国际科技合作与交流专项项目(2011DFA31830)
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 相关作者：柳纪省李志勇高鹏杨彬兰喜更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学河北农业大学更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪嵴病毒CH441株VP1基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2015年
- 为了深入研究嵴病毒（swKoV）主要结构蛋白基因 VP1，根据 GenBank中已发表的猪嵴病基因序列设计特异性引物，采用 RT-PCR方法扩增猪嵴病毒 CH441株 VP1基因，并对其进行克隆与测序分析。结果表明，swKoV CH441株的 VP1基因为762 bp，与 GenBank已发表的嵴病毒属的15株嵴病毒序列的 VP1基因相比较，swKoV CH441株的VP1基因与其他各毒株 VP1基因的核苷酸同源性为81.5%~90.2%，氨基酸同源性为86.6%~96.9%，进化分析显示，swKoV CH441株与 GS-1株之间的亲缘关系较近。生物信息学分析显示，VP1蛋白理论等电点（ pI）为4.40，理论分子质量为26.9782 kDa；其序列上共发现18个磷酸化位点，分别为Ser（7）、Thr（6）和Tyr（5），而蛋白的磷酸化与信号转导有关，预测该蛋白为一重要的信号转导分子；无信号肽和跨膜区。为进一步开展 swKoV CH441株 VP1基因在遗传变异等方面的研究奠定了理论基础。
- 祝俊鹏杨彬兰喜柳纪省马小军
- 关键词：VP1克隆DNA测序
- 猪线粒体抗病毒信号蛋白MAVS对口蹄疫病毒感染宿主的影响
- 2017年
- 采用构建猪源MAVS重组质粒pEGFP-MAVS,将其转染PK-15细胞24h后,再感染口蹄疫病毒(MOI=0.1),通过Western blot和real-time PCR检测MAVS融合蛋白表达及对口蹄疫病毒感染宿主细胞的复制和病毒感染滴度。结果显示:重组质粒pEGFP-MAVS能在PK-15细胞中获得表达,并且上调MAVS基因对口蹄疫病毒在宿主细胞中的早期复制有显著抑制作用,病毒的感染滴度也有一定的降低。结果表明:MAVS具有一定的抗病毒作用,此为进一步研究口蹄疫病毒逃逸宿主天然免疫的机制奠定了基础。
- 崔晓蕊李守湖秦晓东常兴妮孙鹏孙继国李志勇
- 关键词：线粒体MAVS口蹄疫病毒实时荧光定量PCR
- FMDV全ORF编码基因的克隆及其腺病毒载体的构建被引量：2
- 2014年
- 为研制O型口蹄疫病毒(FMDV)复制缺陷型腺病毒活载体疫苗毒株,通过RT-PCR方法获得了O型FMDV的开放阅读框(ORF)基因,并定向克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建了重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMVORF,经PCR、酶切及测序鉴定,克隆得到的ORF编码基因序列与原始强毒株O型FMDV的ORF编码基因相似性达99.8%。将含有目的基因的穿梭质粒线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-2共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细胞中,得到重组腺病毒质粒pAd-ORF,经PCR和酶切鉴定正确。本研究成功获得了含有现代O型疫苗用FMDV毒株的全ORF编码基因的阳性克隆,并成功构建了含有完整编码基因表达盒的重组腺病毒穿梭质粒及其腺病毒骨架质粒。
- 高鹏李志勇柳纪省
- 关键词：口蹄疫病毒开放阅读框腺病毒载体
- 稳定表达T7 RNA聚合酶的BHK-21细胞系的建立被引量：1
- 2013年
- 为了建立能稳定表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞系,利用PCR方法从BL21(DE3)细菌中扩增T7RNA聚合酶基因,并克隆到慢病毒表达系统的pLVX-Puro转移载体上,然后与Lenti-X HTX包装载体共转染Lenti-X 293T细胞系,收获高效价的慢病毒。将慢病毒感染BHK-21细胞,用嘌呤霉素多次筛选后获得抗性细胞。用构建的pET-28a-IRES-EGFP检测质粒转染得到的抗性细胞,有荧光表达的细胞即可以稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系。结果表明:构建的BHK-T7株细胞能稳定表达T7RNA聚合酶。
- 关洪鑫李志勇高鹏许生智白银梅柳纪省
- 关键词：T7RNA聚合酶细胞系
- 猪札幌病毒VPg基因的原核表达及免疫原性研究被引量：1
- 2015年
- 为获得猪札幌病毒病毒基因组连接蛋白(viral protein genome-linked,VPg),本试验以中国西北地区猪札幌病毒CH430株RNA为模板,通过RT-PCR扩增VPg基因,将其克隆至pMD19-T Simple Vector,双酶切及基因测序鉴定后,再亚克隆至pET-30a中构建重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。将纯化的目的蛋白免疫家兔得到超免疫血清。结果显示,获得的VPg基因全长为339bp,编码113个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,重组菌在37℃、1.0mmol/L IPTG诱导表达6h时重组蛋白表达量最高,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在,大小为22ku,与预期结果相符。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性。超免疫血清ELISA效价可达1∶12 800,且具有良好的特异性。本试验获得的超免疫血清为研究猪札幌病毒非结构蛋白VPg的结构与功能奠定了基础。
- 单兴娜杨彬柳纪省张韵杨勃兰喜
- 关键词：原核表达纯化
- O型口蹄疫病毒衣壳酸敏感性位点的筛选
- 2015年
- 为筛选与O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳酸敏感性相关的位点,本研究以牛源O型FMDV ON株为研究对象开展耐酸性毒株筛选工作。通过给予pH 6.0酸性环境连续诱变,筛选获得6株耐酸性毒株。将诱变病毒与亲本病毒衣壳蛋白编码区P1区序列比对后发现7个核苷酸突变,即共同存在于6株耐酸毒株P1区的错义突变A1334G(Y445C)、A1643G(Q548R)、A1822G/A1823C(N608A)及同义突变G1371A,另有仅存在于耐酸毒株m2P1区的错义突变C1849T(P617S)和仅存在于耐酸毒株m1P1区的同义突变G468T。本研究为O型FMDV酸敏感性分子机制的揭示及病毒衣壳酸稳定性的提高奠定了基础。
- 解银丽马琪秦晓东殷相平柳纪省张志东李志勇
- 关键词：O型口蹄疫病毒衣壳
