云南省自然科学基金(2005C0013R)
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 相关作者：周轶平胡智兴李玛琳罗敏郑春兰更多>>
- 相关机构：昆明医学院昆明医学院第二附属医院法国国家科学研究中心更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金云南省应用基础研究基金云南省科技厅-昆明医学院应用基础研究联合专项资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 四种胞外基质支持人胚胎干细胞的生长:效果有差异吗?被引量：1
- 2010年
- 背景:胞外基质在维持人胚胎干细胞的自我更新和未分化状态方面具有重要作用,建立无血清无饲养层、成分明确的人胚胎干细胞培养系统是人胚胎干细胞运用于临床移植研究的前提。目的:比较4种胞外基质对于维持人胚胎干细胞生长的效果差异。方法:常规复苏人胚胎干细胞株BG02,设立4组,分别将人胚胎干细胞转至预铺有纤粘连蛋白、Ⅳ型胶原、Matrigel、层粘连蛋白的培养板上,均在含bFGF,TGFβ及ITS无血清培养基中培养。测定细胞集落贴壁率及分化率,流式细胞仪检测人胚胎干细胞特异性分子标志Oct-4及Nanog的表达,RT-PCR检测胞外基质受体的表达。结果与结论:与纤粘连蛋白组、Ⅳ型胶原组比较,Matrigel组和层粘连蛋白组人胚胎干细胞集落的贴壁率均明显增加(P<0.05),分化率均明显降低(P<0.05),Oct-4,Nanog阳性率均明显升高(P<0.05),后2组各项指标比较无明显差异(P>0.05)。Matrigel组、层粘连蛋白组人胚胎干细胞高表达整合素受体integrinα5,integrinα6和integrinβ1;而纤粘连蛋白组、Ⅳ型胶原组3种整合素受体的表达均明显降低。提示Matrigel和层粘连蛋白可以较好支持人胚胎干细胞在无饲养层体系生长,而纤粘连蛋白和Ⅳ型胶原无法维持人胚胎干细胞的未分化状态;人胚胎干细胞integrin受体家族激活状态的不同,可能是不同胞外基质对于维持人胚胎干细胞自我更新产生差异的原因之一。
- 胡智兴罗敏周轶平梁道明
- 关键词：胞外基质自我更新整合素人胚胎干细胞
- 人胚胎干细胞在人源和鼠源饲养层上的生长特性比较被引量：3
- 2009年
- 背景:不同来源饲养层条件下,人胚胎干细胞是否具有相同或相似的生物学特性尚不清楚,该问题的解决有利于建立标准化的饲养层体系。目的:观察比较人胚胎干细胞在人源和鼠源饲养层上的生长特性是否相同?设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-09/2009-02在中国科学院昆明动物所完成。材料:清洁级孕12.5～13.5d的ICR小鼠2只,由昆明医学院动物中心提供。永生化人成纤维细胞由美国约翰霍普金斯大学医学院建系并赠送,人胚胎干细胞株BG02由中国科学院昆明动物所提供。方法:无菌条件下取ICR胎鼠,组织块胰酶消化法分离培养小鼠胚胎成纤维细胞,永生化人成纤维细胞按常规培养,两种细胞经γ射线处理后,以2.5×104/cm3接种在明胶包被的6孔板中。取人胚胎干细胞,分别接种在小鼠胚胎成纤维细胞或永生化人成纤维细胞饲养层上,加入含β-巯基乙醇的DMEM/F12培养基,使用前添加碱性成纤维细胞生长因子。主要观察指标:两种饲养层上的人胚胎干细胞的形态、特异性标记表达、Oct-4阳性率、细胞倍增时间。结果:培养在小鼠胚胎成纤维细胞和永生化人成纤维细胞饲养层上的人胚胎干细胞,其形态相似,呈圆形或椭圆形集落;均表达SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-60,TRA-1-81和Oct-4,但不表达SSEA-1。与小鼠胚胎成纤维细胞饲养层比较,永生化人成纤维细胞饲养层上人胚胎干细胞Oct-4阳性细胞率明显升高(P<0.05),倍增时间明显延长(P<0.05)。结论:人源和鼠源成纤维细胞饲养层上的人胚胎干细胞体外培养生物学特性存在明显差异。
- 胡智兴周轶平吴兰鸥罗敏郑春兰李玛琳
- 关键词：人胚胎干细胞饲养层成纤维细胞
- 肝细胞生长因子促进人胚胎干细胞向神经前体细胞分化被引量：3
- 2010年
