国家自然科学基金(81201756)
- 作品数:3 被引量:3H指数:1
- 相关作者:陈宏李懿刘均林旭黄丽春更多>>
- 相关机构:成都军区昆明总医院中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金:云南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤细胞的放射增敏作用及机制研究
- 2014年
- 目的探讨印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤放射敏感性的影响及相关分子机制。方法通过基因转染技术,将真核表达质粒pEGFP—C3一PHLDA2导入骨肉瘤U20S细胞,经G418持续筛选获得稳定高表达PHLDA2蛋白的亚克隆细胞。实验分为3组:不转染的空白对照组,U20S;稳定转染pEGFP—C3质粒的阴性对照组,U20S—neo;pEGFP—C3-PHLDA2质粒的稳定转染组,U20S—PHLDA2。采用CKK8比色法测定4和8Gyx射线照射后细胞的增殖活性;克隆形成实验观察0~8Gy照射后细胞的存活能力;AnnexinV/PI染色法检测8Gy照射后的细胞凋亡;Westernblot测定蛋白的表达变化。建立人骨肉瘤裸鼠移植瘤模型,观察10Gy照射后PHLDA2基因的体内增敏效应。结果经筛选获得的骨肉瘤亚克隆U20S—PHLDA2细胞中PHLDA2蛋白表达上调(t=13.73,16.28,P〈0.05)。与U20S和U20S-neo组相比,PHLDA2高表达组在4和8Gy的增殖能力明显降低(t=5.00~8.23,P〈0.05),2~8Gy的克隆形成能力明显降低(t=2.52~-1.26,P〈0.05);同时照后裸鼠移植瘤的生长抑制作用显著提高(t=3.27、2.91,P〈0.05)。8Gy照后,PHLDA2高表达组的凋亡率为(17.97±1.69)%,高于U20S组的(6.47±1.01)%和U20S—neo组的(7.15-t-O.96)%(t=10.11、9.61,P〈0.05);同时Caspase-3活性明显提高(t=11.26、10.72,P〈0.05)。结论外源性PHDLA2基因在U20S细胞中稳定过表达能够提高骨肉瘤对x射线的敏感性,其机制可能是通过增强Caspase.3的活性、促进射线诱导的细胞凋亡作用实现的。
- 李懿王运来刘均李继聪陈宏
- 关键词:骨肉瘤印记基因细胞凋亡
- 印记基因PHLDA2表达与骨肉瘤辐射敏感性的研究被引量:2
- 2013年
- 目的探讨印记基因PHLDA2在骨肉瘤放疗疗效评估中的意义。方法采用免疫组织化学S-P法和RT-PCR方法在36例放射治疗后的骨肉瘤组织及其配对的癌旁组织中检测PHLDA2分子的表达,并结合临床病例参数及辐射敏感性探讨PHLDA2表达的意义。结果放射治疗后的骨肉瘤组织中PHLDA2分子mRNA和蛋白的表达一致,明显低于配对的癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05);辐射缓解组中PHLDA2的表达阳性率高,与辐射抵抗组差异有统计学意义(P<0.05);但PHLDA2表达与骨肉瘤患者的性别、年龄、病理分型不相关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论骨肉瘤组织中PHLDA2的表达显著降低,其表达可作为一种骨肉瘤放疗疗效评估的参考指标,值得在临床上推广运用。
- 李懿陈宏刘均林旭黄丽春李继聪
- 关键词:骨肉瘤放射疗法
- DNA甲基化检测技术进展及经验总结被引量:1
- 2015年
- DNA甲基化作为一种表观遗传学元件,参与正常细胞的发育分化、基因组印记、X染色体失活和染色质重构等生命过程,在肿瘤演进中亦发挥重要作用。为满足不断深入的研究需求,DNA甲基化检测技术得到了较快的发展,检测的灵敏度和特异度不断提高,并逐步从个别位点向高通量检测发展。该文综述了目前常用的DNA甲基化分析方法,并简要总结了其在应用中的关键点和经验。
- 李懿李光润陈宏
- 关键词:表观遗传学DNA甲基化