国家高技术研究发展计划(2002AA205041)
- 作品数：58 被引量：258H指数：11
- 相关作者：金岩杜岩王国芳吴织芬陈发明更多>>
- 相关机构：第四军医大学第四军医大学西京医院第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学自动化与计算机技术更多>>
- 从人外毛根鞘细胞分离获取黑素母细胞被引量：2
- 2007年
- 目的:毛囊黑素细胞是皮肤黑素细胞的储库,含有黑素母细胞甚至黑素干细胞,具有更强的增殖潜力。观察人毛囊外毛根鞘细胞中黑素细胞的分布特征,尝试分离获取黑素母细胞。方法:实验于2003-04/2006-04在解放军第四军医大学组织工程实验中心和武警医学院附属医院皮肤科完成。消化游离流产胎儿头皮(产妇同意由医院处理流产胎儿)毛囊,用黑素细胞培养基接种,原代培养人外毛根鞘细胞,并观察外毛根鞘细胞和黑素细胞的分布。待原代外毛根鞘细胞融合时,加入胰酶消化,大约一半细胞漂浮时,加入含体积分数为0.10小牛血清的DMEM终止,轻柔吹打,弃去飘浮细胞。用DMEM清洗原瓶后加入黑素细胞培养基,继续培养,寻找黑素(母)细胞克隆。并采用胰酶消化法纯化培养黑素细胞。结果:在贴壁生长的毛根周围发现了外毛根鞘细胞团,以毛囊隆突部位为中心呈纺锤形排列。其中含有黑素细胞:临近毛囊漏斗部和毛球部的黑素细胞体积较大,有两个或者多个长一些的树突;隆突部位周围的黑素细胞体积偏小,树枝少而短。经纯化培养获得黑素(母)细胞集落,集落中心细胞呈短梭形,折光性很强,排列密集,增殖活跃;边缘细胞变大,树突延长;集落之间散在分布的黑素细胞体积更大,树突延长,数量增多至3个以上。结论:实验观察到人毛囊外毛根鞘细胞中有黑素细胞分布,并选择性培养获得黑素细胞克隆,分析克隆中心可能含有黑素母细胞。
- 卢涛金岩刘源雷娟刘晓亮
- 关键词：黑素细胞
- 构建人牙囊细胞三维立体培养模型及其用于牙周组织工程的可行性被引量：2
- 2005年
- 目的:构建人牙囊细胞的体外三维立体培养模型,探讨两种支架材料用于牙周组织工程的可行性。方法:实验于2003-01/2004-10在第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心完成。采用酶消化法原代培养人牙囊细胞,传代扩增后,取第4代细胞分别接种于煅烧骨和Ⅰ型胶原膜三维支架上,体外继续培养1周,进行细胞记数和扫描电镜观察细胞生长状况。结果:细胞在两种材料上均能良好贴附并增殖,扫描电镜可见人牙囊细胞在这两种支架材料上均黏附良好,增殖旺盛,伸展充分,并有基质分泌。结论:煅烧骨和冻干胶原膜均有望成为牙周组织工程支架材料。
- 常秀梅刘宏伟金岩刘源张克荣李华峰
- 关键词：细胞培养牙囊细胞壁
- 制备复合生长因子的缓释微球并考察其对细胞的影响被引量：2
- 2004年
- 目的:制备复合碱性成纤维细胞生长因子的可降解缓释微球,考察其生物活性保存情况,以及其对上皮细胞的作用。方法:采用改良的乳化冷凝法交联制备明胶缓释微球,将其加入上皮细胞的培养液中,用细胞计数法、四甲基偶氮唑盐微量反应比色法(MTT法)测定细胞增殖情况。结果:缓释微球平均粒径12.36±3.56μm;培养1 d后各组细胞计数、吸光度(D)值差异均无显著性意义;5d后,缓释微球组细胞计数、吸光度(D)值明显高于对照组;7 d后,缓释微球组值仍高于其它组,但差异无显著性意义。结论:复合生长因子的缓释微球制备工艺简便,成球性好;能较长时间持续释放活性生长因子,明显促进细胞增殖。
- 黄沙金岩吴红刘涛
- 关键词：缓释微球细胞计数法
- 右旋糖酐基骨形态发生蛋白2微凝胶缓释系统的理化性能被引量：1
- 2005年
- 目的观察载骨形态发生蛋白2(BMP2)的右旋糖酐基微凝胶(BMP2-DEX-MP)冻干剂的理化性能和释药特征。方法采用改良的乳化溶液聚合法制备含BMP2的右旋糖酐基微凝胶(BMP2-DEX-MP),并制得冻干品。观察其形态、粒径、包封率、体外释放度及稳定性。结果所制备的BMP2-DEX-MP在光镜下显示圆整均匀,圆度(1.14±0.08)μm,80.0%微球粒径在(35±10)μm范围之内;BMP2包封率为78.0%,溶涨率为85.9%;冷冻干燥后4℃下可稳定放置6个月以上;体外释药符合双项动力学规律。结论所合成的BMP2-DEX-MP理化性能稳定,具有确定的BMP2缓释作用,表明右旋糖酐基微凝胶可以作为生长因子缓释载体。
- 陈发明吴织芬金岩吴红姜玲王国芳杜岩
- 关键词：骨形态发生蛋白质类右旋糖酐