- 目的:研究肝细胞生长因子(HGF)诱导人胚胎干细胞(hESCs)定向分化为神经前体细胞(NPs)的作用。方法:诱导拟胚体(EBs)生成,随机将EBs分为正常对照组、G5 supplement组、HGF组和HGF+G5 supple-ment组,悬浮培养诱导7d,转移至多聚赖氨酸/层黏连蛋白(20mg/L)包被的24孔培养板中继续培养7-10d。免疫荧光染色鉴定NPs和体外分化能力,流式细胞仪检测各组巢蛋白(nestin)阳性细胞的比例,RT-PCR检测音猥因子(Shh)对NPs的脑区标记基因表达的影响。结果:HGF+G5可诱导hESCs定向分化为NPs,HGF+G5组的nestin阳性的NPs比例(87.3%±3.9%)显著高于其它组(P<0.05),NPs具有分化成神经元、少突和星形胶质细胞的能力;HGF+G5诱导时间对于NPs的分化有影响,7d时nestin+细胞比例达到最大;Shh可使NPs表达腹侧化基因,后脑标记表达上调,而前脑标记表达下调。结论:含HGF和G5的无血清神经分化体系可有效诱导hESCs神经分化,是研究神经诱导的良好体系。
- 胡智兴耿菊敏梁道明
- 关键词：肝细胞生长因子胚胎干细胞神经前体细胞
- 人胚胎干细胞在血清和无血清培养体系中的特性比较被引量：3
- 2010年
- 目的探讨血清培养体系和无血清培养体系对人胚胎干细胞(hES cells)生长特性的影响。方法将人胚胎干细胞株BG02接种在丝裂霉素C处理灭活的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,分别在含血清hES完全培养基或无血清培养基中连续培养25～30代。在不同培养体系下比较人胚胎干细胞形态、集落贴壁率;运用BrdU掺入法检测人胚胎干细胞增殖,用细胞计数法计算细胞倍增时间;采用免疫荧光染色检测人胚胎干细胞特异性分子标志的表达;用流式细胞仪检测人胚胎干细胞Oct-4,Nanog阳性的比例;RT-PCR检测成纤维细胞生长因子(FGFs)家族基因的表达。结果在两种培养体系的BG02细胞都具有人胚胎干细胞的形态特征。在含血清培养体系下,BG02细胞集落贴壁率和表达OCT-4,Nanog的阳性细胞明显高于无血清培养体系(P<0.05)。无血清培养体系中,BG02细胞生长速度明显高于含血清培养体系,细胞倍增时间分别为(33.8±4.3)h、(45.9±5.7)h,(P<0.05)。无血清培养体系的BG02细胞高表达FGF2、FGFR2、FGFR4。结论两种不同培养体系中人胚胎干细胞的体外培养特性存在一定的差异,可能与BG02细胞FGFs家族基因激活有关。
- 胡智兴周轶平吴兰鸥罗敏郑春兰李玛琳
- 关键词：胚胎干细胞血清免疫荧光
- bFGF诱导MEF生成的条件培养基对人胚胎干细胞生长的影响被引量：6
- 2009年
- 为了探讨低浓度bFGF诱导小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)生成的条件培养基对人胚胎干细胞(hESC)生长分化的影响,以系列浓度的bFGF作用于MEF上,收集条件培养基(bFGF-MCM),用于hES2细胞的无滋养层培养。以不添加bFGF而收集的MEF条件培养基(MCM)为阴性对照,同样浓度的bFGF添加于SR培养基(bFGF-SR)为空白对照。通过形态学特征和碱性磷酸酶染色法对hES2的生长分化状态进行评估。结果发现,培养一周内,未分化hES2克隆的比率,阴性对照为23%;空白对照组为13%-31%。当bFGF浓度为0.1,0.3,1,4ng/ml时,bFGF-MCM组未分化克隆的比率分别为44%,74%,77%和78%,与阴性和空白对照组相比,未分化克隆的比率均有不同程度提高,差异有统计学意义(P<0.01)。该结果揭示了经bFGF诱导的MEF细胞所产生的条件培养基具备了维持hES细胞正常生长而不分化的能力。对bFGF-MCM的深入分析,有望更好地了解hESC的生长与分化机制。
- 周轶平ROCHAT AnneHATZFELD AntoinettePEIFFER IsabelleBARBET RomainHATZFELD Jacques李玛琳
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子小鼠胚胎成纤维细胞人胚胎干细胞条件培养基
