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胶原支架上体外三维培养成年大鼠心肌细胞被引量：2: 2013年; 背景:前期研究中已经在Atelocollagen胶原支架培养出了具有收缩功能的乳鼠心肌细胞。目的:在Atelocollagen胶原支架上三维培养成年大鼠心肌细胞。方法:将成年SD大鼠心肌细胞经消化培养并纯化后,种植到Atelocollagen胶原支架上进行三维培养。应用倒置显微镜动态观察心肌细胞在Atelocollagen胶原支架上的生长状况;对三维培养的心肌细胞块进行冰冻切片,分别进行肌钙蛋白免疫组织化学和免疫荧光显色,对支架上生长的细胞进行鉴定。结果与结论:成年SD大鼠心肌细胞接种12h开始贴附支架生长,24h与支架汇合、紧密黏附,但心肌细胞并不产生自律性搏动,细胞之间夹杂少量崩解的细胞碎片;48h换液后支架网孔中崩解的细胞被换掉,剩下大部分细胞贴附在支架壁边缘生长。苏木精-伊红染色显示培养48h细胞与支架形成复合体。形态学鉴定证明支架网孔中生长的主要是心肌细胞。免疫组织化学和免疫荧光显色均显示在支架内生长的大部分是心肌细胞,并且紧贴支架,生长良好。; 王慧玲李琼郭志坤孙永琨Kuboki Y; 关键词：细胞外基质材料胶原支架心肌细胞免疫荧光成年大鼠

在Atelocollagen胶原支架上体外三维培养乳大鼠心肌被引量：2: 2010年; 目的在Atelocollagen胶原支架上三维培养具有收缩功能的乳鼠心肌细胞块,为进一步开展心肌组织工程奠定基础。方法乳鼠心肌消化培养、纯化后,种植到Atelocollagen胶原支架上进行三维培养。应用倒置显微镜动态观察心肌细胞在Atelocollagen胶原支架上的生长情况。对三维培养不同时间的心肌细胞块进行石蜡包埋、切片,分别进行HE染色、肌球蛋白免疫组织化学染色、肌球蛋白免疫荧光染色、透射电镜观察,对三维培养的细胞进行全面鉴定。结果心肌细胞种植到Atelocollagen胶原支架上6h开始贴支架生长,培养2d心肌细胞相互融合,并与Atelocollagen胶原支架形成复合体,连同支架一起搏动。培养6d细胞与细胞间结合较前更紧密。培养10d细胞在Atelocollagen胶原支架孔中交织成网状,18～20d细胞充满大部分支架网孔,进一步形成紧密的心肌细胞块。在整个培养过程中,心肌细胞始终保持良好的自律性收缩。形态学鉴定证明,支架网孔中生长的主要是心肌细胞,极少数为纤维样细胞。结论利用Atelocollagen胶原支架能够培养出较为理想的、具有收缩功能的三维心肌细胞块。; 滕伟郭志坤李琼孙庆宁王庆志郁小兵; 关键词：肌球蛋白心肌细胞免疫荧光乳大鼠

细胞三维培养的研究进展被引量：7: 2008年; 近年来,三维培养技术逐渐成为细胞培养领域研究的热点,其利用各种方法及材料,使细胞呈空间立体方式生长,使其更接近于体内生长模式,形成类似体内组织的结构,发挥其功能。由于该项技术既有利于诱导各类细胞的分化定向及分化后表型的维持和增殖,又有望在体外构建与各类组织、器官相应的细胞三维生长类似物或等同物,因此,细胞三维培养技术对组织工程学和临床应用都有重要意义。现就三维培养技术的研究进展作一综述。; 滕伟郭志坤; 关键词：细胞

Ⅰ、Ⅱ型胶原酶分离心肌细胞的效果比较及分析被引量：1: 2013年; 目的比较Ⅰ型和Ⅱ胶原酶对大鼠心肌细胞分离的分离效果,并对其成因进行分析。方法利用Ⅰ、Ⅱ型胶原酶分别消化心肌组织,比较两种酶对心肌细胞的分离效果;采用免疫组织化学、免疫荧光和Western blotting技术检测成年大鼠心肌组织中是否存在Ⅱ型胶原;用大鼠剑突软骨部组织的Ⅱ型胶原和心肌组织的Ⅲ型胶原作为阳性对照;用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测Ⅱ型胶原酶试剂的成分。结果Ⅰ、Ⅱ型胶原酶分别消化心肌组织,所获心肌细胞数量分别为(5.66±0.83)×106和(5.61±1.01)×106,心肌细胞存活率分别为(74.17±6.27)%及(75.50±9.07)%,两者差异无显著性。分离的心肌细胞大部分不搏动,极少数细胞保持自律性收缩;Ⅱ型胶原在成年大鼠心肌组织中呈阴性表达,在剑突的软骨组织中呈阳性表达,Ⅲ型胶原在心肌组织中呈阳性表达;Western blotting检测显示,心肌组织中并无Ⅱ型胶原表达;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,Ⅱ型胶原酶试剂是一种包括5种蛋白的混合物。结论成年大鼠心肌组织中无Ⅱ型胶原,用Ⅱ型胶原酶分离大鼠心肌细胞不具有针对性。; 王慧玲郭康郭志坤; 关键词：心肌免疫组织化学免疫荧光

缝隙连接蛋白43在培养的新生大鼠心室肌细胞中的时空表达被引量：2: 2008年; 目的探讨连接蛋白43(Cx43)在培养的新生大鼠心室肌细胞中的时空表达变化规律。方法利用免疫细胞化学方法及免疫电镜技术,观测培养2、4、8、10、12、16、20、26、30d大鼠心室肌细胞Cx43蛋白的表达;结果培养第2d心肌细胞开始表达Cx43,表达部位主要在细胞质中,呈点状;第4d细胞质中点状分布减少,主要集中在细胞膜连接处;第10d在细胞连接处增多,呈条、链状分布;以后基本恒定,无明显变化;第30d时Cx43颗粒出现紊乱分布;结论Cx43在培养的新生大鼠心肌细胞中的表达随培养时间延长而出现位置和量的变化,与培养心肌细胞的生长、发育及功能变化一致。; 郑先杰郭志坤徐振平王庆志王晓冰; 关键词：连接蛋白43 心室肌细胞细胞培养组织化学新生大鼠

Atelocollagen胶原支架在三维培养大鼠心肌中的生物相容性被引量：3: 2008年; 目的探讨atelocollagen胶原支架在三维培养心肌细胞中的生物相容性,寻找三维培养心肌组织的条件和理想的支架材料。方法原代培养的大鼠心肌细胞经纯化后,将细胞悬液接种到胶原纤维支架上,动态观察第8d、16d、20d在atelocollagen胶原纤维支架上生长的细胞的变化,并进行光镜、扫描电镜和透射电镜观察。结果接种后第1d形成细胞-胶原支架搏动复合体,细胞与支架一起有节律的跳动;心肌细胞填充于支架网孔周围,并与支架融合;在透射电镜下,3个时间段均发现细胞与支架紧密相贴,融合在一起;在扫描电镜下发现,细胞在胶原纤维支架上贴附并充分伸展,相互融合成片。结论atelocollagen胶原支架的生物相容性较好,可作为三维培养细胞和组织的天然材料,适于心肌组织的立体培养。; 郑先杰郭志坤常联生王晓冰王庆志郁小兵; 关键词：心肌细胞生物相容性

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