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正常孕妇与妊高症患者胎盘中Ghrelin、GHS-R mRNA的表达研究被引量：6: 2009年; [目的]通过比较正常孕妇与妊高症患者胎盘中Ghrelin及其受体GHS-R mRNA水平的变化,探讨Ghrelin及其受体与妊高症的发病是否相关。[方法]采用实时荧光定量RT-PCR技术检测了正常孕妇胎盘和妊高症患者胎盘中Ghrelin及其受体GHS-R mRNA水平相对表达量的变化。[结果]正常孕妇胎盘组织中mRNA水平与妊高症患者胎盘组织中mRNA水平无显著性差异,但Ghrelin受体GHS-R在两者之间的mRNA水平有显著性差异(P<0.05)。[结论]Ghrelin及其受体在妊高症患者和正常孕妇胎盘中表达的相对变化表明,Ghrelin受体缺乏可能成为妊高症发病的因素之一。; 姜丽萍刘德斌杜晨光李海军赵鹏伟钱英红杨燕燕曹贵方; 关键词：妊高症胎盘实时定量RT-PCR

蒙古绵羊Ghrelin基因的克隆和原核表达被引量：2: 2011年; 为了克隆蒙古绵羊Ghrelin基因,构建其原核表达载体,并检测其在大肠杆菌中的表达情况。本研究用RT-PCR方法从蒙古绵羊胃组织mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆到pMD-19T载体后进行序列分析。将测序正确的cDNA序列与原核表达载体pET-32a(+)连接,并转化BL21(DE3)大肠杆菌。经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明克隆的蒙古绵羊Ghrelin基因序列与已发表基因序列有2个碱基的差异,该碱基的变化并不影响氨基酸序列,目的蛋白主要以可溶性形式存在,Western-blot初步证实了所获得的融合蛋白是特异的。本研究成功构建了蒙古绵羊Ghrelin基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究蒙古绵羊Ghrelin基因的功能提供参考。; 梁建荣曹贵方赵鹏伟温世勇程兰玲凃勇; 关键词：GHRELIN 基因克隆原核表达蒙古绵羊

Ghrelin对绵羊卵母细胞体外受精的影响: 2014年; 为了研究Ghrelin是否参与影响体外受精(IVF)过程,试验运用体外成熟及体外受精技术,向体外受精培养体系中外源性地添加Ghrelin(0μg/L、300μg/L、600μg/L、900μg/L、1 200μg/L)及已被多项研究作为GHS-R的颉颃剂D-Lys3-GHRP-6(0μg/L、10μg/L、100μg/L、1 000μg/L)的方法,对Ghrelin及其受体颉颃剂D-Lys3-GHRP-6对绵羊卵母细胞体外受精情况进行检测,初步确定Ghrelin在绵羊体外受精过程中可能扮演的角色。结果表明:外源性添加的Ghrelin在绵羊卵母细胞体外受精过程中并没有发挥明显的生理作用,说明Ghrelin能促进卵母细胞的体外成熟而不能促进体外受精。; 张冠华杨燕燕曹贵方; 关键词：GHRELIN 绵羊卵母细胞受精率

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响: 2009年; [目的]探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1mRNA表达的影响。[方法]试验分为4组:I组,空白对照组;II组,脂质体组;III组(SCON),20μmol/L正义寡核苷酸组;IV组(ASCON),20μmol/L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1mRNA表达情况的变化。[结果]VEGFmRNA在I、II组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长无明显变化;在III组VEGFmRNA表达略有降低,但与I和II组间无显著性差异(P>0.05);IV组(反义寡核苷酸组)的VEGFmRNA表达量显著下降(P<0.05),并且随着时间延长逐渐下降。VEGF受体FLT-1mR-NA的表达与VEGF相似。[结论]反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用。; 姜丽萍祝啸先游存厚乌日古木拉王芳张文娟刘德斌杜晨光李海军包福祥赵鹏伟鲍庆江曹贵方; 关键词：生长素受体寡核苷酸类反义

