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p50PIK基因重组腺病毒的构建及对Hela细胞的影响: 2011年; 目的构建携带P50基因的重组腺病毒载体，观察其感染宫颈癌Hela细胞后对p-AKT（Thr308）的影响。方法以PcDNA3．1-p50PIK质粒为模板，构建带有p50PIK基因的重组腺病毒质粒Ad-p50PIK—GFP，酶切鉴定后经PacI线性化后转染HEK293包装细胞，观察细胞内绿色荧光蛋白（GFP）表达情况，并进行3轮扩增，收获带有目的片段的腺病毒。将重组腺病毒Ad．p50PIK—GFP感染Hela细胞并通过Western blot技术检测其对p-AKT的影响。结果将Ad．p50PIK-GFP经XhoI和KpnI双酶切鉴定和琼脂糖电泳，在1400bp附近有目的条带，送测序结果与GeneBank报道的序列完全一致，表明重组腺病毒Ad—p50PIK—GFP构建成功；然后将其转染HEK293细胞，绿色荧光表明Ad—p50PIK-GFP在HEK293包装细胞中成功表达；用SDS—PAGE电泳方法检测p50对Akt磷酸化的影响，结果表明高表达蛋白p50明显促进AKT的磷酸化（Thr308）。结论成功构建重组腺病毒Ad—p50PIK，p50在宫颈癌Hela细胞株中的过表达可使p-AKT表达升高。; 李进曹小年陈成杨锐胡俊波王晶; 关键词：重组腺病毒 HELA细胞 P-AKT

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国家自然科学基金(3080-0569)