黑龙江省自然科学基金(C180103)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：计红杨焕民袁建斌郭文晋刘艳芝更多>>
- 相关机构：黑龙江八一农垦大学黑龙江职业学院黑龙江省农垦总局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶基因RNA干扰表达质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因RNA干扰表达质粒,并进行鉴定。方法利用RNAi Designer等网络在线RNA干扰设计软件设计3条可能会干扰籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因表达的插入DNA序列:shRNA-ENO1-350、shRNA-ENO1-892、shRNA-ENO1-591,将体外合成的3条干扰序列分别与线性化的pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建ENO1 RNA干扰表达质粒,在Lipofectamine 2000的介导下转染原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞,转染48 h后,荧光倒置显微镜下观察GFP的表达;实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞中ENO1基因mRNA的水平及蛋白的表达水平。结果 pGPU6/GFP/Neo-shDNA重组质粒经单酶切及测序证实构建正确;转染后48 h,转染重组质粒的颗粒细胞在荧光倒置显微镜下可见较强的绿色荧光,转染效率可达60%;与培养液组、转染试剂组和无关序列干扰组(shNC)相比,shRNA-ENO1-350组颗粒细胞中ENO1基因mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),其他各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因RNA干扰表达质粒,在原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞中,其表达量显著下降,为后续有关ENO1功能的研究奠定了基础。
- 张虹亮计红耿仁德薛琳琳杨焕民王建发司鸿飞王慧甘艺
- 关键词：RNA干扰颗粒细胞籽鹅
- 籽鹅不同等级卵泡生殖相关激素受体基因的表达被引量：2
- 2017年
- 目的:检测籽鹅不同等级卵泡不同生殖相关激素受体mR NA的表达。方法:选用1只8月龄产蛋期籽鹅,处死后分离各级别卵泡(F1、F2、F3、F4、F5、SYF、LWF),采用实时荧光定量PCR方法检测促卵泡激素受体(FSHR)、促黄体生成素受体(LHR)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)6种生殖相关激素受体mR NA的表达量变化。结果:SYF和LWF中LHR、GHR和IFGBP-1 mR NA表达量较低,而F1-F5级卵泡中表达量较高;SYF和LWF中ERβmR NA表达量较高,而等级卵泡中表达量较低。结论:本实验研究了不同等级卵泡FSHR、LHR、ERα、ERβ、GHR和IGFBP-1 mR NA的变化规律,为研究禽类产蛋机制提供基础数据。
- 计红马莉张伟宏李悦连帅郭文晋袁建斌郭景茹刘艳芝甄莉杨焕民
- 关键词：籽鹅卵泡激素受体表达量