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响(摘要)(英文): 2009年; [目的]探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1mRNA表达的影响。[方法]试验分为4组:I组,空白对照组;II组,脂质体组(不加寡核苷酸);III组(SCON),20μmol/L正义寡核苷酸组;IV组(ASCON),20μmol/L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1mRNA表达情况的变化。[结果]VEGF和Flt-1熔解曲线表明扩增效果好,培养24h,VEGFmRNAI组相对表达量为0.0769,II组为0.0768,III组为0.0769,3组之间无显著性差异(P>0.05),IV组VEGFmRNA相对表达量下降为0.0242,且与I、II、III组有显著性差异(P<0.05)。培养36h,前3组相对表达量分别为0.059,0.051,0.0514,3组之间无显著性差异(P>0.05),第IV组为0.0242,与前3组比较有显著性差异(P<0.05)。培养48h,前3组相对表达量分别为0.061,0.0552,0.0521,3组之间无显著性差异(P<0.05),第IV组为0.0115,与前3组比较有显著性差异(P<0.05)。培养24h,Flt-1mRNAI组相对表达量为0.0786;II组为0.0782,III组为0.0781,3组之间无显著性差异(P>0.05),IV组Flt-1mR-NA相对表达量下降为0.0256,且与I、II、III组有显著性差异(P<0.05)。培养36h,前3组相对表达量分别为0.0781,0.0784,0.0782,3组之间无显著性差异(P>0.05),第IV组为0.0228,与前3组比较有显著性差异(P<0.05)。培养48h,前3组相对表达量分别为0.0691,0.0780,0.0693,3组之间无显著性差异(P>0.05),第IV组为0.0215,与前3组比较有显著性差异(P<0.05)。可见,VEGF受体Flt-1mRNA的表达与VEGF相似。二者均在I组、II组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长没有明显变化;在III组表达轻微下降,但与I组和II组无显著性差异(P>0.05);IV组的表达量显著下降(P<0.05),并且随着时间的延长至逐渐下降。[结论]反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用。; 姜丽萍祝啸先游存厚乌日古木拉王芳张文娟刘德斌杜晨光李海军包福祥赵鹏伟鲍庆江曹贵方; 关键词：生长素受体寡核苷酸类反义

Ghrelin对绵羊卵母细胞体外成熟的影响: 2018年; 该研究旨在探讨外源Ghrelin对绵羊卵母细胞体外成熟的调控作用。在成熟培养液中分别添加浓度为0、100、200和300ng/m L的Ghrelin,进行绵羊卵母细胞体外培养,成熟培养24h,观察统计处于MII期的细胞数目。选择最佳添加浓度,在体外成熟培养0、6、8、14、16、24h,通过Hoechst33342染色持续检测卵细胞中细胞核成熟随时间变化,并对不同培养时期细胞进行实时荧光定量PCR检测,以证明细胞质量相关基因的相对表达量。成熟培养24h时,添加0、100、200、300 ng/m LGhrelin组卵母细胞成熟率分别为:63.7%(220/345)、69.4%(230/332)、85.6%(270/316)、75.9%(231/305)。200ng/m L Ghrelin组显著高于对照组(P<0.01),其余组并未显著高于对照组(P<0.05);染色证明:200ng/m L Ghrelin组于成熟培养0h、6h、14h、16h到达GV、GVBD、MI、MII期(P<0.05);实时荧光定量PCR证明:对卵母细胞成熟GV、GVBD、MI、MII期,Ghrelin受体基因GH-SR-1a和卵母细胞质量相关基因OCT-4、GLUT1和IFNT的相对表达时间提前,但并不显著影响这些基因的表达水平。外源Ghrelin参与了绵羊卵母细胞的体外成熟调控,可在没有改变其成熟过程的前提下加速卵母细胞的体外成熟过程,但对绵羊卵母细胞的质量和进一步发育相关的基因的表达没有明显影响。; 王大清郭继彤李喜和赵高平曹贵方; 关键词：绵羊卵母细胞 GHRELIN 体外成熟