- 载骨形态发生蛋白2缓释微球载药形式研究被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨右旋糖酐-甲基丙烯酸缩水甘油酯载骨形态发生蛋白2(BMP2-DEX-GMA)凝胶微球的载药形式。方法:采用放射免疫分析法测定。结果:BMP2-DEX-GMA凝胶微球载药形式为内部包埋(DE)与表面吸附(DA)并存,且随着粒径增大,DA减少、DE增加,但统计学检验结果显示粒径为20μm～40μm的凝胶微球载药形式DA、DE间比较无显著性差异(P>0.05)。结论:粒径的改变可以影响BMP2-DEX-GMA凝胶微球的载药形式,但不会改变其释药特征,尚需对载药材料进行改性才能实现对药物的控释。
- 陈发明吴织芬王勤涛金岩王国芳杜岩
- 关键词：包埋
- 右旋糖酐-甲基丙烯酸缩水甘油酯载BMP_2凝胶微球的制备与评价被引量：4
- 2005年
- 目的:探讨利用右旋糖酐-甲基丙烯酸缩水甘油酯(DEX-GMA)制备载骨形态发生蛋白2(BMP2)凝胶微球的可行性和制备工艺,并初步探讨其载药、释药特性。方法:以反应温度、DEX-GMA和乳化剂Span-80的加入量和搅拌速率等为考察因素进行正交试验,筛选BMP2-DEX-GMA凝胶微球的最佳制备工艺并对成品性能进行初步检测。结果:经悬浮聚合法可以制备BMP2-DEX-GMA凝胶微球,优选出的制备工艺条件为反应温度30℃、DEX-GMA用量0.6%、Span-80用量0.06%、搅拌速率300r/min,由此制备的BMP2-DEX-GMA凝胶微球形态良好,粒径在20μm～50μm之间,包封率为(78.52±4.34)%,载药量为(10.68±1.34)%,溶胀率为85.9%,稳定性和再分散性良好。结论:该凝胶微球载药系统制备工艺简单,载药量大,可以负载具有生物活性的药物。
- 陈发明吴红吴织芬王国芳杜岩金岩
- 关键词：右旋糖酐甲基丙烯酸缩水甘油酯骨形态发生蛋白2控释正交试验设计
- 大鼠牙胚细胞团块培养法构建组织工程化牙齿被引量：7
- 2006年
- 目的探索采用大鼠牙胚细胞团块培养法在体内构建组织工程化牙齿的可行性。方法体外培养SD仔鼠磨牙牙胚细胞,并将牙胚细胞团置于离心管内孵育48h后植入近交系SD大鼠肾被膜下,2周取材,苏木精-伊红染色,观察移植物中的组织新生情况。结果牙胚细胞团块在肾被膜下生长良好,形成典型的牙髓牙本质复合体样组织和少量釉质样结构,牙本质小管样结构清晰可见,内侧可见长柱状的成牙本质细胞有序排列,牙髓样组织中可见少量血管样结构。结论以牙胚细胞为种子细胞,用团块培养法在大鼠肾被膜下成功地构建出组织工程化牙冠样结构。
- 于金华金岩史俊南聂鑫庄女亘李玉成
- 关键词：牙胚
- 人牙源性间充质细胞构建牙本质-牙髓复合体样结构的实验研究被引量：13
- 2005年
- 目的以复合生长因子的陶瓷化骨和Collagraft为载体建立人牙源性间充质细胞的体内立体培养模型,构建牙本质-牙髓复合体样结构。方法将经生长因子诱导的人牙源性间充质细胞接种于复合同种生长因子的陶瓷化骨和Collagraft复合材料上,将细胞-支架复合物移植到裸鼠皮下,建立牙源性间充质细胞的体内立体培养模型。4周和10周后取材,对移植物进行组织学观察和人牙本质涎蛋白(DSP)的免疫组化染色。结果10周的实验组标本中,植入细胞在复合生长因子支架上形成了较典型的牙本质-牙髓复合体样结构,人DSP在新生牙本质样组织中呈阳性表达。对照组及4周标本中未观察到此现象。结论用人牙源性间充质细胞和复合生长因子的陶瓷化骨或Collagraft支架材料在裸鼠体内可成功构建出牙本质-牙髓复合体样结构。
- 包柳郁金岩史俊南牛忠英汪平王捍国
- 关键词：牙本质牙髓牙本质-牙髓复合体细胞构建
- 构建无外源性支架材料组织工程真皮的研究
- 2005年
- 目的:探讨运用组织工程方法构建不含有任何外源性支架材料的组织工程真皮组织。方法:以青少年包皮环切术后皮肤组织作为细胞来源,用消化法获得真皮成纤维细胞,用本实验室设计的组织工程皮肤培养系统构建组织工程真皮:在培养液中加入10 ng/ml的bFGF和50 ug/ml的Vitamin C,持续培养4周即形成组织工程真皮。免疫组化检测构建的真皮中细胞外基质(Ⅰ型胶原)的形成情况。结果:所构建的组织工程真皮含有多层细胞,细胞状态良好,染色结果显示形成了大量成熟的细胞外基质,Ⅰ型胶原呈强阳性表达。结论:本实验成功构建了不含外源性的组织工程真皮组织,可以用于下一步构建含有表皮的全层皮肤和动物实验。
- 姚远刘源金岩王新文赵宇李媛
- 关键词：皮肤真皮成纤维细胞
- SD大鼠脂肪组织来源干细胞体外生物学特性研究被引量：16
- 2006年
- 目的:体外培养并鉴定脂肪组织来源干细胞,为相关实验研究奠定基础。方法:分离SD大鼠腹股沟脂肪组织,经过胶原酶消化,加入脂肪组织来源干细胞条件培养基中培养,用流式细胞仪检测分离的脂肪组织来源干细胞并通过诱导检测分离细胞的多向分化潜能。结果:分离培养的细胞具有不断增殖能力,有多向分化能力,存在脂肪组织来源干细胞的相关标志分子。结论:成功建立了脂肪组织来源干细胞的分离培养方法,可用于进一步的实验研究。
- 陆伟金岩张勇杰
- 关键词：脂肪组织干细胞细胞培养
