上升了114.76%(P<0.01),76.68%(P<0.01),70.01%(P<0.01),而5μmol/LEP2受体激动剂处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与对照组相比无明显改变(P>0.05);10μmol/LEP1,10μmol/LEP4受体抑制剂分别处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比分别下降了32.95%(P<0.01),28.36%(P<0.05),而10μmol/LEP2受体抑制剂处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比无明显改变(P>0.05);10μmol/LPI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比下降了28.05%(P<0.01)。结论:PGE2可能通过EP1、EP3、EP4这3种受体影响HuH7细胞中Survivin的表达,且这种调节作用可能与PI3K/Akt信号转导通路有关。
- 蒋慧白小明冷静
- 关键词：肝细胞癌PGE2SURVIVINPI3K/AKT
- 人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体不同亚型的鉴定及相关胞内信号转导通路的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:鉴定人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体不同亚型的类型及其介导的细胞内信号转导途径,探讨EP3对人肝细胞癌发生发展的影响及相关分子机制。方法:用RT-PCR实验检测Huh7细胞中EP3亚型的类型,给予EP3受体激动剂sul-prostone处理后,用WST-8法检测细胞的增殖活性,用酶联免疫法测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)浓度的变化,用Western blot-ting法检测Akt、Erk等蛋白磷酸化水平的变化。结果:RT-PCR结果显示人肝细胞癌Huh7细胞中表达的EP3剪接体类型是EP3(5);WST-8实验结果显示,经10.0μmol/LEP3受体激动剂sulprostone作用24h后,细胞增殖率增加46.2%;酶联免疫法显示sulprostone可促使细胞内cAMP浓度显著增高;Western blotting实验显示,sulprostone作用30min可使Huh7细胞中Akt蛋白磷酸化水平增加27%,而Erk蛋白磷酸化水平降低16.4%。结论:人肝细胞癌Huh7细胞中,表达的EP3亚型类型是EP3(5),EP3受体激动剂sulprostone可以促进Huh7细胞的增殖,通过EP3受体的介导促进胞内cAMP表达水平的增加,其机制可能部分涉及到Akt及Erk信号转导通路。
- 李海张海白小明冷静
- 关键词：人肝细胞癌环磷酸腺苷信号转导
- 前列腺素E_2受体EP3-Ⅲ对胆管上皮癌细胞生长的影响
- 2007年
- 目的:探讨前列腺素E_2受体EP3-Ⅲ对胆管上皮癌细胞生长的影响。方法:采用常规培养的人胆管上皮癌细胞株HuccT1,分别给予不同浓度的EP3受体激动剂sulprostone(0、1、5、10μmol/L)作用24 h,用WST-8法检测细胞的活性。用RT-PCR方法检测HuccT1细胞表面EP3-ⅢmRNA水平的表达。用细胞瞬时转染方法使HEK293细胞表达EP3-Ⅲ蛋白,并用WST-8法检测PGE_2对转染HEK293细胞生长的影响。结果:WST-8检测发现,随着sulprostone作用浓度的升高,HuccT1的细胞活性呈浓度梯度依赖性增加。RT-PCR检测发现,HuccT1细胞有EP3-ⅢmRNA表达。HEK293细胞瞬时转染EP3-Ⅲ后,WST-8检测发现转染细胞在PGE_2 10μmol/L作用下细胞活性明显增加。结论:人胆管上皮癌细胞株HuccT1表面有前列腺素E_2受体EP3-Ⅲ表达,EP3-Ⅲ对细胞生长有显著的促进作用。
- 白小明娄可心张玮冷静
- 关键词：前列腺素E2细胞生长胆管上皮癌
- 表皮生长因子受体抑制剂AG1478影响HuH7细胞黏附、迁移和侵袭的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂AG1478对人肝细胞癌细胞HuH7黏附、迁移及侵袭的影响及其相关细胞内信号转导通路,探讨EGFR在肿瘤转移中的作用。方法:用AG1478处理人肝细胞癌细胞HuH7;用MTT法检测细胞的黏附能力变化;用Transwell小室观察体外细胞迁移能力变化;Transwell小室结合Matrix胶检测肿瘤细胞侵袭能力的变化;用Western blot法检测Erk2及Paxillin蛋白表达。结果:AG1478(20μmol/L)处理后,细胞的黏附、迁移和侵袭能力分别下降了52%、49%和70%(P<0.01),Erk2及Paxillin的表达水平也明显降低(P<0.01)。结论:EGFR与人肝细胞癌细胞HuH7的黏附、迁移和侵袭性密切相关,并可能通过Erk2及Paxillin信号转导通路调控人肝细胞癌的发展。
- 张玮白小明冷静
- 关键词：AG1478ERK2PAXILLIN
- 肝细胞癌组织中环氧合酶-2表达与p27表达的关系
- 2005年
- 目的:观察环氧合酶2(COX2)和p27蛋白在肝细胞癌组织中的表达及相互关系。方法:应用免疫组化法检测肝细胞癌组织COX2与p27蛋白的表达状况,并对阳性结果进行图像分析。结果:肝癌组织和癌旁组织中COX2阳性表达率、p27表达阳性率、COX2阳性面积百分比、p27阳性面积百分比均有显著性差异性(P<0.05)。COX2阳性组和COX2阴性组中p27阳性表达率之间无显著性差异性(P>0.05)。肝癌组织和癌旁组织中COX2阳性表达面积百分比与p27阳性表达面积百分比之间无相关性(P>0.05)。结论:肝细胞癌组织存在COX2过度表达,且与p27表达水平无相关性。
- 沈波冷静刘宁波彭韬
- 关键词：肝细胞癌环氧合酶-2P27蛋白