Ghrelin参与FSH对牛卵丘细胞体外增殖的调节: 2013年; 为了解牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)体外成熟过程中Ghrelin对卵丘细胞增殖的可能调节及其与促卵泡素(Follicle-stimulating hormone,FSH)在卵丘细胞增殖过程中可能的调控关系,本研究运用实时定量RT-PCR技术首先检测了体外不同成熟时间(0、8、16和24h)牛卵丘细胞中Ghrelin mRNA的相对表达差异,然后在体外成熟8h,探讨了FSH与FSH受体结合抑制剂(FSH binding inhibitor,FSHBI)对Ghrelin mRNA表达的影响,以及FSH与Ghrelin受体抑制剂([D-Lys3]-GHRP-6)对增殖相关基因PCNA,BCL-2和BAX mRNA表达可能的调节作用;最后利用细胞增殖活性测定技术检测了FSH与[D-Lys3]-GHRP-6对卵丘细胞增殖活性的影响。结果显示:(1)Ghrelin mRNA相对水平在体外成熟8h卵丘细胞中最高,显著高于0和24h组(P<0.05);(2)0.01IU·mL-1FSH添加组与对照组相比,Ghrelin mRNA表达显著升高(P<0.05);在添加400ng·mL-1 FSHBI后,GhrelinmRNA表达下降且差异显著(P<0.05);(3)添加FSH后,PCNA和BCL-2mRNA表达以及卵丘细胞增殖活性显著升高(P<0.05);添加[D-Lys3]-GHRP-6后,上述基因表达水平与增殖活性显著降低(P<0.05)。上述结果表明,Ghrelin参与FSH对体外成熟过程卵丘细胞增殖的调节,本研究结果有助于进一步了解FSH调控卵泡发育的机制。; 米焱张伶俐李海军杜晨光曹贵方王秀梅; 关键词：增殖 FSH GHRELIN 实时定量PCR

Ghrelin对绵羊早期体外胚胎发育的影响被引量：3: 2014年; 为了探讨Ghrelin对绵羊早期胚胎发育的影响。利用绵羊体外受精技术制备绵羊早期胚胎,并分别将受精胚胎放置在4组培养液中进行发育培养:①梯度添加300、600、1 000、4 000、10 000ng·mL-1 Ghrelin的培养液;②梯度添加1、10、200、400ng·mL-1 Ghrelin受体拮抗剂培养液;③含400ng·mL-1 Ghrelin受体拮抗剂且梯度添加300、1 000、4 000ng·mL-1 Ghrelin的培养液;④空白对照组。在胚胎受精第2、3、4、5天时观察胚胎发育情况,分别统计绵羊2-细胞、4-细胞、8-细胞和16-细胞胚胎的卵裂率。结果显示:与空白对照组比较,在培养液中添加不同浓度的Ghrelin的体外受精胚胎的卵裂率均无显著变化(P>0.05);在培养液中梯度添加Ghrelin受体拮抗剂,绵羊2-细胞、16-细胞胚胎的卵裂率无明显变化(P>0.05),但4-细胞、8-细胞胚胎的卵裂率显著降低,且在200、400ng·mL-1时差异极显著(P<0.01);在含受体拮抗剂且梯度添加Ghrelin组,4-细胞、8-细胞胚胎卵裂率有所恢复,但与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。结果表明:Ghrelin对绵羊4-细胞、8-细胞胚胎发育具有促进作用。; 杨燕燕青格勒达来张冠华彭灿泉邵凯苏和田瑛王新奇郭延华乌达巴拉周璇曹贵方; 关键词：GHRELIN 绵羊胚胎卵裂率

Ghrelin对绵羊早期体外胚胎发育调节机制的初步研究被引量：1: 2017年; 【目的】探讨Ghrelin对绵羊早期胚胎发育的调节机制。【方法】将绵羊体外受精早期胚胎在Ghrelin组(300,1 000,10 000ng/mL)、Ghrelin受体拮抗剂D-Lys3-GHRP-6组(10,200,400ng/mL)、D-Lys3-GHRP-6+Ghrelin组(D-Lys3-GHRP-6 400ng/mL,Ghrelin 300,1 000和2 000ng/mL)、空白对照(不加D-Lys3-GHRP-6和Ghrelin)4个组别的胚胎发育液中进行发育培养,采用荧光定量PCR技术分别对各处理不同发育阶段(2-细胞期、4-细胞期、8-细胞期和16-细胞期)绵羊早期胚胎中ERK1、ERK2、P90rsk、Bcl-2、Bax mRNA的表达情况进行检测。【结果】与空白对照组相比,在添加Ghrelin组ERK1、ERK2、P90rsk、Bcl-2基因mRNA的表达表现为显著性上调(P<0.05),且这种上调作用可被D-Lys3-GHRP-6所拮抗;在添加Ghrelin组Bax基因mRNA的表达无显著性变化,但在D-Lys3-GHRP-6组Bax基因mRNA的表达表现为显著性上调(P<0.05)。【结论】Ghrelin可级联激活MAPK信号通路,抑制促凋亡基因Bax的表达、促进抗凋亡基因Bcl-2的表达,进而促进绵羊早期胚胎的发育。; 杨燕燕达来张冠华彭灿泉郭延华曹贵方; 关键词：GHRELIN 绵羊早期胚胎 MAPK 凋亡

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国家自然科学基金(30860201)

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